Detectarea anticorpilor serici împotriva antigenilor din serul de sânge permite diagnosticarea bolii. Studiile serologice sunt de asemenea utilizate pentru a identifica antigeni microbi, diverse substanțe biologic active, grupe de sânge, antigene de țesut și tumori, complexe imune, receptori de celule și altele.
La selectarea unui microb de la o identificare plumb patogen pacient pro prin studierea proprietăților sale antigenice folosind seruri imune de diagnostic, t. Seruri animal E. conțin specific en imunizați Titel. Aceasta este așa-numita identificare serologică a microorganismelor.
In Microbiologie si Imunologie utilizate pe scară largă reacția de aglutinare Preetz-pitatsii, reacțiile de neutralizare care implică complement-em, folosind anticorpi și antigeni marcați (radioimmunologiches cue, imunoenzimatică, tehnici de imunofluorescență). Aceste reacții se disting prin efect detectabil și artă formulare, cu toate acestea, toate Ba-Vanir pentru reacția antigenului cu anticorpul și utilizat pentru a detecta ambii anticorpi și antigeni. Reacțiile de imunitate sunt caracterizate prin sensibilitate ridicată și specificitate.
interacțiunea anticorp Caracteristici cu reacții en-Tigeneh sunt baza laboratoarelor de diagnosticare. Reacția in vitro între antigen și anticorp constă într-o fază specifică și nespecifică. Faza spec-din punct de vedere este un cal rapid-spec de legare centru activ anticorp cu un antigen determinant. Apoi vine faza nespecific - mai lent, co-Thoraya manifestă fenomene vizibile fizice, cum ar fi formarea de floc (fenomenul de aglutinare) sau precipitatul sub forma unui nor. Această fază necesită anumite condiții (electroliți, pH optim al mediului).
Legarea determinantului antigenului (epitopului) de centrul activ al fragmentului Fab al anticorpilor se datorează forțelor van der Waals, legăturilor de hidrogen și interacțiunii hidrofobe. Rezistența și cantitatea de antigen legat de anticorpi depind de afinitate, aviditatea anticorpilor și valența lor.
Cu privire la problema diagnosticului expres:
1. Diagnosticul este supus culturii izolate în forma sa pură.
2. În laboratoarele special echipate (trebuie să existe o autorizație)
3. Respectarea regulilor stricte cum ar fi: o cameră izolată, costumele de protecție speciale necesare, tratamentul sanitar complet obligatoriu al spațiilor după lucrul cu agentul patogen, tratamentul sanitar al cercetătorilor după terminarea lucrului.
Metode de expertiza-diagnosticare.
1.Bacteriologie - medii nutritive politropice combinate pentru studierea rapidă a morfurilor, tinctului, biochimului. proprietăți. Utilizarea benzii indicatoare de enzime, a metodei electrofizice, a metodei discurilor de hârtie impregnate cu diverse tipuri de glucoză (glucazo, lactoză etc.)
2. Diagnostice.
3. Serodiagnosticul - metoda lui Mancini, precipitarea gelului în Ascoli, RA, RPGA.
4. Bacterioscopie - RIF directă și indirectă.
Metode de diagnosticare expresă pentru:
Cholera - m.Z.Ermolieva, reacția imobilizării cu ser de diagnosticare a holerei, RIF.
Tularemia - RA pe sticlă, RPHA
Chumet - fagotip, metoda discurilor de hârtie de carbohidrat, RPGA.
Sib.yazva - metoda Ascoli, RIF, RPGA.
Natura creșterii. cele trei părți difuze (anaerobe facultative), fundul (anaerobe obligatorii) și suprafețele (aerobe obligatorii).
Izolarea culturii pure de bacterii anaerobe
În practica de laborator, este adesea necesar să se lucreze cu microorganisme anaerobe. Ele sunt mai capricioase față de mediile nutritive decât aerobii, adesea au nevoie de aditivi de creștere specială, necesită oprirea accesului la oxigen în timpul cultivării, durata creșterii acestora fiind mai lungă. Prin urmare, lucrul cu ei este mai complex, necesită o atenție considerabilă a bacteriologilor și a asistenților de laborator.
