- prima fază este creșterea rapidă a celulelor de calus, care protejează leziunea;
- a doua fază este depozitarea nutrienților în celulele de calus;
- a treia, cea mai importantă fază - regenerarea din țesutul de calus a organelor pierdute (rădăcini, lăstari).
Acum, țesutul de calus invitro poate fi obținut din aproape orice țesut viu al plantei. Factorii obișnuiți care determină eficacitatea dediferențierii țesutului explant și dezvoltarea calusului primar sunt:
- Genotipul plantei originale. În acest caz, soiurile, liniile din specie pot varia semnificativ.
- Caracteristicile epigenetice ale explantului, inclusiv omogenitatea sau eterogenitatea țesutului datorită grupurilor de celule diferite.
- Condițiile de mediu, dintre care cele mai importante regulatori de creștere exogeni (fitohormoni preferabil), și substanțe care acționează ca substanțe anti-blocare explante selecție callusogenesis (carbon activat, antioxidanți).
Trebuie remarcat faptul că apariția tumorilor cauzate de agrobacterium Agrobacterium tumefaciens este, de asemenea, asociată cu afectarea țesutului vegetal. Din punct de vedere morfologic, celulele tesutului tumoral sunt de asemenea aproape de celulele calusului. Cu toate acestea, metabolismul celulelor tumorale diferă semnificativ de la calus ca în genomul său introdus gene plasmid bacterii TI-, în special gene care reglementeaza sinteza cytokinins si auxinelor (gene) în lei. Fitohormonii formați sub controlul lor "forțează" celulele să se divizeze în mod constant și să "metastasizeze" tumorile primare. De lucru alte gene inserate conduce Ti plasmidic la faptul că celulele tumorale începe să sintetizeze substanțe străine de ea - opines că celula în sine nu poate fi dispusă, ci servesc ca hrană pentru bacterii. Astfel, reproducerea continuă sub influența sintezei forțate opină sintetice și fitohormoni face celulele tumorale de la calus disparat.
Pentru a forma țesutul de calus, celulele explante trebuie să sufere un proces de dediferențiere, adică pierd caracteristicile specifice ale țesutului original.
Adăugarea de hormoni exogeni în mediul înconjurător duce la apariția calusogenezei. Este de remarcat că hormonii exogeni auxină și citokinină funcționează efectiv numai într-o anumită secvență. Ca regulă, primul auxin trebuie adăugat la mediu și apoi citokinină; acest lucru duce la diviziunea celulară și la calusogeneză. Secvența inversă nu duce la formarea de calus.
După inducerea formării calusului în condiții aseptice, acesta este separat și plasat pe suprafața mediului nutritiv. Ca rezultat, se obține o cultură sterilă de țesut de calus. Țesutul de țesut poate fi menținut în cultură pe o perioadă nedeterminată pentru o perioadă lungă de timp, împărțind-o periodic în fragmente și transplantându-se într-un mediu nou.
Formarea calus apare în meristemul primar sau secundar și a parenchimului adiacent acestui meristem secundar sau țesuturile vasculare. Acest proces depinde de dimensiunea explantului și a celulelor constitutive. Multe țesuturi au o polaritate fiziologică. Evident că, în legătură cu acest calus format mai rapid pe partea explantului, care se confruntă cu rădăcina plantelor mamă, astfel încât prepararea fragmentelor de calus asupra explantelor rădăcină de morcov au fost plasate pe partea apicală agar. În cazul izolării explantelor din tuberculi (anghinare, cartofi), polaritatea nu este semnificativă. Pentru a elimina complet influența explantelor anghinare polaritate poate fi plasată pe suprafața tangențial mediu (NitschJ.P. NitschS. 1956).