Ratificarea sanitară și epidemiologică de stat
Federația Rusă
4.2. METODE DE CONTROL. BIOLOGICE
ȘI FACTORI MICROBIOLOGICI
Metode sanitaro-bacteriologice
cercetarea în domeniul mediului
controlul mediului, al aerului și al sterilității
în organizațiile medicale
1. Dezvoltat FBUZ "Centrul federal de igienă și epidemiologie" Rospotrebnadzor (AI Vereshchagin, MV Zarochentsev, IV Novokshonova, MA Yaroslavtseva); Institutul Central de Cercetare a Epidemiologiei Rospotrebnadzor (AV Tutelian, S.S. Rozhnova); FBUN Institutul de Cercetări de Dezinfectare Rospotrebnadzor (IM Abramov, LG Panteleeva, NF Sokolov).
2. Recomandat spre aprobare de către Comisie pentru Reglementarea sanitară și epidemiologică de stat în cadrul Serviciului Federal de Supraveghere a Protecției Drepturilor Consumatorului și a Bunăstării Umane.
Șeful serviciului federal
privind supravegherea protecției drepturilor
consumatorii și bunăstarea umană,
Șef de stat sanitar
medicul Federației Ruse
Data introducerii: de la momentul aprobării
4.2. METODE DE CONTROL. BIOLOGICE ȘI
FACTORI MICROBIOLOGICI
Metode de cercetare sanitaro-bacteriologică
obiecte de mediu, aer și control
sterilitate în organizațiile medicale
1.1. Aceste linii directoare sunt destinate profesioniștilor din domeniul de aplicare, care exercită funcțiile de control și supraveghere în domeniul asigurării bunăstării sanitaro-epidemiologică a populației, organizațiile și instituțiile Rospotrebnadzor, organizațiile medicale și alte indiferent de forma juridică de organizare și de forma de proprietate.
1.2. Instrucțiunile metodice stabilesc metodele de cercetare sanitaro-bacteriologică în instituțiile medicale, alte organizații de profil medical. Obiectivele cercetării sanitaro-bacteriologice, care fac obiectul prezentelor orientări, sunt:
· Obiecte de mediu, incl. dispozitive medicale, sonde, catetere, bugete, mănuși de cauciuc și alte articole din cauciuc și metale, material pentru sutură pregătit pentru utilizare etc., salopetă;
1.3. Nomenclatorul, multiplicitatea și volumul cercetării sanitaro-bacteriologice sunt stabilite prin actualele documente normative și metodologice, ținând seama de situația sanitaro-epidemiologică.
1.4. Medii de cultură pentru preparatele de laborator și industriale pot fi utilizate pentru studiile sanitar-bacteriologice obiecte de mediu, de aer și de a controla sterilitatea dispozitivelor medicale în asistența medicală și alte organizații de profil terapeutic, consumabile, produse biologice specificate în aceste linii directoare. Utilizarea altor medii comerciale nutritive (consumabile, produse biologice) este permisă în prezența metodelor de cercetare aprobate și aprobate pentru utilizare în conformitate cu procedura stabilită.
2.3. MU 4.2.2723-10 "Diagnosticarea salmonelozei în laborator, detectarea salmonelei în produsele alimentare și obiectele de mediu".
3.1. Studii de contaminare bacteriană a aerului
3.1.1. Studiile de contaminare bacteriană a aerului se efectuează în incintele organizațiilor medicale, în funcție de scopul lor funcțional pentru indicatorii sanitari și microbiologici:
numărul total de microorganisme în 1 m3 de aer (CFU / m3);
numărul de colonii de S. aureus în 1 m3 de aer (CFU / m3);
numărul de mucegaiuri și fungi de drojdie în 1 m 3 de aer.
3.1.2. Eșantioanele de aer sunt luate prin metoda aspirației, utilizând dispozitive și dispozitive care sunt permise să fie utilizate în ordinea stabilită.
Cantitatea de aer extrasă ar trebui să fie de 100 dm 3 pentru a determina numărul total de microorganisme, fungi de drojdie și mucegai și 250 dm 3 pentru a determina S. aureus. Studiul metodei de sedimentare a aerului nu este permis.
3.1.3. Pentru determinarea numărului total de microorganisme în 1 m3 de probe de aer se efectuează pe agar nutritiv de tip MPA, SPA, GRM-agar și altele, preparate conform instrucțiunilor de utilizare. Culturile sunt incubate la o temperatură de 37 ° C timp de (48 ± 2) h, numără numărul de colonii crescute și recalculate pentru 1 m 3 de aer. În prezența creșterii coloniilor de drojdii și ciuperci de mucegai, acestea sunt numărate și numărate pentru 1 m 3 de aer. În protocol, numărul de ciuperci de drojdie și mucegai este indicat separat.
Notă: Când se transferă dispozitive și dispozitive pentru prelevarea aerului dintr-o cameră în alta, suprafața acestora este tratată cu o soluție de dezinfectant. Masa, articulațiile interne, capacul și alte părți ale dispozitivului din interior și din exterior sunt frecate cu alcool (70%).
Pentru a determina prezența S. aureus a fost realizată pe un suport mostre gard mediu vitelin sare pe bază: agar Elective-sare, agar stafilococ sau mannitolagar medie № 10 pe GF XII, Bide-Parker agar. Plăcile cu inoculări sunt incubate într-un termostat la 37 ° C (48 ± 2) h.
