Reactivul lui Ehrlich.
Se dizolvă 1 g de para-dimetilaminobenzaldehidă în 95 cm3 de alcool etilic 96 ° și se adaugă 20 cm3 de acid clorhidric. Reactivul este stocat fără acces la lumină.
Kovacs reactiv.
Se dizolvă 5 g de para-dimetilaminobenzaldehidă în 75 cm3 de alcool amil când se încălzește într-o baie de apă la o temperatură de 50-55 ° C, se răcește și se adaugă 25 cm3 de acid clorhidric concentrat. Reactivul are o culoare galbenă, este păstrat la frigider la o temperatură de 4 ° C.
Pentru a determina indol la 1 -2 zile bulion de cultură au fost adăugate 1 - 1,5 cm3 de eter pentru extracția indol, agitat, și apoi introduce cu atenție peretele 7 - 10 picaturilor de reactiv cu o reacție pozitivă la bulionul de ester de interfață și apare colorația purpurie strălucitoare. Esența de reacție constă în faptul că indol (ortobenzopirrol) formate prin scindarea triptofanului reacționează cu soluția de acid alcool para-dimetilbenzaldehida și dă o culoare roz sau roșu.
Varianta 1. 5 g de para-dimetilaminobenzaldehidă, 10 cm3 de acid ortofosforic concentrat purificat, sunt dizolvate în 50 cm3 de alcool metilic. Într-o soluție călduță, se umezește o hârtie de filtru; uscate, tăiate în benzi înguste de dimensiune 0,5 x 6 cm. Culoarea hârtiei este galben deschis, cu indole variind de la albastru-roz până la intensiv purpuriu. Apariția altor culori pe hârtia de testare nu este luată în considerare.
Varianta 2. Hârtia de filtru este impregnată cu o soluție saturată de acid oxalic (10%), uscată, tăiată în benzi. Culoarea hârtiei este albă, cu o nuanță ușor gălbuie.
În prezența indolului, partea inferioară a indicatorului de hârtie devine roz (vedeți prin lumina transmisă); când indolul se formează abundent, se observă culoarea roz a întregii benzi.
Opțiunea 3: Hârtia de filtru este impregnată cu reactiv Kovac; când indolul apare roz și roșu.
Este posibil să recomandăm un mod rațional de a face lucrări "indole". Pentru acest filtru de hârtie este tăiat în foi cu o dimensiune de 5-6 x 25 15 cm de-a lungul fiecărei jumătăți de rolă și coborâtă perpendicular reactivul, turnat în cuva, umezită hârtie 3-4 cm. Hârtie uscată la temperatura camerei timp de 2-3 ore, atârnat pe linia de îmbrăcăminte. Apoi, porțiunea îndoită este tăiată cu foarfeca, iar două benzi rezultată este laminată, care este tăiat înainte de a utiliza numărul necesar de piese de testare de hârtie și fixat sub tubcurat se încheie cu însămânțarea plantelor de test.
Hârtie indicatoare pentru determinarea hidrogenului sulfurat.
În 100 cm3 de apă distilată se dizolvă 20 g de acetat de plumb și 1 g de bicarbonat de sodiu și se impregnează cu benzi de hârtie de filtru. După gătire, hârtia rămâne albă; în prezența hidrogenului sulfurat, partea inferioară a indicatorului de hârtie are o culoare maro-negru, uneori cu un luciu metalic. În prezent, hârtiile cu "hidrogen sulfurat" sunt fabricate de industrie.
Abilitatea microorganismelor de a descompune proteinele din mediul înconjurător la indol și hidrogen sulfurat poate fi stabilită în bulion de peptonă din carne, peptonă, dar mai bine în bulionul Hottinga.
Se dizolvă 0,4 g de bromotimol albastru în 40 cm3 de apă distilată, încălzind la fierbere, apoi se adaugă 6,4 cm3 de 0,1 N. soluție de hidroxid de sodiu, ca urmare, lichidul devine o culoare verzui și se ajustează la 100 cm3 cu apă distilată.
Indicatorul poate fi păstrat mult timp într-un borcan de sticlă întunecată, închis cu un dop de sticlă.
Bromotimol albastru permite determinarea variației de reacție în intervalul de pH de 6,0-7,6. La pH 7,6, indicatorul este albastru, la 6,0 - galben. În intervalul de pH cuprins între 6,0 și 7,6, culoarea se schimbă prin diferite nuanțe de verde; într-un mediu neutru (pH 7,0), indicatorul are o nuanță caracteristică erbacee.
Indicator de acid rosolic.
Se dizolvă 1 g de acid rosolic în 500 cm3 de alcool etilic. Dacă soluția este galbenă, se adaugă câteva picături de 0,1 N. soluție de hidroxid de sodiu până când apare o nuanță roșiatică-portocalie.
Într-un mediu acid, indicatorul are o culoare galbenă de lamaie, în mediu alcalin este roșu roz; zonă de tranziție pH 6,8-7,0.
Indicatorul Andrede.
Se dizolvă 0,5 g de fucsină acidă în 100 cm3 de apă distilată și se adaugă 15-18 cm3 de acid clorhidric 1 N. soluție de hidroxid de sodiu, se amestecă și se lasă la temperatura camerei timp de 24 de ore, tremurând uneori - culoarea indicatorului se schimbă de la roșu la maro, în absența schimbării culorii, se adaugă până la 1 cm3 de alcaline și se lasă timp de 24 ore.
