Bordetella - f

Bordetella - FK Cherkes

Capitolul 31. Agenți patogeni ai pertussis și paracottus

Agenții cauzali ai acestor boli aparțin genului Bordetella.

1. Bordetella pertussis - agent cauzator de pertussis, descris de Borde și Zhangu în 1906.

2. Bordetella parapertussis - agent cauzator al paracutozei, descris de Eldering și Kondrick în 1937.

3. Bordetella bronchiseptica - provoacă boala la animale. La om, aceste bacterii cauzează bronhopneumonia cu o tuse asemănătoare pertussisului. Pentru prima dată la om, această boală a fost descrisă de Brown în 1926 (rareori găsită).

Morfologie. Bacterii pertussis - bete mici ovoid forma, 0,3-0,5 × 1-1,5 microni. Agentul cauzal al para-pertussis este ceva mai mare. Ambii microbi nu au un spori, sunt încă. Cu o colorare specială, este vizibilă o capsulă. Gram-negativ. Mai intens pictat pe stalpi.

Pe ultra-tăieturi se observă o cochilină asemănătoare capsulei, moneda este o monedă, în nucleoid este un vacuol.

Cultivare. Agenți patogeni pertussis și parakoklyusha - aerobi. Capricios pentru mediul nutritiv. Pentru cultivarea lor, se utilizează mediul Borde-Gangu (agar de cartof glicerină și sânge). În prezent, se utilizează mediu AMC (agar de cazeină-cărbune) - este un mediu semisintetic fără sânge. Sursa aminoacizilor de aici este cazeina hidrolizată. Mediul AMC diferă de mediul Borde-Ganges printr-o metodă de fabricare mai simplă și mai accesibilă.

Pentru a suprima creșterea florei străine în mediu, adăugați penicilină 0,25-0,5 ME pe 1 ml de mediu sau meticilină - 2,5-4 μg / ml. Penicilina poate fi aplicată pe suprafața mediului în cupe.

Mediul însămânțat este incubat într-un termostat la o temperatură de 35-36 ° C, iar pH-ul mediului este de 6,8-7,4. Culturile trebuie să fie protejate de uscare, în acest scop se introduce un vas cu apă în termostat.

Coloniile de B. pertussis apar în 48-72 ore, iar B. parapertussis - în 24-48 ore.

Pe mediu de AMC, coloniile de B. pertussis sunt mici cu 1-2 mm în diametru, V. parapertussis oarecum mai mari. Coloniile ambelor microbi sunt de culoare strălucitoare, gri-crem (pe agar de cazeină-cărbune seamănă cu picături de mercur). Când se elimină coloniile, rămâne o urmă vâscoasă, cremoasă. Când studiați coloniile într-un microscop stereoscopic, este vizibil un con de lumină (coloniile aruncă o umbră). Când poziția sursei de lumină (bec) se schimbă, umbra se schimbă în funcție de poziție. Prezența unui con de lumină (coada) are o semnificație diagnostică.

B. parapertussis formează enzima tirozinază, prin urmare, în mediu care conține tirozină, are loc scindarea acesteia și mediul este colorat maro. Modificarea culorii mediului este o caracteristică de diagnosticare diferențiată.

Într-un mediu lichid, pertussis și bacterii paracolitice formează o turbiditate uniformă și un sediment de fund. Pe agar cu sânge dau zona de hemoliză.

Culturile proaspăt izolate au cel mai adesea o formă S netedă (faza I). Când se cultivă în condiții nefavorabile sau într-un material luat într-o perioadă târzie a bolii, pot apărea forme disociate (fazele II-IV).

Proprietăți enzimatice. Agenții patogeni nu descompun carbohidrații și nu fermentează proteinele. Bacteriile paracolitice formează enzime urează și tirozinază.

Bacteriile pertussis și parakoklyusha produc enzime patogene: hialuronidază, plasmacoagulază și lecitinază.

Formarea toxinelor. În experimentele pe animale în pertussis au fost identificate patru tipuri de toxine de natură proteică: 1) toxină dermonerotică termolabilă; 2) endotoxină termostabilă; 3) factor de leucocitozorizare (leucocitoză stimulantă); administrarea parenterală a acesteia a determinat moartea animalelor experimentale; 4) factor de sensibilizare a histaminei - atunci când este administrat la șoareci, au avut o sensibilitate la histamină.

Primele două tipuri de toxine sunt, de asemenea, caracteristice patogenului paracocefalic.

