cuțite speciale microtomice utilizate pentru prepararea secțiunilor histologice. care diferă ca formă, lungimea și unghiul secțiunii paletei. In forma ei sunt pană de oțel dificil, care are o muchie de tăiere suplimentară de ascuțit pană. Lungimea lamei poate fi de la 8 la 50 cm.
Conform configurației lamei sunt trei grupe Microtome Knife: A, B și C. în cuțite microtomice aparținând grupei A, o suprafață este plană, iar cealaltă concav (numită plano-concave, cu o mare suprafață concavă curbură). Aceste cuțite sunt adesea realizate dintr-un oțel moale sau relativ moale și concepute pentru obiecte de tăiere, udate cu celloidin.
Cuțite cu privire la grupa B sunt numite plano-concave. dar curbura suprafeței concave acestea sunt mult mai mici. decât în grupa A. Aceste cuțite sunt realizate dintr-un oțel dur, utilizarea lor pentru secțiunile tselloidinovyh preparare și celloidin parafină.
La cuțite aparținând grupei C ambele suprafețe ale lamei plate. Acestea sunt realizate din oțel dur și este utilizat pentru tăierea obiectelor, incluse în parafină, și pentru secționare pe un microtom de înghețare.
În plus, pentru prepararea semithin secțiuni și parafină într-un microtom și ultratome folosesc cuțite metalice și lame de sticlă magnetică. Lamă magnetic metalic (lama de unică folosință) permite obtinerea felii cu 50-60 blocuri de parafină, și atunci schimbarea lamei.
GRINDING lame microtomice
Ia secțiuni histologice calitative la tselloidinovoy, celloidin-parafină și materialul de umplere parafină cu ajutorul cuțitului microtom a cărui grosime a lamei trebuie să fie de la 3 la 5 microni. Pentru a lucra pe un microtom de înghețare trebuie să aibă un cuțit ascuțit, fără ciupituri de pe lama. Cuțit de ascutit ar trebui să fie prompt și modifica înainte de fiecare obiecte ascuțite.
cuțite microtomice sunt ascuțite cu ajutorul unor dispozitive speciale, cum ar fi «Sakura» (Japonia). Cu toate acestea, până în prezent nu a pierdut relevanța și este utilizat în multe laboratoare manuale ascuțirea de cuțite. cuțite manuale microtomice ascuțită pe bara în formă de piatră. Proces-verbal sunt galbene, așa-numita piatră de ascuțit belgian utilizat pentru prima, și apoi să continue ascuțirea piatră pe alb (AR), care are o granularitate mai fină. Este posibil să se utilizeze piatra ardezie naturală, care are, de asemenea, o suprafață cu granulație fină și mazarat.
Înainte de măcinare de piatra de pe suprafața uleiului de motor sau de kerosen, glicerol, alcool diluat 70% aplicat (1: 1) apă cu săpun. Pe partea din spate a lamei uzură obushok speciale (de preferință, utilizat în mod constant pentru ascuțirea același cuțit - aceasta determină unghiul de ascuțire), iar tija sau deschiderea din partea de capăt a cuțitului mâner filetat. Apoi, a pus cap la cap de cuțit pe o stâncă, pe care glisiera și lama de gravitație. Cuțitul se desfășoară pe piatra de la un capăt la altul, și apoi de cotitură prin obushok, realizează mișcarea în direcția opusă.
Durata procesului depinde de priceperea și starea de margine de cuțit de laborator. În medie este de 30 de minute până la 1 oră. Verificați periodic cuțitul de ascuțire de calitate usor de stabilire pe scena microscop și deplasarea acesteia, astfel încât muchia de tăiere trece prin câmpul vizual la o mărire redusă. Apoi, o largă centură de regulă de cuțit întins pe un bloc de lemn. Editarea a fost realizată în același mod ca și măcinare (prin obushok).
