Studiul proceselor patologice la nivel celular și tisular se face prin examen microscopic. este necesară metoda histologică de cercetare pentru a studia structura și funcția celulelor în norma de stat, patologia și perioada experimentală. Pentru histologice sunt luate elemente de țesuturi și organe. Grosimea probei de testare nu poate fi mai mare de 1 cm 3.
Probele de tesut pot fi luate de la o persoană, imediat după moarte (cu cât mai devreme cu atât mai bine) - autopsie. De asemenea, materialul poate fi luată în timpul funcționării sau direct în scopuri de diagnosticare, folosind instrumente speciale - biopsie.
Pregătirea probei
preparare a probelor a fost realizată în mai multe etape:
- Material de fixare.
- Pregătirea tăiat.
- Procesul de colorare feliei.
Esența materialului de fixare este de a opri procesele naturale din țesuturi și celule. Acest lucru este necesar pentru a aresta pe parcursul procesului de degradare și a modificărilor enzimatice ale structurii tisulare.
Țesuturile zăvorât datorate proceselor fizico-chimice care au loc de coagulare (coagulare), proteine și componente lipoidă. Această stare permite țesuturilor pentru o lungă perioadă de timp păstrate intacte, fără reacție la diferite influențe. Pur și simplu pune, fixarea țesuturilor este realizată pentru a salva structura durata de viata a materialului biologic.
lichide speciale (clanțe) sunt utilizate pentru fixarea țesutului. Cele mai populare încuietori sunt următoarele opțiuni pentru lichide:
Cele de mai sus sunt oarba simple. De asemenea, pentru fixarea tesutului utilizat in variante mai sofisticate de cleme (soluții):
- Alcool-formol.
- fluidul Zenker.
- Dvuhromovookisly de potasiu.
Lista prezintă doar anumite tipuri de clipuri folosite. Durata necesară pentru fixarea perioadei de probă de țesut poate varia de la câteva ore la zile. Durata depinde de caracteristicile probelor și tipul selectat de conservant. După etapa de fixare realizată este necesară pentru a face materialul de spălare (pentru mai multe ore), în apă curgătoare. Acest lucru se face în scopul de a elibera probele zăvorâre din surplusul de lichid și o suspensie sedimentară.
probe opace turbiditate nu sunt potrivite pentru cercetare. Aceste bucăți de material nu permite să obțină informațiile necesare. Înainte de una dintre principalele etape - implementarea feliei, eșantioanele sunt clătite cu apă curată timp de câteva ore. În plus, materialul este supus unui proces de deshidratare. Deshidratarea se realizează prin intermediul unei probe de țesut prin alcooli ascendenți cetate. Acest pas este lung. Fiecare bucati de alcool de material sunt de la 2-3 ore la zile.
turnarea probelor după deshidratare este efectuată. Acest pas este necesar pentru a sigila țesutului și pentru a produce blocuri de calitate pentru studiu. Etanșarea se realizează prin congelare (biopsii urgente) sau prin turnarea de parafină sau celloidin. Umplerea parafină - destul de o procedură lungă (24 de ore sau mai mult). O astfel de realizare mostre de etanșare este utilizat pentru studii în modul normal. Pentru o mai bună vizualizare a anumitor structuri ale secțiunilor de țesut colorate. Pentru colorarea histologică folosind vopsele speciale (acide, bazice, speciale).
Probele preparate au fost testate in studiu, folosind un microscop special.
Înainte de a trece la studiul de pregătire histologică este necesară pentru a se asigura că acesta din urmă este în deplină concordanță cu un număr de cerințe obligatorii:
- Structura materialului pe viață trebuie păstrată.
- Tăietura trebuie să fie subțire și transparent.
- Structuri care trebuie să supună studiului ar trebui să fie vizualizate în mod clar din cauza colorare.
- Pregătirile ar trebui să aibă un termen de valabilitate lung.
Într-un preparat calitativă a medicamentului pentru a realiza conformitatea cu toate cerințele enumerate, pur și simplu. Cu toate acestea, nu putem exclude posibilitatea de mici erori. În cazul în care timp pentru a recunoaște anumite tipuri de discrepanțe, pentru a opri căsătoria, pentru a crea materiale de înaltă calitate este posibilă.
Cele mai frecvente erori în pregătirea de reduceri sunt următoarele opțiuni:
- Surparea tăiat.
- Pierderea de material din masa parafinice.
- Imposibilitatea materialului de tăiere.
- Materialul decalaj.
Cei sau alte erori pot apărea din diverse motive. Uneori, baza de încălcare a calității eșantionului sunt erori în timpul de fabricație. Pentru a elimina orice eroare prevede anumite acțiuni algoritmi.