Structura antigenică. Bacteria din genul Bordetella structura complexă antirenna. Cele mai importante antigene pentru diagnosticul de laborator sunt aglutinogene. 7. aglutinogenilor generice este aglutinogenilor specii specifice de Bordetella pertussis este 1 la Bordetella parakoklyusha - 14 la Bordetella bronhoseptika - 12.

Serurile monospecifice 1, 14, 12 sunt utilizate pentru diferențierea speciilor (serurile sunt produse de NF Gamaleia Institute of Epidemiology and Microbiology).

Pe lângă antigenii specifici pentru specii, reprezentanții Bordetella au și alți aglutinogeni, o combinație diferită de care determină serovarul (Tabelul 48).

Tabelul 48. Diagrama compoziției genului bordetal aglutinogen

Prin combinarea celor trei aglutinogene principale 1,2,3, determinate în reacția de aglutinare cu seruri monospecifice, B. pertussis distinge trei serovari: 1,2,3; 1,2,0; 1,0,3.

Rezistența la factorii de mediu. Patogeni pertussis și parakoklyusha puțin rezistent. La o temperatură de 56 ° C, ele dispar în 20-30 de minute. Temperaturile scăzute sunt, de asemenea, dăunătoare acestora. Lumina directă a soarelui îi ucide în 1-2 ore; Razele UV - câteva minute. În sputa uscată, aceste bacterii persistă câteva ore. Soluțiile convenționale de dezinfectanți le distrug rapid.

Ambele tipuri de microbi nu sunt foarte sensibili la antibiotice, nu sunt sensibili la penicilină.

Susceptibilitatea animalelor. În condiții naturale, animalele nu sunt susceptibile la patogeni din acest gen. În condiții experimentale, este posibil să se reproducă pertussis la maimuțe și câini tineri, cauzând moartea șoarecilor.

Surse de infecție. Persoană bolnavă. Mai ales infecțioase în perioada catarală.

Căi de transmisie. Picătură de aer. Rolul unor obiecte diferite este puțin probabil din cauza instabilității bacteriilor pertussis în mediul extern.

Patogeneza. Agenții cauzali ai pertussis și paracottus provoacă o boală acută însoțită de o tuse convulsivă. Odată ce se află pe membrana mucoasă a tractului respirator superior, bacteriile se înmulțesc acolo și se descompun parțial. Toxina eliberată acționează asupra sistemului nervos central, irită receptorii nervului membranei mucoase a tractului respirator superior, care activează reflexul tusei. Ca urmare, există convulsii de tuse convulsivă. În cursul bolii, se observă mai multe perioade: tuse catarrala, spasmodică și rezolvarea procesului.

Imunitatea. După boala transferată, se produce imunitate stabilă, care este determinată de factori umorali și celulari.

Prevenirea. Identificarea și izolarea pacienților. Copiii slabi, care au fost în contact cu o pertussis bolnav, sunt administrați imunoglobulină. Principalele măsuri de prevenire specifică sunt imunizarea copiilor DTP (vaccinul pertussis-difteric-tetanic). Vaccinul este administrat de trei ori la vârsta de 6 luni, urmat de o revaccinare.

Tratamentul. În stadiile incipiente ale bolii, se utilizează imunoglobulină anticonvulsivantă. Pentru tratament se utilizează eritromicină și ampicilină.

Întrebări de test

1. Descrieți proprietățile morfologice ale pertussis pertussis și paracottus.

2. Ce media și ce tip de creștere a microbilor de pertussis și paraclobulent?

3. Stabilitatea agenților cauzali ai pertussis și paracottus în mediul extern.

4. Semne diferențiate de agenți cauzatori ai pertussis și paracottus.

5. Surse de infecție, căi de transmisie, patogeneza tusei convulsive.

Examinarea microbiologică

Scopul studiului: identificarea agentului patogen și diferențierea agenților cauzali ai pertussis de paraculare.

Material pentru cercetare

Membrana mucoasă detașabilă a nazofaringei.

Prima zi a studiului

A doua - a treia zi a studiului

Culturile sunt scoase din termostat și sunt vizualizate cu ajutorul unui lupă sau a unui microscop binocular stereoscopic. În prezența unor colonii suspecte, ele sunt izolate pe AMC: în vase Petri, împărțite în sectoare sau în eprubete. Culturile sunt plasate într-un termostat. Dacă există o mulțime de colonii, ele pot fi făcute dintr-o parte din frotiuri, vopsite și aruncate sub microscop. Dacă există mici tije Gram-negative pune proces de aglutinare cu monospecifici generic 7. seroaglutinare pozitiv indică accesorii dedicate culturii de Bordetella genului. Pentru a determina speciile de bordetell, reacția de aglutinare este stabilită cu speciile 1 și 14 ale speciilor monospecifice. Reacțiile sunt plasate pe un diapozitiv. Rezultatul pozitiv al reacției de aglutinare ne permite să oferim un răspuns preliminar.

