Colorarea microorganismelor - un set de metode și tehnici utilizate pentru studierea proprietăților morfologice ale microorganismelor. În starea nativă (naturală), bacteriile au același indice de refracție ca și sticla, deci sunt invizibile sub microscop. O. M. pot fi folosite pentru a studia morfolul lor. Caracteristicile necesare pentru efectuarea cercetărilor bacteriologice. Colorarea bacteriilor se realizează atât pentru detectarea acestora în materialul investigat în timpul diagnosticării bacterioscopice, cât și pentru identificarea acestora după izolarea unei culturi pure din materialul studiat cu bacteriol. studiu.
Prepararea formulării colorate constă în următoarele etape: pregătirea unui frotiu, uscarea acestuia, fixare și colorare. Pentru prepararea unui frotiu în mijlocul curat diapozitiv de sticlă acoperit cu picătură mică de apă și folosind o buclă bacteriană plasată în acesta materialul testat. Materialul este distribuit uniform pe geam, astfel încât să formeze o circulară frotiu subțire sau oval dimensiune 1-2 cm2. Apoi preparatul a fost uscat la temperatura camerei, sau în aer sau într-un curent de aer cald deasupra unui arzător cu flacără ridicată. Frotiu uscat supus fixare, astfel încât acesta este atașat la sticlă (fixe), microbii sunt inactivate si sigure creste sensibilitatea lor la decolorare. Se folosesc diferite metode de fixare. Cea mai simplă și cea mai comună metodă este de a fixa caldura - încălzire într-o flacără de arzător (Prepararea efectuată în mod repetat, prin cea mai tare parte a flăcării). În anumite cazuri, recurgerea la formulare de fixare etil sau alcool metilic, acetonă, un amestec de volume egale de etanol și eter (prin Nikiforov). După fixare, se produce culoarea frotiului. Deosebit de potrivit pentru vopsirea microbi sunt coloranți de bază și neutre de anilină. Preparatul colorat este spălat cu apă și uscat. Unge aplicat picătură uscată de ulei de imersie și mikroskopiruyut folosind sistemul de imersie microscop.
Există modalități simple și complexe de colorare a microbilor. Cu o culoare simplă, paradisul vă permite să studiați rapid morfolul. mai ales microbi, de obicei folosesc un singur colorant, de multe ori roșu - magenta (colorare se face în 1-2 minute) sau albastru - albastru de metilen (vopsea frotiu timp de prelucrare 3-5 min). Atunci când se utilizează metode de colorare complicate, două sau mai multe contrastante colorant caustic, agenți și alții de diferențiere. Printre metodele de colorare complicate tehnici diferentiale distinge și metode de identificare a structurilor celulare individuale. Prin metode diferențiale includ Gram și Ziehl-Nelsen care servește pentru a distinge culoarea microorganismelor similare din Morphol. proprietăți.
Metoda de colorare Gram este cea mai obișnuită metodă complexă de colorare. Bacteriile, în funcție de faptul dacă acestea sunt supuse colorare prin această metodă sau nu, sunt împărțite în două grupe, Gram pozitive (Gram vopsirea) și gram-negativi (fără colorant), în diferența de culoare din cauza structura diferita peretelui celular al bacteriilor Gram-pozitive și Gram-negative.
Tehnica Gram este fixat frotiu procesarea secvențială: culoare violet de gențiană cu o hârtie de filtru (1-2 min), p set de prelucrare Lugol (1 min), albire alcool (1 / 2-1 min - la un jet-uri de colorant descărcare violet) spălare cu apă, colorare cu fuchsină (1-2 minute). Esența metodei constă în faptul că bacteriile gram-pozitive păstrează colorant complex - iodo nu decoloreze Gram alcool nu au această proprietate, și anume, decolorat cu alcool (agent de diferențiere) și fucsin dokrashivayutsya ... Ca rezultat, bacteriile gram-pozitive dobandesc culoarea violeta, bacteriile gram-negative - rosii.
Metoda Ziehl-Nelsen pentru diferențierea bacteriilor producătoare de acid-rapid (agenti de tuberculoza si lepra cauzative) de acid rapid. Când se colorează prin această metodă, folosind soluția Ziehl lui, o (substanță de diferențiere) sulfuric-tu și albastru de metilen. bacterii acido-se colorează soluția roșie Ziehl și nedecolorate la-unu piardă acid rapid culoarea roșie când se procesează un albastru-una și dokrashivayutsya metilen.
Un număr de metode complexe sunt utilizate pentru a studia structura unei celule microbiene. Deci, pentru detectarea unei capsule în bacterii, se folosește metoda Hins, pentru a detecta sporii bacterieni - metoda Aujeszky, volumul poate fi colorat folosind metoda Neisser. Identificarea flagelui folosind metodele de "over-paint", în care celulele și structurile lor individuale cresc în dimensiune și devin vizibile sub un microscop luminos. Metodele de "supra-vopsire" includ, în special, metoda de argintare de către Morozov. Poate fi folosit și pentru a pata spirochetele și chiar și pentru cei mai mari viruși - virusurile variolei.
Metoda universală de omogenitate este culoarea Romanovsky-Giemsa (un amestec de azură, eozină și albastru de metilen). Când colorarea celei mai simple dintre citoplasmele lor devine albastră, iar nucleul - roșu-violet. Această metodă este utilizată și în studiul rickettsiei, chlamydia, spirochetei, elementelor formate din sânge.