Colorarea microorganismelor - cea mai obișnuită în microbiologie, un set de metode și tehnici utilizate pentru a detecta și identifica microorganismele folosind un microscop. În starea nativă (naturală), bacteriile au același indice de refracție ca și sticla, deci sunt invizibile atunci când sunt examinate microscopic. Acoperirea microorganismelor permite examinarea caracteristicilor morfologice ale microbilor si uneori indicati aspectul lor, cum ar fi anumiți microbi - identice în morfologie - sunt colorate în mod diferit, folosind aceleași metode de colorare complicate. Colorarea microorganismelor este un proces fizico-chimic de combinare a componentelor chimice ale unei celule cu vopsea. Într-o serie de cazuri, diferite părți ale celulei microbiene (nucleu, citoplasmă) sunt colorate selectiv cu coloranți diferiți. Cele mai potrivite pentru colorarea microorganismelor sunt vopselele de anilină, în principal vopsele de bază și neutre, vopselele de acizi sunt mai puțin potrivite.
Prepararea unui preparat colorat include un număr de etape: 1) prepararea unui frotiu; 2) uscarea frotiului; 3) fixarea frotiului; 4) colorarea; 5) uscare.
Frotiul este preparat pe diapozitive curate, în mijlocul cărora se aplică o mică picătură de apă și se introduce un material de testare în el cu ajutorul unei bucle bacteriologice. Materialul este răspândit pe sticlă cu un strat subțire uniform, dimensiunea frotiului este de -1-2 cm2.
Preparatul este de obicei uscat la temperatura camerei în aer. Pentru a accelera uscarea, este permisă încălzirea frotiului într-un curent de aer cald ridicat deasupra flăcării arzătorului.
Frotiul uscat suferă o fixare, în care frotiul este atașat la sticlă (fix), iar microbii devin mai sensibili la colorare. Există o mulțime de metode de fixare. Cea mai simplă și comună - fixare prin încălzirea prin foc pe flacăra arzătorului (pregătirea se face de mai multe ori prin partea cea mai fierbinte a flacării arzătorului). În unele cazuri, se recurge la lichide de fixare (alcool etilic sau metil, acetonă, un amestec de volume egale de alcool și eter - conform lui Nikiforov). După fixare, frotiu este colorat. Cantitatea de vopsea aplicată preparatului trebuie să fie astfel încât să acopere întreaga suprafață a frotiului. După termenul de colorare (2-5 minute), vopseaua este drenată și preparatul este spălat cu apă.
Există metode simple, complexe și diferențiale pentru colorarea microbilor. În culori simple, de obicei se utilizează o vopsea, cel mai adesea roșu - magenta sau albastru - albastru de metilen. Fuchsin culori mai repede (1-2 minute), albastru de metilen - mai lent (3-5 minute). Fuchsin este preparat sub forma unei soluții carbolice concentrate (fuchsin Tsilya), foarte rezistentă și potrivită pentru colorare timp de mai multe luni. Albastru de metilen este preparat în prealabil într-o soluție de alcool saturat, care este stabilă și poate fi stocată pentru o perioadă lungă de timp.
Metodele complexe de colorare, în care sunt utilizate două sau mai multe coloranți, sunt metode valoroase utilizate în diagnosticul microbiologic al bolilor infecțioase.
Valoarea cea mai practică este în colorarea Gram (vezi metoda de colorare a lui Groma) și colorarea în funcție de Tsilya.
Metoda de colorare în conformitate cu Tsilyu este principala pentru colorarea bacteriilor acide-rapide. Două coloranți sunt utilizați aici: fuchsin carbolic Tsilya și albastru de metilen. Acid rezistent la bacterii sunt colorate roșu, toate formele non-acid-rapid - în albastru.
Metoda lui Benignti este una dintre căile de colorare a flagelului. Stain și colorarea una din soluția de colorare este în ex tempore (după caz): I - sulfat de zinc - 1 g, tanin - 10 grame, apă distilată - 100 ml și II - soluție saturată de alcool gențiană violet. Se amestecă 5 ml de soluție I și 3 ml de soluție II, se aplică la medicament, este încălzit până când vaporii se spală cu apă, se usucă și se tratează.
Dintre alte metode complexe, se folosește așa numita metodă Burri negativă, metoda Hins pentru detectarea capsulelor (vezi metoda Hins) și o serie de alte. A se vedea, de asemenea, Studiul bacteriologic.
Acoperirea Microorganisme - un set de metode pentru studierea structurii si morfologiei microscopie microorganisme preparatelor preparate din culturi pure sau material de test. Vopsirea microorganismelor - o tehnică important de diagnostic, care permite stabilirea caracteristicilor morfologice ale microb, precum și pentru a distinge microbi morfologic identice, care sunt în mod diferit pictate folosind aceleași tehnici de colorare.
Colorarea microorganismelor este un proces fizico-chimic complex, mecanismul cărora nu a fost studiat în detaliu. Culoarea microorganismelor se bazează pe interacțiunea structurilor bacteriene individuale cu colorantul. În consecință, rezultatul colorării microorganismelor depinde de structura chimică și fizică a microbilor, de proprietățile colorantului, de metoda de preparare și de metoda de tratare a microbului. Pentru colorarea microorganismelor utilizați coloranți de bază, acidi și neutri. În coloranții de bază, originea colorării este un cation, iar anionul este incolor; în acid, invers, partea de colorare a moleculei este un anion. Cationii formați în timpul disocierii coloranților de bază sunt combinați cu structuri bacteriene care au proprietăți acide; anionii eliberați ai coloranților acide sunt combinați cu structurile microorganismului care au proprietăți de bază.
