ADN-ul intră în nucleu. Cu toate acestea, vectorii virali au un număr de dezavantaje, sunt scumpe și adesea au o capacitate de clonare limitată, care nu permite expresia genei terapeutice să fie reglată de secvențe specifice țesutului. În plus, proteinele virale pot provoca un răspuns inflamator. care elimină introducerea repetată a vectorului. Prin urmare, s-au dezvoltat sisteme non-virale de administrare a genelor. [C.499]
Un vector retroviral poate include numai aproximativ 10000 bp. Având în mâinile unui vector viral gata. poate infecta celulele țintă corespunzătoare. de exemplu, fibroblaste care exprimă receptorii de suprafață corespunzători. [C.585]
Vectorii virali nu sunt utilizați pe scară largă. O caracteristică caracteristică a virusurilor eucariote este structura compactă a genomului lor și absența aproape completă a genelor. neesențială pentru dezvoltarea lor. Prin aceasta, clonarea ADN-ului străin îi face să fie defectuoasă și necesită folosirea de virusuri helper. [C.379]
Evident, construcțiile virale au proprietăți unice în ceea ce privește modelarea unor variante ale terapiei genice. Cu toate acestea, vectorii virali clasici nu pot fi utilizați direct pentru promitarea sarcinilor terapiei genice (cu excepția, poate, a unor cazuri de terapie a bolilor limfoproliferative) datorită potențialului efect transformator al factorilor intrinseci trans-acționând. ceea ce duce la o încălcare a cerințelor de bază pentru siguranța tratamentului. Fără îndoială, o direcție promițătoare în acest domeniu este dezvoltarea de noi și testarea sistemelor vectoriale existente, factorii trans-acționari care pierd în mare măsură capacitatea de transformare (potențial oncogenic). Cu toate acestea, chiar și în acest caz, este dificil să se evalueze în mod adecvat efectul lor asupra organismului viu. [C.225]
Lipsa unui vaccin viu virus recombinant este că persoanele vaccinate cu statut imun redus (de exemplu, SIDA) au infecție virală T5gzhelaya se poate dezvolta. Pentru a rezolva această problemă, poate fi încorporată într-un vector viral genă care codifică interleukina-2 umană, care stimulează răspunsul celulelor T și limitează proliferarea virusului. [C.241]
RSLON cADN Cu o gena încorporată, aceasta poate fi infecțioasă și, ca o consecință, infectează planta gazdă. Dacă ADNc cu gena inserată nu este infecțioasă, vectorul viral poate fi transcris pentru a forma ARN, care este apoi folosit pentru a infecta planta. [C.514]
Descriu în Ch. 19 Metoda de donare a secvențelor străine în bacteriofagi sau plasmide poate fi, de asemenea, utilizată pentru a încorpora genele în virusurile eucariote. Prin introducerea fisurilor necesare cu enzime de restricție și apoi combinarea fragmentelor obținute, globinul, insulina și alte gene dintr-o varietate de surse au fost integrate în vectorii virali eucariotici. Unul dintre cele mai comune vectori de maimuță este virusul 8U-40, care se poate multiplica în celulele unui număr de mamifere. Genele noi pot fi construite în regiunea genelor timpurii sau târzii ale unității de transcriere a virusului. Expresia lor include etapa de formare a unui precursor al ARN, la capătul 5 al căruia există, de obicei, secvențe virale. urmată de o secvență a genei inserate. Astfel de ARN-uri sunt supuse unei îmbinări normale, așa cum se arată în Fig. 26.8. [C.325]
Folosind acest scop, cum ar fi vectori ASE-convenabil în sensul că este destul de ușor de instalat mai multe copii ale virusului (până la câteva sute per celulă). Acest lucru explică utilizarea cu succes a vectorului bazat pe ASP pentru exprimarea înaltă a eficienței multor proteine [1]. Dezavantajele vectorilor virale sunt asociate cu un set limitat de linii celulare. în care replicarea vectorilor este posibilă. iar nivelul de exprimare și menținere a stării epizomale a structurii în ansamblu depinde, printre altele, de secvențele ADN specifice clonate în vector. O metodă alternativă de creștere a numărului de copii descrise în acest capitol prevede selectarea celulelor pentru amplificarea secvențelor vectorului după integrarea sa în ADN-ul celulei gazdă, această abordare are restricții fundamentale privind utilizarea unui anumit tip de celule. În această abordare, pot fi selectate celule cu orice proprietăți dorite, de exemplu capacitatea de a modifica un produs proteic într-un anumit mod sau de a recunoaște o secvență de reglare ADN particulară. [C.239]
Infecția embrionilor preimplantați cu retrovirusuri recombinante este o procedură relativ simplă, care nu necesită echipamente costisitoare. Cu toate acestea, orice genă de interes trebuie mai întâi să fie reclasificată la un vector viral și acest construct recombinant introdus în celulele corespunzătoare pentru a obține o linie celulară. produc particule virale recombinante. Aici, însă, trebuie să rețineți că dimensiunea inserției. care este capabil să accepte un vector viral. este limitat (aproximativ 10 bp), în plus, ADN-ul de interes poate conține [c.309]
Vectori cu înlocuirea genelor târzii 8 40DNA. Primele încercări de construire a vectorilor virali s-au efectuat cu virusul SV40, în ADN-ul căruia nu există distanțieri extinși. În genomul viral, gene tardive sau timpurii au fost înlocuite cu ADN-ul străin. Structurile rezultate au fost vectori de substituție cu o capacitate de maximum 2,5 kb. și pentru a lucra cu ei a cerut un virus asistent. [C.398]
O altă abordare care dă speranță pentru o creștere a eficienței transferului de gene. este utilizarea ca vectori ai retrovirusurilor. Principalul avantaj al acestor vectori este acela că sunt capabili să infecteze eficient un număr mare de tipuri celulare diferite. Vedere generală a vectorului viral. utilizat pentru transgenoză, este prezentat în Fig. 66. Vectorii retrovirale asigură integrarea unei singure copii a transgenei în embrioni în diferite stadii de dezvoltare. Primele experimente. demonstrând punerea în aplicare și moștenirea la șoarecii administrat exogen virusului leucemiei Moloney de șoarece (MoMLTV), au avut loc înapoi la mijlocul anilor '70 ai secolului trecut cu personalul Jenisch [c.191]
Aceste experimente au determinat cercetătorii să se gândească la utilizarea anumitor segmente ale genomului viral ca vectori de amplificare a virusului. În primul rând, a fost studiată posibilitatea introducerii ADN străin în genomul defect. R Spet și N. Frenkel (1982) construite în regiunea Bgal a plasmidului pKS7 (derivat [c.388]
Pentru exprimarea genelor donate în celulele animale, două tipuri de vectori în baza uneia dintre ele constă genei SV40 au fost construite, iar cealaltă bovine gena patgillomavirusa (BPV). Principalele proprietăți ale acestor două sisteme de vectori virali sunt descrise în Sec. 5.7. vectori pe bază de papilomavirusuri sunt deosebit de utile pentru cantitățile sinteza bolschoy de proteine si vectori SV40 pe bază sunt utilizate în multe experimente. [C.360]