Determinarea cantitativă a methemoglobinei în sânge

LECȚIA PRACTICĂ PE BIOLOGIC

Editat de prof. V.A. Dadali, Conf. MN Smertin

A doua ediție, revizuită și completată.

Manualul didactic-metodic este destinat studenților facultăților medicale și medico-profilactice ale universităților medicale care desfășoară cursuri practice în cursul chimiei biologice. Manualul formulează scopul și motivația fiecărei teme, întrebări pentru auto-pregătire, literatură de bază și suplimentară pentru fiecare subiect, etapele sesiunii și metodologia de desfășurare a lucrărilor practice. După fiecare subiect sunt date un chestionar cu răspunsuri, 25% din clasele oferite sub forma unor studii de caz, pentru care elevii utilizează literatura suplimentară, propuse în clasă.

Manualul metodic a fost pregătit de echipa Departamentului de Biochimie al Academiei Medicale de Stat din Sankt Petersburg numită după. I. I. Mechnikov: Astratenkova I.V. Agafonova O.A. Antonova Zh.V. Beyshibaeva Ch.R. Golovanova N.E. Dzhangulova N.E. Zaitseva N.K. Ivanova LV Kuleba V.A. Makarova M.N. Pavlova RN Smertina M.N. Sokolova EA editat de prof. VA Dadali, Conf. MN Smertin.

Manualul metodic aprobat de Consiliul Academic al Academiei Medicale de Stat din St. Petersburg. II Mechnikov.

1. Tema 27. ² Sânge chimie. Schimbul de cromoproteine.

Locul de desfășurare este Departamentul de Biochimie.

Durata lecției este de 180 de minute.

2. Scopul lecției. Pentru a studia proprietățile fizice și chimice, compoziția chimică și funcțiile biologice ale sângelui. Să se familiarizeze cu metoda de determinare a conținutului de bilirubină în sânge și să sublinieze importanța acestei metode în studiile clinice.

3.1. Studentul trebuie să știe.

3.1.1. Compoziția chimică și proprietățile fizico-chimice ale sângelui.

3.1.2. Structura hemoglobinei și a derivatelor sale.

3.1.3. Sinteza și descompunerea hemoglobinei.

3.1.4. Valoarea diagnosticului determinării bilirubinei în ser.

3.2. Studentul trebuie să poată:

3.2.1. Utilizați pipeturi, ustensile de măsură, biurete, lucrați pe un colorimetru fotoelectric.

4. Motivația. cunoștințele și aptitudinile dobândite în lecție sunt necesare în studiul diferitelor discipline de igienă și clinică în activitatea lor viitoare ca terapeuți medicali.

5. Sarcina de auto-pregătire:

5.1. Repetați prelegerea pe această temă: schimbul de cromoproteine

5.5. Musil Ya. Novakova O. Kunz K. ² Biochimia modernă în scheme. M. ² Mir2, 1984. a. 95-101, 183-191.

5.6. Pentru a studia materialele standului ²Sistemul și principiul de funcționare a colorimetrului fotoelectric².

5.7. Pregătiți-vă pentru controlul verificării.

6. Întrebări pentru auto-pregătire:

6.1. Compoziția chimică a sângelui.

6.2. Proprietățile fizico-chimice ale sângelui.

6.3. Clasificarea și funcția proteinelor din sânge.

6.4. Caracterizarea cromoproteinelor (structură, proprietăți, funcții).

6.5. Proteine ​​care conțin proteine: structura, proprietățile, funcțiile.

6.6. Gem-conținând enzime: structura, proprietăți, funcții. Exemple de enzime care conțin heme.

6.7. Derivații normali și patologici ai hemoglobinei, mecanismul formării lor.

6.8. Efectul cooperativ asupra exempluului de oxigenare a hemoglobinei. Factorii care afectează afinitatea hemoglobinei pentru oxigen.

