Metoda microscopică pentru diagnosticul bolilor infecțioase includ pregătire frotiu, culoarea cu metode simple și complicate de colorare, efectuarea de microscopie de imersie pentru a studia morfologia (forma și dispunerea) și proprietățile tinctoriale (raport la colorantului) în scopul identificării genului (Staphylococcus, Streptococcus) sau familie (Epterobactericeae).
Prima etapă a metodei microscopice este de a prepara un frotiu (Fig. 6). Frotiul se face pe un pahar curat diapozitiv, degresate, pe suprafața pe care o picătură de apă ar trebui să se răspândească uniform. Pentru curățarea sticlei este necesar pentru a freca o bucată de săpun și săpun este îndepărtată folosind tifon sau un tampon cu alcool. Pentru a prepara un frotiu pe partea din spate a zonei de alunecare și o marcă este aplicată o mică picătură de apă sau soluție izotonică de clorură de sodiu, în care a fost împărțit materialul testat. Dacă un frotiu este preparat din lichid la materialul de testat sau microorganisme cultivate într-un mediu nutritiv lichid, luând o picătură de bucla de fluid și este distribuit uniform în zona desemnată. Preparatul se usucă la temperatura camerei în aer. Ei bine frotiu subțire preparat se usuca uniform si rapid. Dacă medicamentul este uscarea lentă, medicamentul este încălzit, deținerea de sticlă frotiu sus într-un curent de aer cald deasupra unui arzător cu flacără ridicată. Acest lucru trebuie făcut cu multă atenție, evitând supraîncălzirea accident vascular cerebral, deoarece acest lucru se poate întâmpla proteine de coagulare foarte rapid și dur în citoplasmă de bacterii care se va rupe structura lor. În cazul în care medicamentul nu este uscat complet, atunci când ar, de asemenea, fix corupt. Fixarea de droguri are ca scop: 1) pentru a ucide germenii si este sigur de a face un tratament suplimentar; 2) atașat (fix) pentru frotiu de sticlă, astfel încât să nu fie îndepărtat prin spălare în timpul manipulărilor ulterioare; 3) pentru a face microbi mai sensibile la culoare, acolo ca celulele microbiene moarte pata mai bine decât vie.
fixare metode. Există două moduri de bază de fixare: fizică (căldură) și chimice (utilizarea zăvoare). In bacteriologie practic utilizat în general în fixarea flacăra arzătorului (fixare termică) - metoda aspră, dar păstrând morfologia și raportul de colorant pentru bacterii. În acest scop poziția diapozitiv cursă ascendentă de 3 ori (3-5 secunde) este realizată prin cea mai tare parte a flăcării. În unele cazuri, soluția de fixare lichid (etil și alcool metilic, acetonă, formaldehidă, etc.) care previn autoliza enzimatică a bacteriilor și macromolecule sunt stabilizate prin reticulare chimică, făcând o acțiune mai blândă. Pentru fixarea chimica a medicamentelor este imersat în soluția de fluid Fomafix 5-20 minute. Selectarea fixării depinde de medicamentul care trebuie acoperit (opritoarele lichid utilizate pentru frotiuri de sange, puroi et al.) Și colorarea metodei.
Fig. 6. Schema metodei microscopice
7. Tehnici simple și complexe de colorare
Metoda simplă de colorare. Este un pas și constă dintr-un microscop cu colorant de colorare diapozitiv. Utilizați coloranți de anilină de bază, cum ar fi, pentru magenta, violet de gențiană, albastru de metilen, sub formă de soluții apoase sau hârtii de filtru impregnată colorant care sunt introduse pe frotiul și umezit cu apă. Durata Dyeing este 1-5 minute, după care lamele au fost spălate cu apă, uscate și mikroskopiruyut. În preparatele colorate cu o metodă simplă, putem obține o idee despre forma, localizarea și dimensiunea celulelor microbiene.
Metode de colorare complicate. Complexe metode (diferentiere) colorare (Gram, Ziehl-Nielsen și colab.) Antrenarea utilizarea secvențială a mai multor coloranți și metode suplimentare de preparate de prelucrare. Aceste metode permit bacteriilor să se diferențieze în funcție de structura corpurilor lor, de multe ori superficiale. De exemplu, metoda de colorare Gram permite diferențierea bacteriilor pe structura peretelui lor celular: gram-pozitive (violet) (roșu) bacterii groase si gram negative cu peretele celular subțire.
Exista tehnici speciale de colorare complexe, care sunt folosite pentru a identifica componentele structurale ale celulelor bacteriene: capace, incluziuni citoplasmatice, spori, flageli.