Metode de histologie
Pentru examinarea microscopică a felii subțiri de material sunt necesare. Lățimea acestor piese se măsoară în micrometri. microtoame - instrumente speciale sunt folosite pentru comoditatea de a obține astfel de secțiuni. Construcția acestui dispozitiv prevede secționarea 5-10 microni grosime.
Metoda principală de cercetare histologiei este microscop. Cu ajutorul unui microtom se poate face secțiuni extrem de subțiri adecvate pentru examenul microscopic. cutoff Pregătirea se produce datorită mișcării cuțitului într-o singură direcție. Grosimea slice este fixat la mecanismul pas de preluare de ridicare.
Pentru secționarea materialului sau incluse în parafină utilizarea celloidin radial, de rotație sau microtom sanie.
microtom special de congelare poate fi utilizat pentru a obține o felie de țesuturi vegetale sau animale. Pentru examenul microscopic, folosind mai multe secțiuni metode de gătit. Pentru fiecare dintre metodele selectate anumite tipuri de microtoame și unele acțiuni clare sunt aplicate algoritmi.
Secțiunile histologice sunt:
Secțiunile pot fi făcute un material fix și nefixate. Totul depinde de natura țesutului și scopul principal al studiului a spus. De asemenea, în histologie, există și alte metode de preparare secțiuni.
Microtoame și aplicarea lor
După cum sa menționat mai sus, în secțiunile histologice sunt create cu ajutorul unui dispozitiv special - un microtom. În numele stabilit de dispozitiv de decodare destinație - Micros (mici), tomul (disecție). Una dintre cele mai utilizate poate fi numit un microtom sanie.
numele dispozitivului este derivat din principiul mecanismului, care se bazează pe teren cuțitului cu un clip cu sanie specială. microtomul sănii pentru secționare de parafină. De obicei, un astfel de dispozitiv este de lucru cu lame de unică sau cartușe. O astfel de microtom de precizie constă dintr-un cadru, mecanismul micro, mecanismul de ridicare Cleme blocuri tăietor bar.
Un astfel de aparat permite producerea felii de grosime 0,5 până la 60 micrometri. Sănii microtom de precizie diferite de reglare a grosimii felie. Funcția de alimentare poate fi manuală sau mecanică. Acest aparat este proiectat pentru cercetare de rutină în domeniul medicinei, botanica si biologie.
Microtome Rotary - un dispozitiv cu o lamă fixă și o masă mobilă. Dispozitivul asigură o alimentare mostră motorizat. Acest microtomul este proiectat pentru a fi utilizat în laborator histologie pentru cercetare care vizează rezolvarea problemelor de histologice și histopatologice.
Pentru secțiunile cu țesuturile nefixate sau în acele cazuri în care o nevoie urgentă de a desfășura activități de cercetare, folosind un microtom de înghețare. Astfel de dispozitive sunt prevăzute cu un tabel de congelare, pe care este fixat eșantionul. Regula principală de primire cu succes a secțiunii histologice folosind un microtom este alegerea unghiului drept al secțiunii paletei și unghiul. Cel mai bun unghi este unul în care lama este paralelă cu planul superior al blocului.
Dacă alegeți unghiul de înclinare mai mare decât este necesar, riscul de tăietura se va prăbuși. Cu un unghi mai mic de înclinare a lamei va aluneca de-a lungul suprafeței materialului. Prepararea rezultatul dorit în această poziție lama nu este posibilă. Secțiunea transversală a unghiului depinde de natura materialului. Mai moale proba, mai mic unghiul de pană. In tratamentul de blocuri moi este considerat bun pentru acest aranjament oblică a lamei.
Decupare pe microtom
Pentru prepararea secțiunilor cu obiecte ceros sau probele tratate din nou celloidin folosesc adesea microtom rotativ.
În primul rând, blocul este supus tundere. Acest lucru este necesar pentru a elimina parafină liberă sau alt material de etanșare. Dacă această procedură nu produce, tăietura poate dovedi inegală, încrețită, și, în consecință, uninformative. De asemenea, ridare poate fi evitată prin răcirea materialului.
In plus, blocul de parafină este fixat ferm în clemă. Trebuie să se alinieze mai întâi unghiul corect al locația de cuțit și selectați unghiul de tăiere dorit. Apoi, va trebui să se adapteze utilizând alimentatorul, instalați unitatea, astfel încât suprafața sa este de lama de cuțit, la o distanță de 0,5-1 mm.
După instalarea fitingului este realizată la scară micrometrică pentru obținerea primelor felii groase. După aceea, unitatea de simulare (trunchierea excesul de parafină legenda formă dreptunghiulară). Pasul final este la scară care prezintă o grosime micrometric concepută și implementarea materialului de tăiere final.