6.9. Methemoglobina: structura, formarea, proprietățile, reacția de restaurare.

6.10. Methemoglobinemia: definiție, clasificare, tratament. Ce enzime pot provoca methemoglobinemia?

6.11. Hemoglobinopatia (anemie cu celule secera) și talasemie.

6.12. Funcția respiratorie a sângelui.

6.13.Mapuri de sinteză a hemiei.

6.14. Porfirie, diagnosticul de porfirie, clasificare.

6.15. Etapele de descompunere a hemoglobinei.

6.16. Ce este bilirubina indirectă ² și ² indirectă: mecanisme de educație, proprietăți.

6.17. Valoarea diagnosticului determinării bilirubinei totale ² și a fracțiilor sale în serul de sânge.

6.18. Tipuri de icter și diagnosticul diferențial al acestora.

6.19. Principiul metodei de determinare a bilirubinei în ser.

7. Etapele formării, controlul învățării și distribuției timpului de studiu.

7.1 Afirmația problemei. 7.2. Controlul nivelului inițial al cunoașterii. Selecția materialului teoretic. 7.4. Achiziționarea de abilități practice. 7.5. Rezumând lecțiile.

Spune profesorul. Controlul testului. Interogarea studenților, discuții. Lucrări de laborator. Spune profesorul.

Exemplu de bilet de control de verificare:

1) Enzime care conțin gem: structură, proprietăți, funcții. Exemple de enzime care conțin heme.

2) Ce reprezintă bilirubina serică directă ² și ² indirectă ², locul de formare și valoarea diagnosticului.

Determinarea cantitativă a methemoglobinei în sânge

Obiectiv: să se familiarizeze cu metoda de determinare cantitativă a methemoglobinei în sânge.

Motivarea: methemoglobina se formează ca urmare a oxidării fierului în hemoglobina

NADPH + H + se formează în reacțiile cheie ale SPC

NADH + H + se formează în reacțiile cheie de glicoliză.

Methemoglobinemiile dobândite sunt împărțite în funcție de cauza endogenă și exogenă. Methemoglobinemia endogenă poate să apară cu diferite afecțiuni patologice sau boli care sunt însoțite de deficiență AOS (de exemplu: enterita cronică, hepatită cronică, diabet zaharat și altele).

Methemoglobinemia exogenă apare în cazul consumului excesiv de oxidanți în corpul uman, inclusiv a medicamentelor cu proprietăți de oxidanți. Deoarece MetHb pierde capacitatea de a transporta O2. Methemoglobinemia este însoțită de semne de hipoxie hemică, care sunt cauzate de diferite tulburări în metabolism. Pentru a preveni și a trata complicațiile, este necesară monitorizarea nivelului de MetHb în sânge.

O metodă rapidă, necomplicată pentru determinarea conținutului de MetHb în sânge este metoda fotocolorimetrică a lui LE Gorn. Această metodă este adecvată pentru examinarea de rutină a persoanelor în contact cu formarea MetHb și studii de igienă toxiinfecție industriale și alimentare de anumiți compuși chimici (nitriți,

oxizi de azot, perechi de nitrobenzen, nitroanilină, hexacianoferrat de potasiu, clorat de potasiu etc.), în timp ce efectuau studii toxicologice la animale.

Probele sunt lăsate să stea timp de o oră la temperatura camerei, apoi soluțiile sunt determinate fotometric pentru a determina densitatea lor optică. Condiții de colorimetrie: filtru roșu (lungime de undă 610 nm), cuvă - 10 mm, comparație cu apă.

Pentru a calcula procentajul methemoglobinei în proba de testare, utilizați formula:

X% MetHb = (D MetHb op-D Hb02);

D MetHb 100% -DHb02

DHbO2 este densitatea optică a unei soluții care nu conține methemoglobină (sânge prelevat înainte de semințele de șobolan);

DMetHb100%. - densitatea optică a soluției care conține methemoglobină în concentrația maximă;

DMetHbop este densitatea optică a unei soluții care conține methemoglobină într-o concentrație necunoscută (sângele unui șobolan însămânțat cu nitrit).