În mediile obișnuite, bacteriile au o încărcătură de suprafață negativă, în citoplasmă și în nucleul lor există compuși de natură acidă. Prin urmare, coloranți de bază, în care fragmentul de colorant este încărcate pozitiv, au o afinitate mai mare pentru bacterii si ce mai utilizate în microbiologie decât coloranți acizi, de obicei, folosite pentru colorarea contrastante pregătire fundal. În vopselele neutre, cationii și anionii (vopseaua lui Romanovsky-Giemsa) sunt colorați.
bacterii fixe sunt colorate vii mai bine, deoarece peretele celular și membrana citoplasmatică a unei celule vii pentru a limita pătrunderea colorantului în ea. Pentru microorganisme colorare vitale (microorganisme vii colorare) coloranți utilizați în diluții mari (1:10 000 la 1: 100000) pentru a se evita artefacte care apar ca rezultat al acțiunii toxice a colorantului asupra organismelor vii. Cel mai adesea microorganisme colorare vitală sunt sipim de metilen, roșu neutru și altele. Formulările sunt preparate pentru microscopie prin picături zdrobite. (vezi) sau o picătură suspendată (vezi).
Cele mai comune metode de colorare a microorganismelor în preparate fixe. Aceste metode sunt împărțite în simple și complexe. Atunci când se utilizează o metodă simplă un colorant (de exemplu, metilen colorant albastru, magenta Pfeiffer și colab.). Pentru metodele complexe utilizate mai multor coloranți și cercetare implică mai multe etape de prelucrare fizică și chimică a medicamentului (vezi metoda de colorare Gram, colorarea Ziehl - Nelsenu - vezi tuberculoza; ... colorat Romanovsky - Giemsa - vezi Blood et al ..). Metodele sofisticate de colorare microorganisme utilizate în diagnosticarea microbiologice pentru a studia structura și funcțiile microorganismelor. De exemplu, folosind colorația Gram Gram pozitivi microbi de diferentiere Gram, care are o importanță deosebită pentru identificarea gonococi, meningococi, bacteriile intestinale, etc. Ziehl - Nelsen .; pentru diagnosticul de tuberculoză și lepră, utilizând metoda difenului Neneser.
Ca un exemplu de colorare de Microorganisme pentru studierea structurii și funcției microorganismelor poate fi notat pe utilizarea de iod pentru amidon detectarea, albastru Victoria - pentru colorarea selectivă a peretelui celular și tsitoplazmatiicheskoy membranei de bacterii, acid osmic - .. Pentru colorarea grăsime etc. Aceste metode se bazează pe diferențele în structura chimică a structurilor morfologice individuale ale microbului, colorată selectiv cu coloranți diferiți.
Alte metode de colorare a structurilor individuale de microorganisme, bazate pe capacitatea acestor structuri de a capta diferite vopsele, care este detectată în prelucrarea ulterioară a alcoolului de droguri, acid, acetonă și colab. Și contrastant cu colorant de contrast. Astfel, pentru detectarea sporilor, ei utilizează proprietatea pentru fixarea fermă a colorantului și pentru a nu-i decolora în timpul tratamentului ulterior cu acid. Atunci când bacteriile Gram colorate vopsele de bază (. Violet de gențiană, etc.), urmată de tratarea cu iod în unele microorganisme (gram) colorant este ferm fixat și nu este îndepărtat prin tratare cu alcool sau acetonă; Gram-bacteriile negative sunt ușor decolorate. Pentru a identifica nucleoidul în bacterii, se folosește metoda Feilgen. De colorat în adevăratul sens al cuvântului pentru a fi impregnare distinsă cu săruri metalice, cum ar fi impregnarea cu săruri de argint în vopsirea spirochete Levaditi prin metoda (a se vedea. Syphilis).
Pe lângă metodele de colorare pozitivă (colorantul acționează direct asupra substratului care trebuie colorat), se folosesc metode negative în microbiologie - colorarea fundalului preparatului. Ele sunt folosite atunci când microbii sau structurile lor individuale sunt slab colorate. Un exemplu clasic de colorare negativă este metoda Burrie (vezi). În acele cazuri în care este necesară identificarea microorganismelor din microorganisme și microorganisme, se combină metodele negative și pozitive (vezi metoda Hins).
Există, de asemenea, mai multe moduri de a îmbunătăți eficacitatea culorilor. Unele dintre ele asigură condițiile pentru pătrunderea colorantului în obiect să fie vopsit (de exemplu, atunci când preparatele de spori colorate pretratate cu acid clorhidric). Alte metode asociate cu utilizarea de baițuri, duce la o creștere a obiectului [de exemplu, utilizarea sărurilor acidului tanic pentru flagele vopsirea în bacterii (vezi metoda Beninetti.) Celulele PASCHEN - metoda Morozova și peretele celular - metoda Neyzi].
A se vedea și tehnica bacteriologică, Studiu bacteriologic.