La cultivarea țesuturilor și a celulelor din plante, se acordă o atenție deosebită sterilizării instrumentelor și a mediilor nutritive. Sticlărie este expus la aer cald uscat sau vapori de apă saturate. În acest scop, mai multe opțiuni aplică sterilizare: vase este încălzit într-un cuptor cu aer cald la o temperatură de 180 ° C (expunere 30 min) sau 160 ° C (60 min expunere) sau este menținută la o temperatură de 105 ° C timp de 4-5 h plus, suplimentar. Sterilizarea vaselor se desfășoară și în timpul autoclavării mediului.
Sticlăria în care a fost detectată o infecție fungică sau bacteriană trebuie mai întâi spălată în apă caldă cu detergenți adăugați și apoi lăsată timp de câteva ore, turnându-se un amestec de crom (hrompik). Acesta din urmă are proprietăți oxidante puternic pronunțate. În locul amestecului de crom, pot fi utilizate hidroxid de sodiu sau soda cristalină. Apoi, vasele trebuie clătite de 6 ori în apă curentă, de 2 ori în apă distilată și plasate timp de 2 ore într-un dulap de uscare la o temperatură de 105 ° C.
Uneltele de metal care servesc pentru izolarea explantelor și manipulau ei (lame, scalpel, forceps) și pahare de sticlă, petri înainte de prelucrare cupe trebuie sa hârtie și supus autoclavare la o presiune de 2 atm și o temperatură de 121 ° C timp de cel puțin 60 min. După sterilizare, toate materialele trebuie uscate bine prin ejecție.
Există două modalități principale de a steriliza mediile nutritive - autoclavarea și filtrarea. În primul caz, soluția preparată se toarnă într-o pre-sterilizate într-un cuptor pentru vase de cultură și apoi sterilizate într-o autoclavă la o presiune de 0,75-0,9 atmosfere (temperatură 110-115 ° C) timp de 20-25 min. Mai întâi puteți steriliza o cantitate mare de mediu într-un volum prin autoclavare și apoi o turnați într-un vas steril de cultură într-o cutie laminară. Cu toate acestea, în opinia noastră, ultima opțiune este mai laborioasă. În plus, prin această metodă de inundare a mediului, probabilitatea de infecție crește. O astfel de succesiune de acțiuni este mai acceptabilă cu o cantitate mică de mediu.
În al doilea caz, un filtru steril Seitz Berkefelda, lumânări Shamberlana, filtre cu membrană, esențiale pentru prepararea unei componente fluide termolabilă (unele stimulente de creștere, vitamine, antibiotice, aminoacizi, extracte din plante), care sunt distruse atunci când klavirovanii auto. Filtrarea medie (sterilizarea la rece) este, de asemenea, utilizată pentru prepararea amestecurilor de enzime și izolarea protoplaștilor izolați, a mediilor cu componente biologic active, medii lichide.
Suplimentele nutritive care conțin aditivi organici, cum ar fi laptele de cocos, bulionul de cartofi etc., sunt dezinfectate prin filtrare folosind filtre speciale din pământ de diatomee, sticlă topită sau esteri de celuloză.
Totuși, sterilizarea completă poate fi realizată doar în procesul de tindalizare, care este efectuat de obicei în aparatul Koch. Esența tehnicii constă în încălzirea de 2-3 ori a vaselor cu vapori de apă la o temperatură de 90-100 ° C cu intervale de 24 de ore. Prima încălzire are ca rezultat distrugerea formelor vegetative, iar încălzirea ulterioară duce la moartea microorganismelor care s-au format la o temperatură de 25 ° C de la sclerotia la intervalele dintre căldură.
Tindalizarea este, de asemenea, utilizată pentru sterilizarea mediilor nutritive care conțin compuși care se descompun la temperaturi ridicate (de exemplu, gibberelinele sunt inactivate la temperaturi de peste 90 ° C). Același lucru este valabil și pentru zaharurile caramelizate la temperaturi ridicate.
Timpul dezinfecției termice depinde de volumul de vase în care este difuzat mediul nutritiv. Tuburile cu mediu sunt sterilizate timp de 15 minute la 115 ° C. Flacoanele conținând 100-500 ml de mediu nutritiv sunt dezinfectate timp de 30 minute la 121 ° C și 45 minute la 115 ° C. Flacoanele conținând 500 până la 5000 ml de mediu nutritiv sunt sterilizate într-o autoclavă timp de 35-40 minute la o temperatură de 121 ° C și 50 de minute la 115 ° C.
Volum de feluri de mâncare, ml
Timpul de sterilizare la 121 ° C (1 atm), min
După finalizarea sterilizării mediului în camera autoclavului, presiunea și temperatura trebuie reduse treptat. Capacul autoclavului trebuie deschis numai după ce acul manometrului este setat la "0". În caz contrar, cu o schimbare bruscă a presiunii, mediul se poate fierbe instant, se scurge din vasele în care s-a efectuat sterilizarea și se umezește capacul (acest lucru poate duce la o infecție suplimentară). În același timp, trebuie să vă asigurați că autoclava este depresurizată atunci când manometrul este setat la marcajul "0"; în caz contrar, capacul autoclavului poate fi aspirat prin formarea unui gradient de presiune. Dacă se întâmplă acest lucru, trebuie să activați scurt întrerupătorul autoclavului timp de 1,5-2 minute, după care capacul camerei de sterilizare poate fi deschis fără efort.
Vasele cu mediu nutritiv după sterilizare sunt plasate într-un dulap special pentru depozitarea mediilor nutritive disponibile și păstrate timp de 3-5 zile pentru a detecta o infecție fungică sau bacteriană.
Pot fi folosite diferite dopuri pentru a bloca vasele de cultură. Astăzi, vase comune din plastic de unică folosință, dar, în plus, este utilizat pe scară largă în cutii de zi cu zi standard de viață de 250 ml cu capace de tablă, baloane Erlenmeyer (250 ml), și așa mai departe. Alezajele cu un diametru de capace 0,5-0,8 mm și staniu introdus în acesta spumă de cauciuc spumă (pentru ventilație). În plus, ajută la eliminarea gradientului de presiune în timpul sterilizării mediului nutritiv. În cazul în care lucrarea utilizează dopuri din bumbac, acestea pot fi protejate în plus împotriva infectării cu capace de folie. Folia de aluminiu este foarte convenabilă și se folosește adesea; asigură o ventilare suficientă a vasului de cultură și, în același timp, împiedică uscarea rapidă a mediului nutritiv. dopuri din poliuretan folosite pentru a închide tuburile și flacoanele trebuie spălate mai întâi în apă fierbinte cu o cantitate mică de detergent, apoi clătite de mai multe ori în apă de la robinet, apoi - în apă distilată. Se usucă la o temperatură de 105 ° C timp de 2,5-3 ore. O procedură similară se aplică și în cazul capacelor de folie de aluminiu, verificându-se mai întâi integritatea lor
Creare de site-uri web design si dezvoltare Para-Diz.com.ua