Este important să se protejeze materialul care conține agenți patogeni anaerobi de efectele toxice ale oxigenului atmosferic. Deoarece se recomandă ca materialul din focarele de infecție purulente să fie luat în timpul perforării cu o seringă, timpul dintre preluarea materialului și însămânțarea acestuia pe mediul nutritiv ar trebui să fie cât mai scurt posibil.
În ceea ce privește cultivarea bacteriilor anaerobe folosesc medii speciale de cultură care nu conțin oxigen și au o reducere scăzută de oxidare potențial (-20 -150 mV) Indicatori de compoziția lor administrate - resazurin, albastru de metilen și alții asemenea, care reacționează la schimbarea acestui potențial. Când a reluat creșterea, sub formă de indicatori incolor schimba culoarea: Rezazurin vopsele miercuri, în roz și albastru de metilen - în albastru. Astfel de modificări demonstrează incapacitatea de a folosi media pentru cultivarea bacteriilor anaerobe.
Ea ajută la reducerea potențialului de reducere a oxidării de introducere în mediu a nu mai puțin de 0,05% agar, care, crescând vâscozitatea, ajută la reducerea aportului de oxigen. Acest lucru, la rândul său, este realizat și prin utilizarea de produse proaspete (nu mai târziu de două ore după producție) și a mediilor nutritive reduse.
Ar trebui să se țină seama de faptul că prin particularitățile tipului de metabolizare a bacteriilor anaerobe care necesită fermentație, ele necesită componente nutritive mai bogate și vitamine ale mediului. Cele mai frecvent utilizate sunt perfuziile cardiovasculare și hepatice, extractele de soia și drojdie, digerarea hidrolitică a cazeinei, peptonă, triptonă. Este obligatoriu să se adauge factori de creștere cum ar fi tween 80, hemin, menadion, sânge întreg sau hemolizat.
Izolarea unei culturi pure de microorganisme aerobe constă dintr-un număr de etape.
În prima zi (etapa 1 a studiului), un material patologic este luat în vase sterile (o eprubetă, un flacon, o sticlă). Este studiată pentru aspectul, consistența, culoarea, mirosul și alte semne, pregătește un frotiu, culoarea și se examinează sub microscop. În unele cazuri (gonoree acută, ciumă) în această etapă, puteți pune diagnosticul anterior și, în plus, ridicați mediul înconjurător, care va fi semănat material. A luat o bucla bacteriologica (folosita cel mai des), folosind o spatula pentru metoda Drigalsky, un tampon de bumbac-tifon. Paharele sunt închise, întoarse cu susul în jos, semnate cu un creion special și plasate într-un termostat la temperatura optimă (37 ° C) pentru 18-48. Scopul stadiului este de a obține colonii izolate de microorganisme.
Cu toate acestea, uneori, cu scopul de a înălța materialul, acesta este semănat pe suporturi nutritive lichide.
Coloniilor suspecte frotiurilor colorate Gram pentru a studia proprietățile morfologice și tinctoriale ale agenților patogeni preparate, bacteriile sunt explorarea în mișcare în „agățat“ sau picătură „zdrobit“. Aceste semne au o valoare extrem de mare de diagnosticare atunci când caracterizează anumite tipuri de microorganisme.
Rampele coloniilor studiate cu atenție, fără a le atinge pe celelalte, sunt îndepărtate de pe suprafața mediului și inoculate pe agar înclinat sau în sectoare ale unui vas Petri cu mediu nutritiv pentru a obține o cultură pură. Tuburile sau plăcile cu culturi sunt plasate într-un termostat la temperatura optimă timp de 18-24 ore.
Pe mediile nutritive lichide, bacteriile pot, de asemenea, să crească în moduri diferite, deși caracteristicile manifestărilor de creștere sunt mai sărace decât cele dense.
Bacteriile pot provoca opacifierea difuză a mediului, culoarea acestuia nu se poate schimba sau culoarea pigmentului devine. Acest tip de creștere este cel mai adesea observat în majoritatea microorganismelor facultativ anaerobe.
Uneori există un depozit în partea inferioară a tubului. Poate fi fărâmițat, omogen, vâscos, mucus etc. Mediul de deasupra acestuia poate rămâne transparent sau poate deveni turbid. Dacă microbii de pigment nu se formează, precipitatul are o culoare sirvato-bili sau gălbuie. O bacterie anaerobă crește așa.
Creșterea pristenochny se manifestă prin formarea fulgilor, granule atașate la pereții interiori ai tubului. Mediul rămâne transparent.