CARACTERISTICI ȘI microtoame de lucru pentru ei
Microtoame - sunt dispozitive care produc felii de tesut, inmuiate in diferite medii, precum și înghețate și nefixat. Microtoame permit obținerea secțiunilor histologice de diferite grosimi. Principiul de funcționare al sănii distincție, rotative, microtom de congelare. și takzhekriostaty și vibratom.
microtoame Sleigh caracterizat prin mișcarea orizontală și verticală blokoderzhatelya cuțit de ridicare. Ele sunt folosite cu succes pentru tăierea obiectelor, udate cu celloidin, celloidin-parafină și parafină. Componentele principale ale microtomul sunt situate pe glisiere speciale, de unde și numele. Principiul de funcționare sănii microtomul este că, în timpul cursei de întoarcere a cuțitului diapozitiv lovitură de cuțit împingând tija cu regulatorul de flux de scară, provocând deplasarea. Mișcarea tijei este transmisă la tija care cu „câine“ rotește roata dințată. Rotirea microscrews clichet transmise, prin care piulița divizat cu glisiera se mișcă în sus unitate. Fiecare unitate felie creste mai mare cu o distanță corespunzătoare cu grosimea slice. După blokoderzhatel culmina cu ajutorul împărțit nuci trebuie să reducă mecanismul glisant la poziția cea mai joasă. Există și alte specii de microtoame cu sania cu diferite variante de metode de livrare, cleme cuțite, etc.
microtoame rotative sunt proiectate pentru tăierea blocurilor de parafină, cu ajutorul lor, puteți obține secțiuni în serie. Cea mai importantă parte a microtom rotativ - mecanismul micro care include un clichet, un angrenaj diferențial, microscrews, membrelor, viteze elicoidale și came. Mecanismul de antrenare atunci când arborele este rotit cu „câinii“ se rotește cu un număr predeterminat de dinți cu clichet, la care axa de viteze este transmisă prin microscrews rotație pinion. Șurubul deplasează obektoderzhatelya furaje transport. Grosimea slice este setată prin rotirea cadranului.
Obektoderzhatel rotative microtom - terminale cu șurub montat într-un cărucior cadru de hrănire sferică. Mecanismul de articulație permite unității să prezinte, la orice unghi. Obektoderzhatel fixat în mânerul special de prindere.
Suport pentru cutit - un stand masiv cu doi montanți, care sunt montate într-un suport în mișcare adaptat pentru montarea lamei la unghiul dorit. Șuruburi de fixare cuțit făcut. În direcția anteropoaterioara cuțitul se deplasează de-a lungul unui ghid special cu un șurub. se apropie treptat cuțitul la obiect și simultan rotirea roții furaje, zona de tăiere este tăiată, și apoi fixat cuțit.
microtoame rotative au o bandă transportoare specială pe care banda de rateaza lama (o serie de) felii. Ace lor disecarea bandă și cota de a produce manipulare ulterioară. Scoateți secțiunile din microtom rotativ cuțit poate fi o perie sau un ac de disecție.
microtom de congelare este utilizat pentru a reduce nu umplut, ci obiecte fixe, materiale umplute în gelatină și plasticul solubil în apă. Deosebit de frecvent utilizate microtom de congelare pentru fabricarea preparatelor din material de studiu biopsii urgente. Prin proiectare, un microtom de congelare sunt Microtoame tip sanie, dar dispozitivul are unele caracteristici speciale. Cadrul este prevăzut cu mijloace de fixare la masă. Cuțit setat la unghiul dorit în mânerul mobil prin intermediul uneia sau a două cleme. Alimentarea automată se efectuează pentru fiecare matura cu mâner de cuțit
prin intermediul unui sistem de pârghii. Congelarea masă prevăzut cu un dispozitiv pentru alimentarea dioxidului de carbon sau răciți termoelectric utilizând elemente semiconductoare.
Criostate, vibratom. Odată cu dezvoltarea histochimie enzimei și immunomorphology a existat o necesitate în tratamentul material non-fix, care a fost pus în aplicare cu ajutorul unor dispozitive speciale - criostatului. Mai târziu, kriokity și vibratom.
