Prepararea preparatelor histologice
Obiecte de histologie de cercetare
Definiția histologie ca știință
LECȚIA 1. Introducere în HISTOLOGIE
1. Histologie a științei microscopice și submicroscopic structura, dezvoltarea și funcționarea țesuturilor organismelor vii. De aceea, histologie studiază una dintre nivelurile de organizare a materiei vii tesut. Există următoarele niveluri ierarhice de organizare a materiei vii:
· Unitate structurală și funcțională a organelor;
Histologie, ca disciplină academică. Acesta include următoarele secțiuni: citologia, embriologie, histologie generale (studii structura și funcția țesuturilor), histologie private (structura microscopică a studiilor organe).
Obiectul principal al studiului de histologie este corpul unei persoane sănătoase, și, prin urmare, acest subiect este denumit histologie ca om.
Sarcina principală a Histologie este studiul structurii celulelor, țesuturilor, organelor, stabilirea de legături între diferitele fenomene, stabilirea legilor generale.
Histologie, cum ar fi anatomie, se referă la științele morfologice, a căror sarcină principală este de a studia structurile sistemelor vii. Spre deosebire de anatomia, studiile histologice structura materiei vii la nivel microscopic microscopic și electroni. În același timp, studiul structurii diferitelor elemente structurale sunt în curs de desfășurare în ceea ce privește funcțiile lor. Această abordare a studiului structurilor de trai a numit materia gistofiziologicheskim și histologie este adesea menționată ca histofiziologia. In plus, studiul materiei vii la nivel celular, țesuturi și organe considerate nu numai forma, mărimea și dispunerea structurii de interes, dar de cyto- și histochimie este adesea determinată de compoziția și substanțele care formează aceste structuri. În cele din urmă, studiem structura sunt de obicei luate în considerare în ceea ce privește dezvoltarea lor, atat in utero (embrionare), perioada și în timpul ontogeneza post-embrionare. Acest lucru explică necesitatea de a include în curs de histologie embriologie.
Histologie, ca orice știință, are propriile obiecte și metode de studiu lor. obiecte directe de studiu sunt fragmente de celule de țesuturi și organe într-un mod special pregătit să le studieze la microscop.
2. Obiectele de cercetare sunt împărțite în:
· Condiții de viață (celule într-o picătură de sânge, celule în cultură etc.);
· Mort sau fixe, care pot fi luate ca din organism viu (biopsie) si de la cadavre.
În orice caz, după ce a luat piesele sunt expuse la soluția de fixare sau congelare. Și în scopuri științifice și educaționale sunt folosite obiecte fixe. Gătită într-un anumit fel de medicamente sunt folosite pentru examinare la microscop, numit preparate histologice.
preparare Histologic poate fi sub forma:
· Secțiunea organ sau țesut colorat subțire;
· Unge pe sticla;
· Imprimarea pe sticla la fisurarea corpului;
· Film subțire de droguri.
pregătirea histologică a oricărei forme trebuie să îndeplinească următoarele cerințe:
· Menținerea structurilor de stat pe durata de viață;
· Să fie suficient de subțire și transparent, pentru a studia la microscop în lumină transmisă;
· Fii un contrast, care este, pentru a studia structura sub un microscop trebuie să fie clar definite;
· Pregătirile pentru microscopie cu lumină trebuie menținută pentru o lungă perioadă de timp și folosite pentru re-examinare.
Aceste cerințe sunt îndeplinite în prepararea formulării.
3. Alocați preparare sleduyuschieetapy de preparare histologice
Materialul de captare (fragmente de țesut sau organ), pentru a prepara formularea. Acest lucru ia în considerare următoarele puncte: un material de gard ar trebui să se desfășoare cât mai curând posibil după moartea sau sacrificarea animalului și, dacă este posibil, din obiectul viu (biopsie) structura celulei, țesutul sau organul de a conservat mai bine; bucăți de gard trebuie făcută cu un instrument ascuțit, astfel încât să nu traumatiza țesutul; Grosimea slice nu trebuie să depășească 5 mm, la soluția de fixare ar putea pătrunde în interiorul unei piese; a produs în mod necesar un marcaj (precizați numele corpului unui un număr de nume de familie umană sau animală, data prelevării de probe, și așa mai departe) bucata.