Bacteriile aerobe tind să crească suprafața. Adesea se formează o peliculă delicată, incoloră sau albastră, sub forma unui strat abia vizibil pe suprafață, care dispare atunci când mediul este zdruncinat sau agitat. Filmul poate fi umed, gros, are o tricotare, o consistență mucoasă și se lipeste de bucla, se întinde pentru el. Cu toate acestea, există și un film dens, uscat, fragil, a cărui culoare depinde de pigmentul produs de microorganisme.
Dacă este necesar, se face un frotiu, se pătrunde, se examinează sub microscop și microorganismele se introduc pe suprafața unui mediu nutritiv dens pentru a produce colonii izolate.
În a treia zi (etapa 3 a studiului), se studiază caracterul creșterii unei culturi pure de microorganisme și se realizează identificarea acesteia.
În primul rând, acordați atenție caracteristicilor creșterii microorganismelor în mediul înconjurător și faceți un frotiu, pictați-o pentru metoda lui Gram, pentru a testa cultura pentru puritate. Dacă bacteriile de același tip de morfologie, mărime și tinctorial (abilitatea de a fi vopsite) sunt observate sub microscop, ele concluzionează că cultura este pură. În unele cazuri, deja în spatele aspectului și particularităților dezvoltării lor, putem concluziona asupra tipului de agenți patogeni izolați. Determinarea speciilor de bacterii dincolo de trăsăturile lor morfologice se numește identificare morfologică. Definițiile tipului de agenți patogeni dincolo de caracteristicile lor culturale se numesc identificări culturale.
Cu toate acestea, aceste studii nu sunt suficiente pentru a face o concluzie finală cu privire la tipul de microbi izolați. Prin urmare, ele studiază proprietățile biochimice ale bacteriilor. Ele sunt destul de diverse.
Cel mai adesea testate saccarolitic, proteolitică, peptoliticheskie, proprietăți hemolitice, formarea decarboxylases enzime oxidaza, catalaza, plazmokoagulazy, ADN-ază, fibrinolizinei, reducerea nitraților la nitriți și altele asemenea. Pentru aceasta există un mediu nutritiv special care este inoculat cu microorganisme (hiss număr colorat, MPB, laminate din zer, lapte etc.).
Determinarea tipului de agent patogen după proprietățile sale biochimice se numește identificare biochimică.
METODE DE CULTURARE
ȘI EXTINDEREA CULTURII CLEANE A BACTERIILOR
Pentru cultivarea cu succes, în plus față de mediile bine selectate și în mod corespunzător însămânțate, sunt necesare condiții optime: temperatură, umiditate, aerare (alimentarea cu aer). Cultivarea anaerobelor este mai complicată decât aerobii, pentru eliminarea aerului din mediul nutritiv sunt utilizate diverse metode.
Selectați speciile bacteriene individuale (cultură pură) a materialului de testat care conține, de regulă, un amestec de diferite microorganisme este una dintre etapele oricărui examen bacteriologic. Se obține o cultură microbiană pură dintr-o colonie microbiană izolată.
La alocarea unei culturi pure de sânge (hemocultura) pre ei „au fost crescute“ într-un mediu lichid: 10-15 ml de sânge prelevat aseptic inoculat în 100-150 ml de mediu lichid. Raportul dintre sânge și mediul nutritiv 1:10 nu este accidental - astfel se obține diluția sângelui (sânge nediluat are un efect dăunător asupra microorganismelor).
Etape de izolare a unei culturi bacteriene pure
I etapă (material nativ)
Microscopie (o idee aproximativă a microflorei).
Semănarea pe suporturi nutritive dense (obținerea de colonii).
Etapa II (colonii izolate)
Studiul coloniilor (proprietăți culturale ale bacteriilor).
Examinarea microscopică a microbilor într-un frotiu colorat
(proprietăți morfologice ale bacteriilor).
Se însămânțează cu agar nutritiv pentru a izola cultura pură.
III (cultura pură)
Determinarea caracterului cultural, morfologic, biochimic
și alte proprietăți pentru identificarea culturilor bacteriene
IDENTIFICAREA BACTERIILOR
Identificarea culturilor bacteriene izolate se realizează prin studierea morfologiei bacteriilor, a caracteristicilor lor culturale, biochimice și a altor caracteristici inerente la fiecare specie.