Aglutinarea reacțiilor
În aceste reacții sunt implicați antigeni sub formă de particule (celule microbiene, eritrocite și alte antigene corpusulare), care sunt lipite împreună cu anticorpi și precipitați.
Pentru a formula reacția de aglutinare (PA), sunt necesare trei componente: 1) antigen (aglutinogen); 2) anticorp (aglutinină) și 3) electrolit (soluție izotonică de clorură de sodiu).
Ar + AT + electrolit = aglutinat
1. Stabilirea unei reacții aproximative de aglutinare (RA) pe sticlă pentru identificarea bacteriilor din grupul intestinal.
Pe un slide de sticlă:
1-a picătură: - ser aglutinant la agenți cauzatori ai dizenteriei;
2-a picătură: - ser aglutinant la agenți patogeni ai febrei tifoide;
A treia picătură: - ser fiziologic (control).
Se adaugă la fiecare picătură cultura pură testată de bacterii. Mixt.
Notă. un rezultat pozitiv este prezența fulgi de aglutinat,
negativ - fără fulgi de aglutinat
Concluzie: Bacteriile investigate sunt agenții cauzali ai febrei tifoide.
2. Contabilizarea rezultatelor RNGA. setat în scopul detectării toxinei botulinice.
Agentul cauzal al botulism - Clostridium botulinum produce șapte toxine serotipuri (A, B, C, D, E, F, G), cu toate acestea, serovarurilor A apar mai frecvent decât altele, B, E. Toate toxinele diferă în proprietățile lor antigenice și pot fi diferențiate în reacțiile de antiseruri specifice acestui tip . În acest scop, este posibil să se pună pasiv hemaglutinarea reacție (indirect) cu serul pacientului, în care se presupune prezența toxinei și eritrocite încărcate anticorpi antitoxice protivobotulinicheskih seruri de tip A, B, E. Controlul este ser normal.
Fig. 3. Declarația și rezultatul RNGA.
Contabilitate. În cazul pozitiv RBCs sedimentat a sondei, pentru a forma un strat neted de celule cu o margine pliată sau zimțată (umbrelă inversat), negativ - sunt depuse sub forma unor butoane sau bucla.
Concluzie: Toxina botulinică de tip E se găsește în serul pacientului.
Reacția de precipitare este formarea și precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub formă de turbiditate, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenilor și a anticorpilor în cantități echivalente. Reacția de precipitare este pusă în tuburi de testare (reacția de precipitare a inelelor), în geluri, în medii nutritive etc.
3. Setarea și înregistrarea reacției de precipitare a inelului pentru determinarea speciei care aparține sângelui.
Punerea în scenă. Tubul îngust de 0,5 cm diametru №1 cu ser precipitant nediluat împotriva proteinelor din sânge uman într-o cantitate de 0,3-0,5 ml, ținându-l într-o poziție înclinată, o pipetă Pasteur pe perete se acumulează lent aceeași cantitate de antigen (extract de sânge la fața locului) . Tubul №2 turnat pretsipitatsionnuyu împotriva proteinelor serice berbec în tubul №3 - ser fiziologic (control) și, de asemenea, adăugat ca antigen primul tub. Tuburile cu atenție, astfel încât să nu se amestece lichidul, set vertical. Cu pretsipitinogena corespunzătoare stratificare pe ser marchează în mod clar granița dintre două straturi de lichid. Formularea reacției este însoțită în mod necesar ser de control și de antigen.
Contabilitate. Rezultatele reacției sunt luate în considerare în funcție de tipul de antigen și anticorpi în termen de 5-10 minute, de 1-2 ore, sau 20-24 ore. In caz de reacție pozitivă în eprubetă la interfața dintre serul și precipitatul extract de testat apare sub formă de inele albe.
4. Determinarea toxicogenității corynebacteriilor difteriei în reacția de precipitare în agar.
Acest lucru a fost mult timp folosit de reacția de precipitare, propusă pentru determinarea toxicității Corynebacterium diphteriae, plasate pe agar fosfat-peptonă într-un vas Petri. O bandă de hârtie sterilă de filtru umezită cu ser antitoxic este plasată de-a lungul acesteia în mijloc. După uscarea la o distanță de 1 cm de marginea benzii, plăcile cu diametrul de 10 mm sunt însămânțate cu culturi izolate. Într-o ceașcă, puteți să semene între 3 și 10 culturi, dintre care unul, controlul, trebuie să fie cunoscut ca fiind toxic. Culturile sunt plasate într-un termostat.