Material de prindere este necesar pentru a opri procesele metabolice și conservarea structurilor de degradare. Fixation se realizează prin imersiune adesea bucăți în fixarea fluid, care poate fi alcooli simpli și formaldehidă și soluție complexă Carnoy, și pe celălalt opritor Tsinker. Dispozitivul de reținere cauzează denaturarea proteinei și, prin urmare, suspendă procesele metabolice și stochează structura în starea vieții sale. Fixation poate fi realizat, de asemenea, prin congelare (răcire într-un curent de CO2, azot lichid, etc.). Fixarea Durata selectată empiric pentru fiecare țesut sau organ.
Completarea bucăți în mediu de etanșare (ceară de parafină, celloidin, rășină) sau congela pentru producerea ulterioară de felii subțiri.
Pregătirea secțiunilor privind instrumentele speciale (microtomice sau ultramicrotom) cu cuțite speciale. Secționată pentru microscopie lumina sunt lipite pe lamele de sticlă, iar pentru microscopie electronica - montat pe o plasă specială.
Colorat sau secțiuni contrastante (pentru microscopie electronică). Înainte de vopsire secțiuni de etanșare îndepărtat mediu (deparafinare). contrast de culoare a structurilor se realizează. Coloranții sunt împărțite în bază, acide și neutre. coloranți de bază (de obicei hematoxilină) și acid (eozină) sunt cele mai des utilizate. folosesc adesea coloranți complecși.
secțiunile Awakening (xilen, toluen), găsind în rășină (balsam, polistiren), închiderea unui capac de sticlă.
După aceste tratamente medicamentoase succesivi poate fi studiat la microscop lumina.
În scopul microscopie electronică în etapele de preparare a medicamentelor sunt unele dintre caracteristicile, dar principiile generale sunt aceleași. Principala diferență constă în faptul că preparatul histologic pentru microscopie cu lumină pot fi stocate definitiv și reutilizate. Secționată pentru microscopie electronică sunt folosite doar o singură dată. În acest caz, fotografiat în primul rând obiectele de interes de droguri, precum și studiul structurilor se realizează deja în electroni.
consistență lichidă din țesuturi (sânge, măduvă osoasă, etc.) sunt realizate sub forma preparatelor frotiu pe o lamelă de sticlă, care este fixat, colorate și apoi examinate.
Din organe parenchimatoase casante (ficat, rinichi, etc.) sunt realizate în amprenta Preparatele sub forma corpului: după interstițiul fracturii sau organ la organ defectoscopie aplicat sticlă diapozitive pe care sunt lipite unele celule libere. Preparatul a fost apoi fixat, se colorează și studiat.
În final, unele dintre corpurile (mezenter, PIA) sau de preparate de țesut conjunctiv în vrac sunt realizate prin întindere a filmului sau zdrobirea între cele două geamuri și cu fixarea ulterioară, colorare și turnarea în rășină.
· Microscopie de lumină (rezoluție de 0,2 microni), cel mai frecvent tip de microscopie;
· Microscopie Ultraviolet (rezolutie 0.1 microni);
· Fluorescente (fluoresceină) microscopie pentru a determina substanțele chimice din aceste structuri;
· Microscopie cu contrast de fază pentru studiul structurilor din slide-uri histologice necolorate;
· Pentru a studia microscopie cu polarizare, în principal, structuri fibroase;
· Microscopie cu câmp întunecat pentru studiul lucrurilor vii;
· Microscopie în lumină incidente pentru studiul obiectelor groase;
· Microscopie electronică (rezoluție 0.1-0.7 nm), două variante sale translucide (transmisie) microscopie electronică și microscopia de scanare sau de cartografiere raster dă suprafață ultrastructures.
Histochimice și metode citochimice permite determinarea compoziției substanțelor chimice și cantitatea acestora, chiar și în structurile studiate. Metoda se bazează pe efectuarea reacțiilor chimice cu reactivii utilizați și substanțele chimice din substrat pentru a forma un produs de reacție (contrast sau fluorescență), care este apoi determinată prin lumina sau microscopie cu fluorescență.
