METODE DE DETERMINARE A FACTORULUI DE RESURS
Toate metodele de determinare a factorului Rh sunt împărțite în metodele utilizate în clinică: în condițiile de admitere, în sala de operație, în salonul din apropierea patului pacientului, etc., care nu necesită echipamente speciale de laborator și metode de laborator.
- METODE DE DETERMINARE A FACTORULUI RH ÎN CLINICA
Se folosesc două așa-numite metode exprese:
- Metoda Express cu un reactiv standard universal într-un tub de testare fără încălzire.
- Metoda Express pe planul fără încălzire.
a) Metoda Rap pentru determinarea factorului Rh de către reactivul universal standard într-un tub de testare fără încălzire
Pentru a investiga de sânge proaspăt incoagulated luat de la un deget (venă) pot fi utilizate în mod direct înainte de testare sau stocate de sânge fără tratare prealabilă, precum eritrocitelor din tubul după formarea unui cheag și ser de sedimentare.
Procedura de efectuare a reacției
Testul se efectuează în tuburi de centrifugare cu un volum de cel puțin 10 ml. În partea inferioară a eprubetei, adăugați o picătură de reactiv universal standard, care este zerul antirezus al grupului AB (IV) conținând 33% soluție de poliglucin. Apoi se adaugă o picătură de sânge (sau eritrocite). Rotitoare conținutul tub circular frotiu de pe suprafața sa interioară, astfel încât conținutul răspândit de-a lungul pereților. Aceasta accelerează foarte mult aglutinarea și o face lobată mare. Aglutinarea pe peretele tubului are loc, de obicei, în primul minut, dar pentru a forma un complex stabil „antigen - anticorp“ și o aglutinare limpede trebuie monitorizați timp de cel puțin 3 minute. Apoi, pentru a exclude agregarea nespecifică de eritrocite într-o eprubetă se adaugă 3,2 ml de soluție fiziologică și se amestecă prin răsturnare tuburile odnodvukratnogo (fără agitare!).
Evaluarea rezultatelor
Prezența aglutinării (fulgi mari pe fundalul unui os lichid iluminat) indică un accesoriu rhesus pozitiv al sângelui studiat. Absența aglutinării (într-un tub de testat un lichid roz omogen colorat) indică o probă de sânge negative negativ Rh.
b) Metoda expresie pentru determinarea factorului Rh pe un plan fără încălzire
Procedura de efectuare a reacției
Pe placa albă cu o suprafață umectabilă scrieți numele și inițialele persoanei al cărei sânge este examinat. Pe marginea din stânga a plăcii faceți inscripția "ser - antiresus", în dreapta - * "ser de control". Ultimul este serul diluat în albumina AB (IV), care nu conține anticorpi anti-rhesus. În consecință, inscripțiile de pe placă sunt plasate pe 1-2 picături (0,05-0,1 ml) din antiresus și serul de control. La ambele picături se adaugă eritrocitele investigate. Sângele se amestecă cu reactivul cu o tijă de sticlă uscată, care se întinde pe placă până când se formează o picătură de diametru de 1,5 cm. Plăcuța este ușor agitată. După 3-4 minute pentru a elimina posibila aglutinare nespecifică la fiecare picătură, adăugați 5-6 picături de soluție salină. Apoi, placa este rotită timp de 5 minute.
Evaluarea rezultatelor
Rezultatul este evaluat prin prezența sau absența aglutinării cu ochiul liber.
Prezența unei aglutinări bine exprimate în picătură pe stânga indică o afinitate pozitivă a sângelui studiat. Absența aglutinării în această picătură (colorare omogenă) sugerează prezența Rh negativă a sângelui testat (Rh-). Rezultatul este considerat valabil doar în absența semnelor de aglutinare în picătură corectă (control).
- METODE DE LABORATOR PENTRU DETERMINAREA FACTORULUI DE RESURS
Pentru a determina afinitatea rhesus a sângelui pacientului într-un laborator, se folosesc patru metode principale.
a) Metoda de aglutinare în mediu salin
Se utilizează seruri speciale care conțin anticorpi anti-rhesus compleți. Eritrocitele într-o suspensie 2% în soluție izotonică de clorură de sodiu au fost combinate într-un ser Rh eprubetă. Tuburile au fost plasate în 1 oră într-un termostat la 37 ° C, după care peleta eritrocitare la fundul tubului este tratat cu o lupă și prin forma sa în considerare rezultatul. În cazul în care un rezultat pozitiv (Rh +) precipita are un model caracteristic sub formă de filamente sau graininess. Cu un negativ (Rh-) localizat precipita uniform și are forma prezentată în mod corect cerc.
b) Metoda de coagulare cu gelatină
În tub se plasează volume egale de eritrocite studiate, ser anti-rhesus și soluție de gelatină 10%. Tuburile sunt incubate la o temperatură de 45-48 ° C, după care se adaugă un volum de soluție fiziologică de zece ori. Tuburile se transformă de 2-3 ori și se ia în considerare rezultatul prezenței aglutinării vizibile cu ochiul liber.
c) Testul antiglobulin indirect (reacția Coombs)
Această reacție este cea mai sensibilă pentru detectarea anticorpilor incompleți la auto- și izo-antigeni ai eritrocitelor. Pentru ea, de regulă, a recurs la apariția dificultăților în determinarea sângelui legat de Rh, asociat cu rezultatele fuzzy obținute prin alte metode de investigare. Reacția se bazează pe utilizarea serului antiglobulină (ACS).
In tratamentul eritrocitelor Rh-pozitivi anticorpi anti-Rh incomplet vine lor (sensibilizare) care învelește în raport cu ACS, și care aglutineaza eritrocitele sensibilizat cum este globuline anticorp.
În eprubeta, se adaugă serul antirezus și celulele roșii sanguine spălate; este plasat timp de 1 oră într-un termostat la o temperatură de 37 ° C, după care eritrocitele sunt spălate bine. Următoarea etapă de reacție se desfășoară pe un plan. O picătură de globule roșii este amestecată cu o cantitate egală de ser antiglobulină și rezultatul este luat în considerare. Prezența aglutinării este o indicație că proba de sânge testată este Rh-pozitivă. Dacă nu există aglutinare, sângele de test este Rh-negativ.
d) Reacția cu anticorpi monoclonali anti-B
Pe placa de amestec picătură mai mare (0,1 ml) de anticorp monoclonal anti-B (mAb) și o mică picătură (0,01ml) au investigat de sânge.
Reacția a fost observată timp de 2,5 minute. Atunci când se amestecă anti-D-MKA cu probele de celule roșii din sânge Rh-pozitiv, se observă o aglutinare a petalelor cu debut rapid. Dacă sângele este Rh negativ, nu există aglutinare.
POSIBILE MISTAKES
*
Cele mai frecvente probleme sunt rezultatul unor erori sistematice în cercetare, în special atunci când se utilizează metode konglyutinatsionnyh. rezultate false pot determina relația greșită dintre ser și eritrocite, evaluarea prematură a rezultatelor, evaluarea rezultatelor picăturii de uscare, determinarea factorului Rh în proba de sânge hemolizat și stocată pe termen lung, precum și utilizarea de seruri latente infectate și putred, folosind seruri expirat .
Cauza erorii poate fi caracteristicile biologice ale testului de sânge: reducerea agglyutinabelnosti antigen Rh in anumite boli ale ficatului, sistemul de rinichi și de sânge și testul non-specific eritrocit aglutinare. În cazul rezultatelor discutabile ale studiului repetat folosind un ser mai activ Rh.