Criostat - un congelator specializat pentru a seta microtomul, în care există deschideri pentru mâini, lampa fluorescentă și vizor. Izolație fiabilă menține temperatura în criostatului de la -5 la -25 ° C momente negative atunci când se utilizează criostat sunt mâinile semnificative subrăcirea ale operatorului, slaba iluminare a zonei de lucru și incapacitatea de a se concentra obiectului în raport cu muchia cuțitului. Aceste dezavantaje sunt eliminate virtual vkriokitah producția externă, conducerea care a făcut în afara congelator. Ele se pot regla individual temperatura obiectului și cuțitul. După 3-5 minute după comutare se realizează o temperatură scăzută, răcirea fiind, eventual, până la -65 ° C, ceea ce împiedică formarea de cristale în țesuturi.
Îngrijire și Microtoame microtom cuțite. Toate microtoame suprafețelor de alunecare trebuie să fie curate și lubrifiate cu un strat subțire de ulei de mașină sau vaselina. În timpul funcționării continue, pe microtomice toate suprafețele de alunecare este necesară o dată pe săptămână pentru a șterge o cârpă umezită cu benzen sau toluen și grăsime. După lucrările de pe cadrul mașinii și obektoderzhatel microtom purificată din reziduuri de parafină îndepărtarea în prealabil cuțitul microtom și eliminarea-l în acest caz. cuțite microtomice nu lăsați niciodată în microtom sau de pe desktop-ul tau! Congelarea microtoame și criostate 30 min după oprirea șters uscat și Alimentare cu șurub lubrifiat cu ulei de vaselină.
De tăiere pentru blocuri de parafină Sannomiya microtomice
Blocul de parafină aplicată pe un bloc de lemn sau fără (strat ridicat de ceară), este fixat în obektoderzhatel. Stabilirea unui unghi dorit de înclinare a cuțitului (optim 13-15 °), în funcție de densitatea țesutului, cuțitul este alimentat încet la unitate, pentru a regla înălțimea contactului cu cuțitul. Mai întâi suprafața blocului aliniată, stabilind o scară micrometrică pentru o grosime de secțiuni (20-25 microni), și apoi convertit la o scară utilizat -8 microni și începe materialul de tăiere. De obicei, un cuțit este dispus perpendicular, dar pot obține secțiuni (mai ales cu mai dense obiecte) cuțit, care este montat la un unghi față de cadrul microtom.
Feliile au fost îndepărtate cu grijă din blocul cu o perie uscată sau înmuiată în alcool este utilizat ca un ac de disecție îndoit sau bisturiu. Secțiunile au fost, în general, transferate într-o cutie, a cărei fund este căptușită cu hârtie neagră și așezată mat fața în sus. După numărul dorit de felii sunt așezate lângă ele sau numărul de etichete de bloc. Procedeul preferat imediat blocuri 20-30, și apoi trece la montarea felii pe lamele de sticlă.
De multe ori secțiuni lipite într-o placă de sticlă culisantă direct cu un cuțit. Pentru aceasta ele sunt transferate într-un balon cu cald (35-40 ° C), apă distilată sau fiartă, iar apoi prins pe diapozitive, care au degresate și epurate de proteine cu glicerol anterior. Secțiunile au fost lipite pe o parte strălucitoare diapozitiv de sticlă cu care se confruntă cuțitul. riduri mici cu privire la tăiat se poate transmite prin ele atingând ușor un îndoit unghi de disecție ac.
Este posibil să se îndrepte secțiunile direct pe sticla cu un dispozitiv special pentru îndreptare și uscare secțiuni de parafină. Pentru a face acest lucru pe o lamelă de sticlă acoperită cu o pipetă o picătură de apă și a redus tăiat. Sticla cu o tăietură plasată pe o unitate de masă încălzită unde tăietura este indreptat treptat. După îndepărtarea excesului de apă, cu o hârtie de filtru sau pipetă de sticlă cu uscate și tăiate simultan felie strâns fixat pe o lamelă de sticlă. Într-un dispozitiv de masă încălzit 45 plasate simultan culisează prin utilizarea sa nu necesită alte pahare de uscare cu felii într-un cuptor. Există baie speciale importate pentru îndreptarea felii și a le transfera pe sticlă. Ei au mentinut constant temperatura optima a apei 38 ° C
Durata secțiunilor de uscare într-un termostat la 37 ° C 6-12 ore. În cazul secțiunilor de colorare necesitate urgentă pot fi plasate timp de 10-15 minute într-un termostat la 56 ° C înainte de topirea cerii, prin aceasta o mai bună fixare a feliei de pe diapozitiv. Cu toate acestea, mai multe deparafinării greu necesită folosirea unei porțiuni suplimentare de xilen și creșterea duratei deparafinarea.
