Posibilități de utilizare a testelor bacteriologice pentru bolile de ochi sunt acces în afara limitat la focalizarea patologică. Când se plasarea în segmentul posterior al ochiului pentru a obține un material pentru cercetare este adesea foarte dificilă și posibilitatea de diagnostic bacteriologic, în astfel de cazuri, desigur, excluse. Principalele aplicatii pentru diagnosticarea bacteriologice în practica oftalmologică - o boală de ochi externe carte, și leziuni penetrante, în care un material de studiu pot fi obținute în timpul debridare sau eliminarea unui corp străin. În general, trebuie remarcat faptul că în timpul intervenției chirurgicale gama posibilităților de obținere a materialelor bacteriologică se extinde în mod semnificativ.
Material pentru cercetare Obținerea
Pentru materialul din sacul conjunctival sunt buclă de platină (în absența acestuia poate fi utilizată o buclă făcută dintr-o spirală fire unealtă electrice sau (baghetă de sticlă, spatulă și altele asemenea. P.) care au fost sterilizate prin calcinare într-o flacără de alcool. Trăgând pleoapei inferioare , răcit buclă de captare de descărcare nodul conjunctivală din partea inferioară a arcului inferior. este necesar să se evite atingerea bucla la piele și marginile pleoapelor, astfel încât să nu aducă în microflora străine materialul y. Ia materialul de preferință, înainte de tratament și dimineața, când descărcarea este mai abundent. In absenta mucus si puroi (de exemplu, în studiul conjunctivei sănătoase înainte de începerea operațiunilor) trebuie utilizat fluid lacrimal sau ușor racla suprafața mantalei de cuplare (de Lindner). Dar mai bine în astfel de cazuri să se aplice tehnica Elynniga: lasa in sacul conjunctival al unui pipetă Pasteur, o picătură de soluție salină sterilă sau bulion și suge picătură de câteva secunde.
Prin aceleași reguli generale obținute materialul din sacul lacrimal, stoarce conținutul său și marginea blefarită ulcerative secol, eliminând mai întâi crusta cu ulcere.
Mare grijă este necesară în capturarea materialului din cornee, în special atunci când târâtor ulcer cornean. Buclă (sau un alt instrument bont) trebuie să fie îndreptate oblic la suprafața ulcerului și să ia materialul progresarea marginile sale. In aceasta nevoie de anestezie (3 picături 1% tetracaina) și fixarea globului ocular.
Ca material pentru studii in penetrant ranilor ale ochiului pot fi utilizate de evacuare a prejudiciului (dacă este cazul), capturarea acestuia cu un tifon sau o buclă, punctiformă camerei anterioare sau corpul străin extras este plasat într-un tub steril cu 1-2 ml soluție salină. După agitarea soluției tub de testare este utilizat pentru studiu.
Din materialul de camera frontală pentru studiu poate fi obținut cu așchietoare în timpul paracenteză sau prin puncție. După anestezia corneei (soluție tetracaină 3 picături 1%) și fixarea limbul globul ocular injectat oblic de acul seringii, acesta este administrat în camera anterioară (având grijă să nu rănească iris și capsula cristalinului!) Și 0,3 ml aspirat conținutul camerei anterioare.
Când endoftalmita poate fi necesar să fie ales dintr-un material vitros. Străpungerii efectuate globul ocular după anestezie (1 ml dintr-o soluție de novocaină 2% sub conjunctiva) ac acut și suficient de larg lumen lipi mai aproape de ecuator. Aspirata 0,3-0,5 conținutul intraocular ml.
Materialul rezultat este apoi investigat pentru a identifica microb, și pentru a determina tipul acestuia (diagnostic microbiologic). Materialul poate fi studiat:
- pe lamă (metoda bacterioscopic);
- în culturi (metoda bacteriologică corespunzătoare);
- In experimentele pe animale (metoda biologică).
metoda bacterioscopice
Acesta poate fi utilizat în orice condiții de spital ochi în prezența unui echipament de laborator simplu și unele substanțe chimice.
Pentru a face acest lucru, trebuie să aveți următoarele:
- bucla de metal;
- lamele de sticlă curate (sticlă de pe picătură de apă pură se împrăștie, și nu ia o formă sferică);
- o tavă cu suporturi pentru diapozitive (tije de sticlă sau de sârmă de cupru grosime);
- apă distilată;
- alcool;
- pensete;
- filtru de hârtie;
- soluție Lugol (1 g de iod, 2 g de iodură de potasiu, 300 ml apă distilată);
- soluții de coloranți (de preferință în flacoane, închise cu cartușe pipete din cauciuc).
