F. S. Kirzhayev și T. Burmistrova
Institutul de Cercetare Științifică pentru Bird Bird (71) Solicitantul (54) METODA DE OBȚINERE A ANTIGENULUI PENTRU DIAGNOSTIC
PULLOROZA - TIPĂ DE PĂSĂRI ȘI
Invenția se referă la metode de preparare a preparatelor de diagnosticare, în special a preparatelor utilizate pentru diagnosticul de masă tri-viață a puleoroza-tifoid la păsări. 5
Metodele cunoscute pentru prepararea agenților de diagnostic care cuprinde fracția antigenic de selecție din celulele microbiene in forma de PTP negidradirovannogo polizaharid degradate sau lipopopisaharidnogo 10. Komplelsa urmat de sensibilizator l formalinizirovanpyh eritrocite (11.
Cu toate acestea, antigenele obținute printr-o metodă cunoscută, prezintă o activitate ridicată numai în reacția serologică pretsipita- 15 TION și puțin seropogicheskih activă în alte tipuri de reacții, care, în special, necesare pentru a diagnostica pulloroza â € „păsări tifoidice.
În cadrul practicii de păsări de curte din ziua diagnosticului serologic de phobic-tifoid, în câmp se folosește un antigen colorat puls corpuscular.
Metoda de obținere a unui aptigen holografic color constă în creșterea declanșatorului unei pulloroze - un nutrient
"La început, masa bacteriană se obține prin centrifugare, celulele microbiene sunt prevăzute cu formaldehidă, urmată de vopsirea lor cu anilină (2j.
Cu toate acestea, în realizarea unei astfel de metode, este imposibil să se obțină un antigen foarte sensibil și specific. Chiar și studiile repetate cu un antigen pulpei de culoare nu oferă un mijloc de detectare a tuturor purtătorilor aviari ai agenților patogeni patogeni-tipifici în turma. Valoarea diagnostică a acestui antigen este deosebit de scăzută atunci când se studiază păsările de la o vârstă fragedă. În plus, studiul acestui antigen cauzează adesea cazuri de reacții non-acute la păsări. lipsită de agentul patogen Pullorase - tifos.
Sensibilitatea 11ovyspt a întregului pullorn de antigen de celule pro practic imposibil. 310 I6) c! I03rreHo Ht.riocToya n-lea și niveluri foarte scăzute la păsările de aglutinină din sânge a pacienților și llorozom â € "tifoide și yn" tensnvnost claritate și reacție vizibilă arg gillOTHHQIIHII HQ STekli cu IlerIÅõ × ÎÊËÐTÎ × .dym antigen kp T independent Din titrul "hve" "glutinin. Alte tipuri de tsirkuliruyushih anticorpi ce reacționează cu celule bacteriene, nu provoacă formarea makroskotsicheski vizibile antigen-anticorp complex (aglutinează), 5
Bel invenții - dezvoltarea unei metode de obținere a unui antigen purulent, care face posibilă obținerea unor diagnostice extrem de sensibile, specifice și stabile, adecvate pentru studierea păsărilor în condiții de câmp-10, la orice vârstă.
Acest lucru se realizează datorită faptului că fracția polizaharid-polipeptidă este izolată de masa bacteriană, iar eritrocitele formalizate ale oilor sunt sexisitizate.
Fomalinizarea eritrocitelor ramificate se efectuează cu 0,3% printr-o soluție tânără de formaldehidă timp de 14 ore la 40 ° C.
Sensibilizarea eritrocitelor se efectuează 20 consecutiv 45 de minute la 80 ° C și 2 ore la 40 ° C.
Cu această metodă primesc. antigenul specific cel mai activ și solubil â € „fracțiune polizaharidică-popileptidnuyu 25 TION agentului .pulloroza â €“ celule roșii din sânge tifoidă sensibilizator oaie, care intră în reacție vizibilă macroscopic nu cu un singur tip de anticorp (de exemplu, aglutinine, în particular tselnokletoch 30 NYM culoare pullornym antigen) și cu toate titrul de anticorpi tsirkuliruyushimi global în sângele păsărilor .bolnyh aglutinina titru semnificativ mai mare (de exemplu de 16 ori) și nu reacționează cu vydonespetsificheskimi; anticorpi (de exemplu, anticorpi E.cob).
Păstrarea eritrocitelor în 0,3% soluție formapdegida în contrast cu concentrații mai mari (de exemplu 1,5-3%) în siguranță eritrocite conserve, nu alterează capacitatea lor de a sorbi fracțiune polizaharidică polipeptida și sensibilizarea eritrocitelor cu formică
80 ° C asigură o legătură puternică a antigenului cu receptorii de eritrocite și un grad ridicat de saturație a antigenului lor.
Un exemplu. Obținerea a 50.000 de doze de antigen pentru diagnosticul intravital de pompodoroză - tifoid de păsări.
