SA "Universitatea de Medicină din Astana"
Departamentul: Microbiologie, virologie. Sh. I. Sarbasova
Subiect: Infectologia ca știință și locul în ea a microbiologiei. Metode microscopice.
Infectologist - știință care studiază procesul infecțios, o boală infecțioasă, patologia infecțioasă care rezultă din interacțiunea concurențială a corpului uman cu organisme patogene sau oportuniste și dezvoltă diagnosticul, tratamentul și prevenirea bolilor infecțioase.
proces infecțios - un set de reacții de adaptare reciprocă la introducerea și proliferarea agentului patogen în macro-organism care vizează restabilirea homeostaziei perturbat și echilibrului biologic cu mediul.
Definirea modernă a procesului infecțios implică interacțiunea a trei factori principali - agentul cauzator. macroorganismului și mediului. fiecare dintre acestea putând avea un impact semnificativ asupra rezultatelor sale.
Microorganismele patogene provoacă boli infecțioase la persoanele sănătoase. Microbii patogeni pătrund în mod activ în organisme sensibile, deoarece paraziți sunt o parte importantă a ciclului lor de viață.
Microorganisme condiționate patogene. ca o regulă, lipsită de proprietăți patogene și nu provoacă boli infecțioase la o persoană sănătoasă. Microbii patogeni condiționați provoacă leziuni după transferul pasiv în mediul intern al organismului. Condiții importante pentru dezvoltarea lor sunt infecțiile masive și afectarea rezistenței organismului.
microbi oportuniști și non-patogene (sau, mai degrabă, care nu pot induce leziuni la o persoană sănătoasă) poate, în anumite circumstanțe provoca oportuniste (de la angl.opportunity. Oportunitatea, oportunitate) infecție. Subdiviziune microorganismelor asupra speciilor patogene și oportuniste, cu limite neclare.
Unii microbi (de exemplu, patogenii condiționali) sunt capabili să se reproducă în organismul uman fără a-i face rău. Acest fenomen poate fi considerat o adaptare reciprocă a micro- și macroorganismului. Această formă de parazitism se numește transport.
Metode de bază pentru detectarea microorganismelor
1. Metodele microscopice includ prepararea de frotiuri și preparate pentru microscopie. În majoritatea cazurilor, rezultatele studiilor microscopice sunt indicative. Deoarece multe microorganisme nu au caracteristici morfologice și tinctoriale.
2. Metode microbiologice pot stabili cu acuratețe prezența agentului patogen în materialul: cuprinde cultivarea unei culturi pure izolarea și identificarea microorganismelor cu morfologice, tinctoriale, culturale, biochimice, toxigenic și proprietăți antigenice.
3. Metodele biologice au ca scop determinarea prezenței toxinelor patogene în materialul de testare și detectarea agentului patogen, incluzând infecția animalelor de laborator și investigarea ulterioară a acestora.
4. Metodele serologice pentru detectarea anticorpilor specifici și a antigenilor patogeni sunt un instrument important în diagnosticarea bolilor infecțioase.
5. Metode alergologice. Antigenii multor agenți patogeni au un efect sensibilizant care este utilizat pentru a diagnostica bolile infecțioase (teste cutanate și alergice).
Metode microscopice pentru studierea morfologiei bacteriilor și ciupercilor
PREPARAREA PREPARATELOR
PENTRU STUDIUL MICROSCOPIC
Pentru prepararea preparatului, materialul de testare este prelevat dintr-un tub de testare, un balon sau un vas Petri cu o bucla bacteriologică sau o pipetă sterilă. În unele cazuri, în acest scop sunt utilizate ace de disecție.
Prepararea unui preparat pentru studiul microorganismelor în formă nativă.
Metoda de "suspendare". Preparatul se prepară pe o alunecare de acoperire, în centrul căreia se aplică o picătură de cultură bacteriană. Apoi, o alunecare cu o gaură, a cărei margine este pre-lubrifiată cu vaselină, este presată pe geamul de acoperire astfel încât picătura să se afle în centrul puțului. Transformați rapid medicamentul cu o alunecare de acoperire. Într-un preparat pregătit în mod corespunzător, pictura trebuie să se prindă liber peste orificiu, fără a atinge fundul sau marginea.
Pentru microscopie, folosiți mai întâi un mic 8X lentilă uscată, sub care crește marginea picăturii, apoi instalați un obiectiv de 40X și examinați medicamentul.
Metoda de picătură "zdrobită". O picătură de material de testare sau o suspensie de bacterii este aplicată pe suprafața diapozitivului degresat și acoperită cu o alunecare a capacului. Căderea trebuie să fie mică, fără a părăsi marginea geamului. Microscopie preparat cu un obiectiv de 40X.
După microscopie, preparatele de picătură "zdrobită" sau "agățat" sunt coborâte într-o soluție dezinfectantă.
Prepararea preparatelor fixe de frotiu.
Pentru a prepara medicamentul pe sticla diapozitiv aplicat glet o picătură de apă sau soluție izotonică de clorură de sodiu, în care un material de testare buclă face și distribui în așa fel încât să se obțină un frotiu subțire și uniform. Cu această distribuție a materialului în frotiu, este posibil să se vadă celule bacteriene izolate în timpul microscopiei. Dacă materialul de testare este conținut într-o formă lichidă, atunci acesta este aplicat direct printr-o buclă pe diapozitiv și este pregătit un frotiu. Smeile sunt uscate în aer sau într-un curent de aer cald deasupra flăcării arzătorului, fără a lăsa picura să fiarbă.
Pentru a fixa frotiul, glisați ușor glisorul (frotiu în sus) de 3 ori prin flacăra arzătorului. Microorganismele se permează, atașându-se dens pe suprafața sticlei și nu se spală în timpul procesării ulterioare. Încălzirea mai lungă poate determina deformarea structurilor celulare. Frotiuri de sânge, tampoane-tipărite ale organelor și țesuturilor și în unele cazuri frotiuri din culturi de microorganisme sunt fixate prin imersie timp de 15-20 de minute. în alcool metilic sau etilic, un amestec de Nikiforov, alcool sulomic și alte lichide de fixare.
Fig.1. Fixarea frotiului-frotiu cu flacără.
METODE DE FABRICAȚIE
O metodă simplă. Fixați o frotiu cu orice colorant, de exemplu apă fucsină (1-2 minute) sau albastru de metilen (3-5 minute), clătiți cu apă, uscați și microscopie.
Metode complexe. Secvențial aplicate la droguri anumitor coloranți care diferă în compoziția chimică și culoare, mordant, alcooli, acizi, și altele. Aceasta permite structurii să identifice anumite tipuri de celule și să se diferențieze una din celelalte microorganisme. Metoda Gram este o metodă complexă.
Fig.2. Metoda de culoare Gram (schemă).
- Pe un frotiu fix, aplicați o soluție carbolică-alcool violet de gențiană printr-o bandă de hârtie de filtru. După 1-2 minute, scoateți-l și vopsiți colorantul.
- Aplicați soluția Lugol timp de 1-2 minute.
- Desaturați cu alcool etilic timp de 30-60 de secunde până la dispariția fluxurilor de coloranți violeți.
- Clătiți cu apă.
- Colorați cu o soluție apoasă de magenta timp de 1-2 minute, clătiți cu apă, uscați și microscopiați.