Pentru purificare, noua fereastră se fierbe într-o soluție 1% de bicarbonat de sodiu (cenușă poate fi utilizat) și apoi se spală cu apă, acid clorhidric diluat și apă din nou. Paharele au fost în uz, este plasat timp de 1-2 ore în acid sulfuric, apoi se încălzește în soluție de bicarbonat de sodiu, se spală cu apă și imersate în 96 ° alcool. magazin de sticlă sau alcool sau alcool ºtergere, uscate, băncile astupate.
Vopseaua cel mai frecvent utilizate: soluție Ziehl lui (1 g fucsină bazic, cristal 5 g de acid carbolic, alcool 96 ° 10 ml glicerol - câteva picături de apă distilată, 100 ml). Pentru un colorant magenta Tsilya diluat, de obicei, cu apă distilată de 10 ori (diluate, apoase sau magenta). albastru de metilen (10 g albastru de metilen, alcool de 96 ° 100 ml). Este utilizat pentru alcalină albăstrelii Leffler (soluție de alcool de 30 ml de albastru de metilen, soluție 1% de potasiu sau hidroxid de sodiu 1 ml apă distilată, 100 ml). violet de gențiană fenolic (preparat la fel ca și soluția lui Ziehl).
Microbii studiat fie în forma in vivo (metodele „turtita“ și „agățat“ picături) sau mort (colorat în pregătire). Un studiu sub formă de viu identifică în principal microbi capacitatea de a muta în mod activ, în timp ce medicamentele pictate pot deveni familiari cu morfologia lor.
Exista metode simple de vopsire atunci când vopseaua este în general utilizate și metode de colorare complicate, care identifică anumite caracteristici ale structurii fizice si chimice a celulelor microbiene și deci au valoare diagnostic diferențial.
Tehnica Preparate alimentare pătată este după cum urmează. Materialul este aplicat pe o lamelă de sticlă curată și se distribuie uniform pe suprafața sub forma unui cerc sau a unui oval. Unge ar trebui să fie suficient de subțire. În prezența puroiului dens ar trebui să pună în primul rând pe o lamelă de sticlă, o picătură de apă distilată și se amestecă materialul din picătura. Pătarea se usucă în aer. Sticlă cu un medicament uscat luată de margini între degetul mare și arătător și cursă ascendentă fix care transportă prin tripla flacără arzător de alcool (la limita de lumină și părțile întunecate ale acesteia). Cu fixare suficientă a simțit o ușoară senzație de arsură în degete. vopsea frotiu fix. Se prepară mai multe medicamente, cel puțin două, dintre care unul este vopsit într-un mod simplu (Leffler albastru de metilen, diluat fucsin Tsilya), alta - pentru metoda Gram.
Colorare Leffler:
- per frotiu sunt plasate o bucată de hârtie de filtru, iar soluția a fost turnată Leffler albastru de metilen timp de 3-5 minute;
- preparat a fost spălat cu apă distilată și se usucă.
Colorația Gram:
- per frotiu sunt plasate o bucată de hârtie de filtru, care este turnat soluție violet de gențiană timp de 1-2 minute;
- vopsea topită, scoateți hârtia și, fără spălare cu apă, se toarnă Ra lyugolevsky soluție de medicament timp de 1 minut; astfel blackens frotiu;
- lyugolevsky soluție și frotiul decolorat cu alcool (de preferință, prin imersarea formularea într-un pahar cu un alcool până la un fluxuri de terminare a descărcării violet) decantat;
- spălat bine cu apă;
- pour frotiu diluat fucsin timp de 1-2 minute;
- preparare vopsea topită a fost spălată cu apă și se usucă.
Un mod convenabil de a Gram modificări Sineva, care au propus utilizarea pieselor prefierte de hârtie de filtru îmbibată într-o soluție de violet de gențiană și uscate. Pre-acoperită pe frotiu 2-3 picături de apă și apoi se pune aceste bucăți de hârtie. Apoi se procedează așa cum este descris mai sus.
microscopic produse cu lentile de imersie. La colorat de Leffler toti microbii sunt pătate albastre; pe colorația Gram - sau albastru-violet (bacterii Gram-pozitive) sau (bacterii gram-negative) roșu.
Un număr limitat de microbi implicate în boli ale exteriorului ochiului, iar caracteristicile lor morfologice caracteristice deseori vă permit de a pune diagnosticul microbiologic corect deja, folosind doar un singur examen microscopic.
metoda bacteriologică
devine necesară în cazurile în care studiul frotiuri nu este suficientă pentru a stabili tipul de microb sau este necesară pentru a determina sensibilitatea agenților patogeni izolați la antibiotice.