Metoda de centrifugare diferențială ne permite să studieze organite individuale sau fragmente derivate din celula. Pentru aceasta felie examinate organ se triturează, se toarnă soluție salină normală și apoi dispersată într-o centrifugă la viteze diferite (2-150 th.) Pentru a da fracțiuni de interes sunt apoi studiate prin diverse metode.
Metoda Interferometria pentru determinarea masei substanțelor uscate în obiectele vii sau fixe.
Metode Immunomorfologichesky permite utilizarea reacțiilor pre-imune efectuate pe baza interacțiunii antigen-anticorp, pentru a determina o subpopulație de limfocite pentru a determina gradul de celule străinătății efectua tipizarea histologice a țesuturilor și organelor (determinarea histocompatibilitate) pentru transplantul de organe.
Metoda de cultură de celule (in vitro, in vivo) cultivarea celulelor in vitro sau in capsule speciale într-un organism și studiu ulterior al celulelor vii sub microscop.
Unitățile utilizate în histologie
Pentru a măsura structurile într-un microscop optic este utilizat în principal micrometri: 1 m este 0,001 mm; în nanometri microscopie de electroni utilizate 1 nm este 0,001 microni.
5. În istoria histologie convențional împărțită în trei perioade:
Perioada Domikroskopichesky (în IV. BC. E. La 1665 YG) asociate cu numele lui Aristotel, Galen, Avicenna Vesalius, caracterizat uterină și încercările de izolare la animale și oameni de țesut neomogene (tare, moale, lichide și așa mai departe) și folosind metode de disecție anatomice.
O atenție deosebită a fost acordată studiul structurii celulei. Prezența Yang Purkinje descrisă în celulele animale „protoplasmă“ (citoplasmatici) și nucleu, iar mai târziu a confirmat prezența R. Brown de bază și în cele mai multe celule animale. Botanistul M. Schleiden origine kletoktsitokenezisom interesat. Rezultatele acestor studii au permis T. Schwann, pe baza mesajelor lor, teoria celulei formulate sub forma a trei postulate (1838-1839 gg.):
· Toate plantele și animalele sunt compuse din celule;
· Toate celulele se dezvolta pe principiul general al tsitoblastemy;
· Fiecare celulă are o activitate vitală independentă și funcțiile vitale ale organismului este suma activității celulei.
Cu toate acestea, la scurt timp Virchow (1858), a declarat că dezvoltarea celulelor se realizează prin divizarea celulelor originale (oricare celulă a celulelor). Proiectat de teoria celulei T. Schwann dispoziții sunt relevante în prezent, deși formulate în mod diferit.
Situația actuală a teoriei celulei:
· O celulă este cea mai mică unitate de viață;
· Celulele organismelor animale sunt similare in structura lor;
· Proliferarea celulelor are loc prin divizarea celulei originale;
· Organisme multicelulare sunt ansambluri complexe de celule și derivatele lor combinate în sistemele de țesuturi și organe interconectate forme celulare, umorale și neuronale de reglementare.
· Microscoape îmbunătățirea în continuare, în special crearea de lentile acromatice, a relevat în celule mai mici structuri:
· Centrul de Cell Hertwig, 1875.;
· Aparat cu placa Mesh sau complexul Golgi 1898.
· Mitocondriile Benda, 1898
Stadiul actual de dezvoltare a Histologie începe cu 1950 de la începutul utilizării microscop electronic pentru studiul obiectelor biologice, desi microscopul electronic a fost inventat mai devreme (E. Ruska, M. Knoll, 1931). Cu toate acestea, în stadiul actual de dezvoltare se caracterizează prin introducerea histologie, nu numai microscopul electronic, dar și alte metode: cyto- și histochimie, gistoradiografii de mai sus și a altor tehnici moderne. Acesta este utilizat de obicei printr-o varietate de tehnici complexe, care permite de a face nu numai o imagine calitativă a structurilor studiate, dar, de asemenea, pentru a obține caracteristici cantitative exacte. In special utilizate pe scară largă în prezent diverse tehnici morfometrice inclusiv sistemul de prelucrare a informației obținute automatizat prin utilizarea calculatoarelor.