Izolarea virusului din materialele. Izolarea virusurilor în embrion de pui
Cel mai adesea realizate din materiale virusuri izolate în culturi celulare și de embrioni de pui, rareori infectează animalele experimentale.
Izolarea virusului în culturi celulare. In cele mai multe cazuri de virusuri umane și animale izolate în culturi primare de rinichi embrionar uman și maimuță, sau pentru culturile de celule transplantate de HeLa, Hep-2, KB, Vero, FL. În acest caz, materialul de testat infecta numai cele în care un microscop cu mărire mică observate celule monostrat bune. După 30-60 minute de contact cu monostratul de material îndepărtat și re-acoperite cu mediu de cultură, plasând câteva zile în ultratermostat.
Pe virus de replicare în celule este evaluată prin modificări citopatice în monostrat duce la rotunjirea și contracția celulei (Picornaviridae), crescând de degradare (herpesvirusuri), adesea cu proliferare inițială (poxvirusuri). Pikorna-, herpes, multe toga- și bunyaviruses, distrugând monostrat pentru a forma plachete sub-acoperite cu agar ( „pete sterile“), fiecare dintre acestea reprezentând un virus colonie izolată.
În timpul multiplicarea unor virusuri sunt formate celule multinucleate (paramikso- și herpes virusuri). Un număr de virusuri în citoplasmă și nucleu formează incluziuni intracelulare de formă rotundă. virusurilor oncogene determina transformarea celulelor normale in cele maligne, care de multe ori preced modificarile cromozomiale in nucleul unui monostrat. Celulele infectate virusuri infecțioase conțin un număr mare de virioni imature și antigenele lor sunt detectate cu ajutorul anticorpilor fluorescenți.
În cazul în care virusurile sunt mari dimensiuni și multiplicat, desprins din celule, conținutul stratului celular prin microscop imersie, așa cum sa menționat deja, găsit corpurile elementare.
reproducerea virusului. efect non-citopatic (CPE) pot fi stabilite utilizând reacțiile gemadsorbtsii, manifestate în `clustering adăugate la eritrocite infectate celule datorită prezenței multor virusului hemagglutinin (mikso- și Togaviridae). Hemaglutinarea poate fi văzut cu ochiul liber pe diapozitiv de sticlă, adăugând o picătură de eritrocite fluid de cultură corespunzătoare. De exemplu, hemaglutinare miksovirusy de celule roșii din sânge uman, grupa 1 de sânge și 60% Togaviridae - eritrocitele gâște.
Un număr de virusuri pot fi identificate prin fenomenul de interferență, adică. E. Capacitatea de a inhiba CPD un alt virus (virusurile leucoză aviare interfera cu virusul sarcomului Rous). În același timp, cu toate acestea, este necesar să se elimine fenomenul de autointerferentsii.
Izolarea virusurilor în embrion de pui. Pentru izolarea virusului din materialele folosite embrioni 7-11 zile a pui albi. Infecția produsă pe membrana corioalantoica (HAO) în alantoidian și cavitățile amniotic, sac vitelin și corpul embrionului. Alegerea metodei de infecție depinde de proprietățile specifice ale virusului.
Inainte de infectarea ovulul este plasat într-un lustruirii și determina viabilitatea embrionului și limitele pungii de aer, alcoolul este tratat cu iod și coji de pe ea. Cea mai comună metodă de introducere a materialului pentru HAO. În acest scop, partea a pungii de aer cu foarfeca și scoateți ușor skorlupnuyu shell shell plesnire. Deoarece presiunea aerului HAO se scufundă și se aplică la o seringă 0,1-0,2 ml din materialul de testat. HAO ac de perforare și submerging 1-2 mm, aceeași cantitate de material cavitatea alantoidiană infectate.
Pentru introducerea materialului in amniotic cavitatea traversată fălcile pensete usor horionallantois perfora, captura membrana amniotica, iar după introducerea este ridicată în cavitatea sa de material ml 0.05-0.10 este coborâtă.