A. Prepararea polipeptidului polizaharidic. fracțiunea a patogenului, pulrooza - tifos.
Masa bacteriană de S. pMi și Um-aImFute, crescută pe medii nutritive obișnuite, este precipitată prin centrifugare la
5000 rpm și spălate de două ori cu soluție fiziologică în același regim de centrifugare. Precipitatul masei bacteriene spălate este suspendat în 0,1N. o soluție de acid acetic glacial la o soluție de 45 miliarde de celule microbiene în România
1 ml conform standardului de turbiditate optică și u este extras la 00-92; C pentru
60 min. Hidropisatul este eliberat din celulele bacteriene prin centrifugare
6000 rpm timp de 45 de minute, se diapisizează în apă de la robinet până la pH
5,0-5,5. fracțiune Popipeptidnuyu-polizaharidă este precipitat din hidrolizatul de 8-10 volume de etanol, se colectează prin centrifugare la 4000 LIS / min timp de 20 min și se dizolvă în apă distilată (pH 8,5-9,0) la 10 g materie solidă uscată per 1 litru de apă.
Zaharuri reducătoare în ceea ce privește glucoza 300-315
Azot total 7 5-80
Azotul rezidual este de 55-60. Azot proteic 20-25
B. Formarea eritrocitelor de berbec.
1. l de sânge de ovine într-un volum egal de soluție Opsever este centrifugat la
10 volume de soluție tampon.
C. Senslbil, formalizarea eritrocitelor berbecului prin fracțiunea polizaharid-polpeptidă a tifoidului agenților patogeni cauzatori.
Pentru 1 litru de suspensie 0% de eritrocite formalinizate pe o soluție tamponată cu fosfat (pH 7,0-7,2) 250-300 mp
1% soluție apoasă de agent fracție polisaharidnopolipeptidnoy puploroza â € „tshatelno tifoide agită și se încălzește într-o baie de apă la 80 ° C timp de 45 min și apoi se transferă într-un termostat timp de 2 ore la 40 ° C
Compilat de L. Murai
Correctorul P. Makarievich
Comanda 770/30 Circulatie 567 Abonament
11NIIPI al Comitetului de Stat al Consiliului de Miniștri al URSS privind invențiile și descoperirile
113035, Moscova, Zh-35, Raushskaya Nab. d. 4/5
Sucursala PPP r. Uzhhorod, st. Design, 4
Precipitatul celulelor roșii sanguine sensibilizate și spălate este suspendat într-o soluție tampon la o concentrație de 10%. Merthiolate 1: 10000.
Pulbere antigen, fierte
5 propusă în același mod, păstrează activitatea și specificitatea în cursul anului cu
Rezultatele experimentale indică faptul că antigenul pullorny derivat sposooom ni propus pentru sensibilitate superioară față de antigen cunoscut în reacții eprubeta în 15-30 de ori, iar în condiții fermele de păsări relevă 3-6 ori păsările bolnave și nu reacționează cu anticorpii vidonespetsificheskimi .
Sensibilitate ridicată și specificitatea antigenului permite studiul păsărilor pe â € pulloroz „febră la orice vârstă, începând cu 30 de zile, ceea ce este foarte important în industria modernă păsări de curte; De 2-3 ori reduce timpul de recuperare de la ferme pulloroza-febra; crește siguranța puiilor
În vârstă de vârstă de vârstă de vârstă de 1-2 ani, reducerea bruscă a costului medicamentelor utilizate în scopuri terapeutice și profilactice la creșterea păsărilor.
Metoda de studiu a păsărilor nu se modifică în comparație cu cea utilizată pentru antigenul cunoscut.
1, Procedeu pentru prepararea unui antigen pentru pulloroza diagnostic - păsări febra, cuprinzând prepararea unui pulloroza greutate agent patogen bacterian â € „tifoidă, -m de L și h și dc w și w I că, pentru a crește sensibilitatea și specificitatea antigenului din nQluchennoy masă bacteriană aolisaharidno izolată poiipeptidă fracție și eritrocite sensibilizate se formică Oarai.
2.Sposobpop. 1, caracterizat prin aceea că formalinizarea eritrocitelor se efectuează cu o soluție de formaldehidă 0,3% timp de 14 ore la 40 ° C.
3, Metoda conform. 1 și 2, faptul că sensibilizarea eritrocitelor formalizate ale unui berbec este testată secvențial la 80 ° C pentru
45 minute și la 40 ° C timp de 2 ore.
4. Metodă conform revendicării 1, în care fracțiunea polizaharid-polipeptidă este izolată prin hidroliza unei mase bacteriene de 0,1N. soluție de acid acetic la 90-92 ° C timp de 60 minute urmată de precipitarea sa din hidrolizat cu 8-10 volume de etanol.
Sursele de informații luate în considerare la examinare;
1. Cabot E. Meyer, M. Immunochemistry Experimental, M. "Medicine, 1966, pp. 124-128, 550-554.
2. Kovalenko Ya, P. Utilizarea medicamentelor biologice și chimioterapeutice în vetevnnarin, J. Celkoeizdat, 1951, p. 63.