Referindu-ne pentru detalii cu privire la metoda bacteriologică la microbiologie specială, se va concentra aici numai pe principiile acestei metode. Prima etapă de lucru este redusă la alocarea anumitor tipuri de microbi, t. E. Pentru a obține culturi pure. În acest scop, recurgerea la desperechere mecanice la materialul de semănat și la utilizarea media, cel mai potrivit pentru dezvoltarea agenților patogeni putative (mediu de selecție). Prin subcultivarea colonii singulare cultivate pe mediu, o cultură pură se obține, care este examinat la microscop (prepara frotiuri) și reînsămânțate la un mediu diferentiat de diagnostic pentru a studia proprietățile biochimice ale agentului patogen.
cerințe înalte pentru ochii majorității microbi patogeni, în condițiile de cultură a condus la utilizarea preferentiala mass-media lor de izolare elective care conțin proteine native. Exemple sunt medii Elshniga (o parte din ser de cal sau fluid ascitic și cele două părți de bulion), ser laminate Leffler (trei părți de zer și o parte din bulion cu 1% peptonă, 0,5% NaCl și zahăr de struguri 1%) în agar cu sânge Leventhal (agar și 5-10% din sânge defibrinat).
În ceea ce privește determinarea sensibilității bacteriilor la antibiotice, cea mai simplă metodă pentru o astfel de determinare este utilizarea discurilor comercial special fabricate din hârtie de filtru, impregnate cu soluții de antibiotice și uscate în vid. Material pentru studiu (puroi. Punctiformă extras corp străin) este plasat într-un tub steril cu o soluție salină (1,5-2 ml). După agitare lichidul se toarnă într-un vas Petri, cel mai bine în două - una cu diabet zaharat, altele agar cu sânge - și balansarea răspândit în mod egal pe suprafața mediului. Apoi, pe suprafața de agar suprapuse discuri cu diferite antibiotice, la o distanță de 2 cm una de alta și de la marginea cupelor. Plăcile plasate într-un termostat (37 °) și cea mai mare a doua zi zona de inhibiție a creșterii în jurul discului este evaluată pe gradul de sensibilitate la un antibiotic de test microb. Lipsa zonei de inhibare a creșterii indică insensibilitatea microb la antibiotic.
Metoda biologică
în practica oftalmologică aplicabilă numai în acele cazuri în care diagnosticul proprietății constrânse toxigenic poate fi decisivă în determinarea tipului de microb (de exemplu, în diagnosticul diferențial al bacilul difteric bacillus și xeroza).
Diagnosticul de laborator al bolilor virale ochi
In prezent, un studiu special de virusuri, inclusiv virusul trahom (Fig. 77), se realizează prin cultivarea lor în culturi de țesuturi (pui de carcinom embrionar-ascite la șoareci și altele). Si microscopie electronica.
Fig. 77. Celula de comutare cu trahom.
In practica clinica pentru diagnosticul Trachoma, metoda de studiu citologic al pilitură conjunctivale pentru prezența sau absența celulelor (includerea) prowazeki-Galbershtedtera. În acest scop, marginea bont unui bisturiu sau toboganul este fragmentat de acoperire epiteliale conjunctivale (fără sânge), care este aplicat într-un strat subțire pe lamela de sticlă timp de 5 minute, se usucă în aer și fixate prin scufundare timp de 15-20 minute într-un pahar cu alcool metilic sau un amestec de Nikiforov ( eter etilic și alcool absolut în cantități egale). produc colorat peste 3-4 ore, o soluție de vopsea proaspăt preparată Romanowsky-Giemsa (rata de o picătură de cerneală per 1 ml apă distilată). Preparatul a fost apoi spălat cu jet de apă, se usucă în aer și examinate la microscop. În același timp, nucleul celulelor epiteliale sunt vopsite in roz, protoplasma - albastru deschis, includerea - în albastru, de culoare albastru-violet (Figura 77.). Recente reprezentate ca entități coccoid situat între masă cu granulație fină, și sunt recunoscute purtători de virus trachomatous. Ele sunt adesea găsite în cazuri netratate proaspete de trahom, dar poate fi, de asemenea, găsite la conjunctivita paratrahomnyh.
Studiile din ultimii ani au identificat o nouă formă de boli virale contagioase ale ochiului - o keratoconjunctivită epidemică, și studiul citologic al pilitură conjunctivale in aceasta boala a aratat in celulele epiteliale ale includerii inițiale destul de diferite de celule Prsvacheka (BL Polyak, NV Ploshinskaya).