Există o metodă uscată de secțiuni de legare la sticlă, care este potrivit pentru tăieri de înaltă calitate. Pe un pahar de diapozitive unse cu un strat subțire de proteină cu glicerină și se taie plasat, usor indreptati-o dissecting ac sau un bisturiu și încălzit ușor pe un spirit sau o masă încălzită.
PREPARAREA TSELLOIDINOVYH felie
Pentru a prepara feliile folosite tselloidinovyh cuțite de tip A și B. blocuri Tselloidinovye fixate în același mod ca și parafină. După instalarea în cuțitul microtom împinge la acesta obektoderzhatel fortificat cu o unitate în acesta. Blochează pentru a alinia suprafața până la piesa complet tesatura este expus, și apoi trece la prepararea felii de grosimea dorită. În timpul cuțitului de tăiere și un obiect umectat abundent de 70% sau 80% alcool, folosind o perie. Cuțit pe un microtom sanie conduce lin, fără presiune. Tăietura rezultată îndreptat pe cuțit folosind o perie și apoi îndepărtat cu un cuțit tăiat pe pad a degetului arătător plantate sub cuțit. Secțiunile au fost plasate într-un balon cu 70% alcool.
slide-uri PREPARARE
Lamele au fost folosite pentru preparatele histologice trebuie podgotovit.Isklyuchenie întâi gata pentru utilizare și special ambalate diapozitive importate.
Lamele au fost spălate în apă caldă, săpun sau fiartă în soluție de carbonat acid de sodiu 2,3%, apoi se clătește cu apă fierbinte și se spală timp de câteva ore în apă curentă. sticlă Spălat șters cu o cârpă de bumbac curată timp de câteva zile și plasat într-un amestec Nikiforov alcool 96%, și eter (1: 1). sticlă fără grăsimi este îndepărtat cu ajutorul unei pensete din amestec, șters cu o cârpă curată și plasate într-o cutie.
diapozitivele Degresare sunt folosite amestec cromic, care a fost compus din 100 g de bicromat de potasiu, acid sulfuric concentrat și 1000 ml de apă fierbinte. dicromat de potasiu este dizolvat mai întâi în apă fierbinte, apoi soluția este răcită și apoi baghetă de sticlă adăugat, cu atenție în picături de acid sulfuric. amestec cromic sticlă incubate timp de 2-3 zile și apoi se spală bine cu apă curentă timp de 1-2 zile.
Lamelele sunt de asemenea bine degresate într-o soluție puternică de acid clorhidric. După câteva zile, au fost spălate cu jet de apă și se usucă.
degresant de calitate poate verifica apa picura dintr-un pahar pipetă diapozitiv: pahar cu apă degresat se întinde un strat subțire, și nu va scădea.
Pentru secțiunile de fixare mai bune la geamul prelubrifiate amestec de proteine cu glicerol. albuș de ou proaspăt este bătut și se filtrează printr-un filtru grosier, umectată cu apă distilată, apoi se agită cu un volum egal de glicerol a fost adăugat și câteva cristale de timol. Amestecul se păstrează timp de câteva luni. Folosit ca un amestec compus din 15 ml de ser sanguin, 5 ml de apă distilată și 6 ml de formol 5%. După filtrare, amestecul a fost gata pentru aplicare pe lame. Utilizarea sa dă rezultate mai bune decât utilizarea albușului de ou ca fundal nu este format la colorat.
O metodă pentru fixarea felia la diapozitivul fără frecare din urmă proteină cu glicerol. În cada cu apă distilată caldă care picură câteva picături de lipici cazeină lichid și se agită. Lichidul obținut este redus cu turbiditate secțiuni, îndreptați acul disecarea și prins pe un pahar degresata curat. Această metodă oferă un efect bun și în mod constant în jurul valorii de cutoff nu este un fundal colorat, așa cum se întâmplă adesea în aplicarea proteinei.