2. A doua zi a treia.
Pe mediile de mai sus, stafilococul crește ca colonii rotunde, strălucitoare, uleioase, convexe, pigmentate. Trebuie avut în vedere faptul că stafilococii, izolați de la oameni, dau o reacție lecitovitellară pozitivă în 60-70% din cazuri. Înfășurarea pe agar tangent pentru investigarea ulterioară a cel puțin 2 colonii suspectate de stafilococ aureus. Pentru cercetare, coloniile, care dau o reacție lecitovitellară pozitivă (formarea corolă irizantă), dislocă în primul rând. Dacă nu există astfel de colonii pe plăci, coloniile pigmentate care sunt similare în morfologie cu stafilococul sunt supuse unor investigații suplimentare. Dacă există prezența simultană a coloniilor de stafilococi pe plăcile care diferă în pigment, trebuie deșurubate cel puțin două colonii de diferite tipuri. Tuburile de testare cu inoculare sunt plasate într-un termostat la 37 ° C pentru (24 ± 2) h.
3. A patra zi.
După incubare, în tulpinile izolate sunt controlate morfologia, proprietățile tinctului (pete Gram) și prezența activității de coagulare a plasmei în reacția de plasmocoagulare (RPC).
Gramația Gram este efectuată printr-o metodă convențională. Sub un microscop, colorat cu stafilococi Gram-negative au forma de coci albastru-violet, dispuse în grupuri sau grupuri mici ( „dantelă“).
Dacă cultura are doar plazmokoaguliruyuschey sau numai letsitovitellaznoy activitate este necesară pentru răspunsul final ia în considerare alte caracteristici, care permite să se determine tulpina aparținând speciei S. aureus (manitol de fermentație, activitatea hemolitică).
Dacă este necesar, după izolarea culturii pure, determinați sensibilitatea / rezistența la antibiotice, dezinfectanți, bacteriofagi.
Contabilizarea rezultatelor testelor suplimentare. Problema finală a răspunsului.
3.2. Studii de contaminare microbiană a obiectelor de mediu
3.2.1. Studiul bacteriologic al contaminării microbiene a obiectelor de mediu implică detectarea stafilococilor, bacteriilor din grupul E. coli, Salmonella, Pseudomonas aeruginosa. Eșantionarea de pe suprafețele diferitelor obiecte se efectuează printr-o metodă de spălare. Conform indicațiilor epidemiologice, nomenclatorul studiilor privind contaminarea microbiană a obiectelor de mediu poate fi extins.
3.2.2. Luați spălările cu tampoane sterile de bumbac, montate în tuburi de testare. Pentru a umezi tampoanele în tuburile de testare, turnați 2,0 ml de apă peptonă 0,1% sterilă cu adăugarea de neutralizatori de dezinfectanți.
3.2.3. Atunci când se controlează obiecte mici, bulele sunt preluate de pe suprafața întregului obiect. La verificarea obiectelor cu o suprafață mare, se efectuează proiecții în mai multe locuri ale obiectului investigat, cu o suprafață totală de aproximativ 100 cm2.
3.2.4. Pentru a detecta stafilococi, se toarnă 0,2 până la 0,3 ml de lichid de spălare într-un tub de testare cu 5,0 ml de bulion salin 6,5%. Tuburile inoculate au fost incubate la 37 ° C timp de 24 (± 2) ore, după care fac semănat pe mediu vitelin-sare media pe bază: Elective sare agar stafilokokkagar, manitolagar sau medie № 10 prin GF XII, agar Bide-Parker. Studiile suplimentare privind culturile izolate de stafilococi se efectuează în conformitate cu punctul 3.1.4.
3.2.5. Pentru a detecta bacteriile din grupul de E. coli, se toarnă 0,2 până la 0,3 ml de lichid de spălare într-un tub de testare cu 5,0 ml mediu Kessler. Tuburile însămânțate sunt incubate la 37 ° C timp de (24 ± 2) h și se realizează prin reintroducerea mediului Endo. Coloniile crescute pe mediul endo sunt supuse unui studiu suplimentar pentru a stabili posibila lor apartenență la enterobacterii patogeni.
3.2.6. Pentru a detecta salmonela, 0,2 - 0,3 ml de lichid de spălare se toarnă într-o eprubetă cu 5,0 ml dintr-un mediu de îmbogățire (magneziu, selenită sau mediul Rappaport-Vassiliad). Tuburile însămânțate sunt incubate la 37 ° C timp de 18 până la 20 de ore, agarul de endo și sulfit de bismut transferat în mediu, urmat de selecția coloniilor suspecte și identificarea acestora.
3.2.7. Pentru detectarea Pseudomonas aeruginosa pentru a face mediu însămânțare № 8 (bulion pentru stafilococi și acumulare de Pseudomonas aeruginosa) și mediu de cultură a mediului № 9 (pentru a determina prezența Pseudomonas aeruginosa prin pyocyanin pigment) sau în conformitate cu GF XII. Coloniile suspecte pe Pseudomonas aeruginosa (colonii cu margini netede sau ușor ondulat, suprafață netedă, lucioasă, cu un miros caracteristic și un pigment, cu toate acestea, trebuie înțeles că mirosul și pigment poate varia larg sau să fie absent), subcultivat pe agar înclinat.
P. aeruginosa - tija gram-negativă, mobilă, oxidază-pozitivă, oxidând, dar nu fermentând glucoza, dând o creștere la 42 ° C.
3.2.8. O listă indicativă a obiectelor supuse controlului sanitar și bacteriologic prin metoda de spălare:
A. Unitate de operare:
· Masca aparatelor de anestezie;
· Tea aparatului de anestezie;
· Containere și aparate pentru spălarea și tratarea mâinilor;