Reacțiile sunt luate în considerare după 24-48-72 ore. Dacă cultura este toxică, apare o linie de precipitat la o anumită distanță față de banda de hârtie, coincisând cu liniile precipitatului culturii de control. Ele au forma "antenei săgeți", care sunt vizibile în mod clar în lumina transmisă.
REACȚII IMUNOLOGICE DE DETECTARE A ANTIBODIILOR SPECIFICE
5. Stabilirea unei reacții de hemaglutinare indirectă (RNGA) care dezvăluie titrul anticorpilor specifici la pacient.
În reacția de hemaglutinare pasivă (RPHA), eritrocitele sunt utilizate ca purtător. Celulele roșii din sânge încărcate cu antigen sunt lipite în prezența anticorpilor specifici la acest antigen și se precipită. Eritrocitele sensibile la anticorpi sunt utilizate în RPHA ca un diagnostic pentru eritrocite pentru detectarea anticorpilor (serodiagnostic).
Punerea în scenă. Un număr de diluții consecutive de ser sunt preparate în plăci de polistiren. În gaura penultimă, adăugați 0,5 ml de ser pozitiv cunoscut și ultimele 0,5 ml de soluție salină (martori). Apoi, la toate godeurile se adaugă 0,1 ml de diagnostic eritrocitic diluat, se agită și se pun într-un termostat timp de 2 ore.
Contabilitate. În cazul pozitiv RBCs sedimentat a sondei, pentru a forma un strat neted de celule cu o margine pliată sau zimțată (umbrelă inversat), negativ - sunt depuse sub forma unor butoane sau bucla.
Fig. 6. Rezultatul RNGA. Titrul de anticorpi este de 1: 100.
6. Stabilirea unei reacții detaliate de aglutinare în scopul detectării titrului de anticorpi specifici la pacient.
RA extinsa pentru serodiagnosis plasate în ser de pacienți. Aceasta planta și soluția izotonică de clorură de sodiu 1:50 - 1: 100 la 1: 800 sau 1: 1600. Deoarece titruri mai mici pot fi aglutinele serice normale disponibile la indivizi sănătoși sau pacienți cu alt diagnostic (titru diagnostic). Deoarece antigenul utilizat în această reacție diagnosticums - evident cunoscute de obicei în forma lichida bacteriile omorâte, care este sigur să funcționeze.
Reacția este după cum urmează. În eprubetele de aglutinare, 1 ml soluție izotonică de clorură de sodiu este pre-turnată. În primul dintre ele se adaugă 1 ml de ser diluat 1: 100 și, amestecându-se, 1 ml este transferat în al doilea, de la al doilea la al treilea, etc. În diluțiile biologice ale serului (de la 1: 100 până la 1: 1600 și peste) se introduc 1-2 picături dintr-o suspensie de bacterii care conțin 3 miliarde de corpuri microbiene pe ml. Tuburile sunt agitate și plasate într-un termostat la 37 ° C timp de 2 ore, apoi ziua este menținută la temperatura camerei.
Reacția de aglutinare desfășurată este luată în considerare prin evaluarea succesivă a fiecărui tub, începând cu control, cu agitare blândă. În eprubetele de control, aglutinarea nu trebuie să fie. Intensitatea reacției de aglutinare este marcată de următoarele semne: ++++ - aglutinare completă (fulgi de aglutinat într-un lichid absolut limpede); +++ - aglutinare incompletă (fulgi în lichid slab evaporat); ++ - aglutinare parțială (fulgii se disting clar, lichidul este ușor turbid); + - aglutinare slabă, îndoielnică - lichidul este foarte turbid, fulgii din acesta nu se pot distinge; - - absența aglutinării (lichidul este uniform turbid).
Pentru titrul serului luați ultimul diluant al acestuia. în care intensitatea aglutinării este estimată la nu mai puțin de două plusuri (++)