În practica de laborator este adesea pregătit un indicator pentru o altă prescripție: 0,5 t de magenta se dizolvă în 16,4 cc. soluție de hidroxid de sodiu (soluție 4%). se adaugă 100 cm3 de apă distilată, se așează într-un termostat la 37 ° C timp de 24 de ore și apoi timp de 48 de ore la temperatura camerei în lumină.
Indicatorul gata are o culoare galbenă, cu o nuanță brună, care amintește de culoarea ceaiului. Mediul acid obține o vopsea luminată de culoare roșie.
Indicatorul astfel preparat este stocat în flacoane din sticlă întunecată cu dop de sticlă măcinată în condiții normale.
Indicator pentru detectarea enzimei oxidază (citocrom oxidază) în microorganismele aerobe.
Potrivit lui Ehrlich.
Se dizolvă 30-40 mg de alfa-naftol în 2,5 cm3 de alcool etilic rectificat, se adaugă 5 cm3 de apă distilată și se dizolvă 40-60 mg de para-dimetileni diamină.
Pentru a determina oxidaza pe suprafața unei culturi de agar de 18-20 ore, se aplică 1-2 picături de indicator, cu o reacție pozitivă după 1-3 minute, apare o culoare albastră strălucitoare ca urmare a formării de albastru de indofenol.
Pentru a determina această enzimă, culturile pot utiliza NIB (standarde pentru hârtia indicatoare) produse de Institutul Gorky de Epidemiologie și Microbiologie (în conformitate cu instrucțiunile).
Potrivit lui Kovacs.
Se dizolvă 1 g de para-tetrametilfenilendiamină în 100 cm3 de apă distilată.
Pentru determinarea enzimei, câteva picături de reactiv sunt aplicate pe suprafața culturii de agar zilnic, cu o reacție pozitivă după 20-30 de secunde, cultura devine roșu închis, cauzată de formarea albastru Wurster.
Reactivi de testare pentru detectarea activității de reducere a bacteriilor.
Soluția A: cu încălzire ușoară, se dizolvă 0,8 g de sulfonil acid în 100 cm3 de acid acetic (soluție 5N).
Soluția B: Se dizolvă 0,5 g de a-naftilamină și 0,6 g dimetil a-naftilamină prin încălzire în 100 cm3 de acid acetic (soluție 5N).
Reactivii sunt toxici. Acestea sunt depozitate în bănci din sticlă întunecată cu dopuri de sticlă măcinată în frigider la o temperatură de +4 ° C timp de 2 până la 3 luni (cu monitorizare periodică).
Pentru a determina activitatea de reducere într-un mediu nutritiv care conține azotat de potasiu, se introduce o bucla din cultura de agar zilnic și se păstrează într-un termostat la o temperatură de 37 ° C timp de 4 zile.
Capacitatea de a reduce nitrații la nitriți se determină prin adăugarea, după 8-10 ore, a unei culturi de 1 cm3 de soluții A și B; pentru reacție pozitivă după câteva minute conținutul tubului devine roșie, cu un negativ - mediu de colorare nu este schimbat, în acest caz, observația a fost efectuat timp de 4 zile, în scopul de a detecta activitatea de reducere lentă Pentru a confirma rezultate negative în cultura tuburilor face o mică cantitate de pulbere de zinc - sub influența ionilor de zinc, nitrații se reduc la nitriți și apare o culoare roșie.
Se dizolvă 0,1 g de roșu de metil în 300 cm3 de alcool etilic 96 °, apoi se adaugă 200 cm3 de apă distilată.
Formularea reacției: la 2 cm3 cultură de testare cultivate la mediu Clark la +37 sau +22 ° C timp de 2-5 zile, se adaugă 5-6 picături de indicator; pentru mediu de reacție pozitivă devine un roșu aprins, deoarece fermentarea glucozei însoțită de formarea unui amestec de acizi (lactic, acetic, formic, etc.) până la pH schimburi la partea acidă la 4,0-5,0. Dacă reacția este negativă, mediul este galben. Indicatorul este conceput pentru a reacționa la fermentarea glucozei.
Indicator pentru reacția Foges-Proskauer.
Reactivul de test este format din 2 componente separate: soluție alcoolică 6% de alfa-naftol (30 g alfa-naftol dizolvat în 500 cm3 de 96 ° tărie alcool etilic) și 40% soluție de hidroxid de potasiu (120 g KOH dizolvat în 300 cm3 de apă distilată).
Formularea reacției: 2.5-2.5 cultură cm3 zi crescute în mediu Clark adăugat în secvența 1 cm3 de soluție de alfa-naftol, apoi 0,4 cm3 de KOH 40%; cu o reacție pozitivă în partea superioară a mediului, apare o culoare roșie. REZUMAT reacție constă în aceea că un acetoină produs intermediar (atsetilmetilkarbinol), care, în prezența alcaliilor și alfa-naftol (catalizator) este oxidat la diacetilul autorizarea mediului de transfer cu peptonă și culoare KOH reacție cu clivaj la glucoză.
- Sunteți aici:
- principal
- Vet.San.Eksp.
- reactivii