A patra zi a studiului

Culturile sunt îndepărtate de la termostat și sunt vizualizate: mai întâi cu ochiul liber, cu atenție la culoarea mediului (nu există pete maro), apoi se studiază creșterea folosind un microscop stereoscopic.

În prezența unor colonii suspecte din cultura selectată, faceți frotiuri, pete Gram și studiați sub microscop. Apoi, din nou (din culturi pure) da reacție de aglutinare pe sticlă cu aglutinare monospecific antiseruri 1,2,3 și 14. Rezultatele permit să se diferențieze B. pertussis de B. parapertussis și dacă - B. pertussis, apoi determina serotip: 1- (1,2,3), al doilea serovar (1,2,0), al treilea serovar (1,0,3). Definiția serovarului are o semnificație epidemiologică.

Pentru identificarea finală a culturii selectate (aglutinare pozitiv cu seruri monospecifice) dau o probă pentru prezența ureazei și inoculați pe agar conținând 0,1 înclinate% tirozină (vezi. Fig. 49).

Testul pentru urează. Într-un tub mic, se toarnă 0,3-0,4 ml dintr-o soluție de uree 2%, se adaugă o buclă de cultură și se adaugă 2-3 picături de fenolftaleină. Tubul este agitat și plasat într-un termostat. Luați în considerare reacția după 2 și 24 de ore. Bacteria pertussis nu modifică culoarea mediului. Bacteriile paracolitic au o enzimă de urează care descompune ureea pentru a forma amoniac. Amoniacul schimbă indicatorul și mediul devine roșu.

Eșantionați cu tirozină. Pe MPA înclinat în tuburi de test cu 0,1% tirozină, cultura izolată este inoculată și plasată într-un termostat. A doua zi, scoateți tubul din termostat și priviți-l prin acesta. Prezența creșterii într-un tub de testare și colorarea mediului în maro indică creșterea agenților patogeni ai paracobiaceei. Patogeni pertussis pe acest mediu nu cresc.

În a cincea zi a studiului

În lipsa unor colonii suspecte, este dat un răspuns negativ.

Prin metoda bacteriologică de cercetare, răspunsul poate fi obținut în 3-4 zile.

1. Utilizarea metodei imuno-fluorescent permite să răspundă la câteva ore după capturarea materialului prin detectarea directă a bacteriilor în frotiurile prelevate cu tampoane.

2. Din culturile asupra mediului de AMC în absența creșterii vizibile poate fi frotiu imprint: pentru acest dop de cauciuc steril atinge locul de însămânțare și transporta un marcaj pe diapozitiv de sticlă. Amprenta este studiată prin imunofluorescență. În frotiuri, bacteriile B. pertussis sau B. parapertussis sunt detectate.

1. Care este materialul pentru cercetare dacă bănuiți că aveți pertussis?

2. Ce metode de colectare a materialelor sunt utilizate pentru a identifica agentul patogen în cazurile de suspiciune de pertussis?

3. Ce se adaugă la mediu pentru a suprima creșterea microflorei străine?

1. Luați 10 cești cu mediu AMC, o sticlă cu penicilină care conține 300.000 de unități. Se diluează penicilina astfel încât 7,5 ml să fie conținută în 0,1 ml. Calculați numărul total de medii.

2. Colectați nasofaringele separate unul de celălalt și sămânța pe mediul AMC.

3. Luați de la profesor o ceașcă cu cultura de pertussis sau bacterii paracolitice, studiați caracterul coloniilor folosind un microscop stereoscopic. Coloniile suspecte seamănă cu sectorul AMC (alocarea culturii pure).

4. Ia un profesor pertussis cultură pură sau parakoklyusha cultivate pe sectorul de mediu AMC, și a pus seroaglutinare pertussis de diagnostic.

Dacă există o reacție de aglutinare pozitivă, plasați proba pe urează și semințe pe un mediu cu tirozină (0,1%).

AMC. Miercuri este pregătit de Institutul de Epidemiologie și Microbiologie. N. F. Gamaleya. Mediul AMC finit este negru, apa de condens nu trebuie să conțină particule de cărbune. În forma finită, mediul poate fi stocat pentru o perioadă lungă de timp (până la o lună sau mai mult), protejându-l de uscare.