Una dintre cele mai importante etape ale programului FIV este embriologia. Pe baza evaluării calității și a fertilizării oului, precum și a cultivării ulterioare a embrionilor, rezultă că rezultatul reușit al fertilizării in vitro depinde.
Succesul este determinat de experiența unui embriolog special, iar această etapă este dincolo de control. Dar multe femei vor fi foarte utile să știe cum se efectuează fertilizarea oului și cultivarea până la stadiul embrionilor.
Clinicile de infertilitate folosesc diferite medii în acest scop, iar acest lucru depinde, printre altele, de buget și de echipamentele tehnologice.
Mediul de cultură
Cerințele pentru mediul cultural utilizat în FIV sunt foarte grave: indicatorii săi ar trebui să fie pe cât posibil cu cei ai unui lichid natural care servește ca mediu pentru embrioni și ovocite în corpul feminin.
Principalele caracteristici pe care un mediu trebuie să le aibă:
- nivelul pH-ului este de 7,4. Sângele unei persoane are exact același nivel de pH. Puteți determina PH cu ajutorul unui indicator de culoare, care ar trebui să devină roșu-portocaliu;
- osmolaritatea a 285 mOsm / kg de apă. De asemenea, corespunde osmolarității pe care o are sângele;
- apa folosită pentru prepararea unui mediu nutritiv trebuie supusă unei duble distilații. Opțiunea ideală, practicată de multe centre de tratare a infertilității - achiziționarea apei de la producătorii bine-cunoscuți care garantează o calitate ridicată a produselor lor, de exemplu, de la companiile Ampuwa, Sigma;
De obicei, albumina serică umană sau bovină, sau serul uman inactivat, este utilizată ca sursă de proteină pentru FIV. Aminoacizii sunt uneori adăugați la mediu, deoarece sunt prezenți în oviducturile reprezentanților anumitor familii de mamifere. Dar stabilitatea în condițiile de cultivare nu manifestă toți aminoacizii. De îndată ce temperatura mediului atinge 37 de grade, ele se descompun, eliberând elemente toxice.
În plus, mediul nutritiv utilizat pentru fertilizarea in vitro poate include nucleotide, vitamine și oligoelemente.
Cultivator de CO2
Pentru cultivarea ouălor și embrionilor, FIV necesită prezența a 5% CO2 în aer, o umiditate de cel puțin 80% și nu mai mult de 90% și o temperatură de 37 de grade. Raportul cel mai optim al acestor indicatori poate fi obținut prin utilizarea incubatoarelor cu CO2, în care se mențin automat indicatorii necesari. Dioxidul de bioxid de carbon este furnizat dintr-un cilindru special și din aerul înconjurător, umiditatea necesară este obținută prin evaporarea apei.
Evaluarea calității ovocitelor
În momentul în care procesul este efectuat FIV puncție foliculară, împreună cu ei, de multe ori sunt prinși și cumulus ovocitului, uneori cu particulele de epiteliului folicular. Deoarece lichidul folicular conține fibrinogen, acesta poate contribui la formarea cheagurilor care complică identificarea oului. Pentru a simplifica procesul, ovocitele obținute ca rezultat al puncției sunt spălate sau lichidul folicular este plasat într-un recipient cu un anticoagulant (heparină).
Fluidul folicular este verificat pentru cheaguri de ouă-cumulus, apoi este turnat într-un vas Petri și verificat din nou, dar deja sub microscop. De regulă, ouăle pot fi văzute cu ochiul liber, arată ca niște cheaguri mucoase de dimensiuni de 5-10 mm.
Ovocitele detectate sunt spălate într-un mediu special și apoi transferate într-o ceașcă specială, unde se va efectua fertilizarea oului. Pentru aceasta, se folosesc pipeta pasteur cu o pere de cauciuc mica sau capilare din sticla sau plastic, care sunt conectate la un aspirator micro. Alegerea instrumentelor depinde de embriologul însuși, care efectuează fertilizarea artificială a oului.
După ce ovocitele sunt plasate în mediul de cultură, specialistul evaluează preliminar calitatea, cantitatea și gradul de maturitate. Și complexele de ovocite - cumulus nu permit întotdeauna să ofere o evaluare reală a ouălor.
În ciclurile de fertilizare extracorporală, adesea există o lipsă de sincronizare în maturarea nucleelor ooplasmei, a ovulului însuși și a celulelor cumuloase.
Indicatorii de absolut Ovum sunt: diametru - 110-120 microni ovocit trebuie să fie înconjurată de un film lucios (zona pellucida), celule multiple coroană radiant (corona radiata) și o multitudine de celule cumulus oophorus (cumulus oophorus).
În ovocitele perforate, trebuie să se completeze prima diviziune a meiozei, după care primul corp polar este separat. A doua divizie, de regulă, se află în etapa metafazei. Cromozomii formează o serie, creând astfel o placă metafază situată direct deasupra corpului polar. În acest caz, blocul de meioză se desfășoară în ovocite, care poate fi îndepărtat numai prin spermatozoidul care penetrează membrana.
Tratamentul cu sperma înainte de FIV
In sperma matur are un cap în formă de pară, ușor aplatizată, dimensiunea ajunge la o lungime de aproximativ 6 mm și o lățime maximă în zona segmentului ecuatoriale - 4 microni. Capul constă dintr-un nucleu și un acrosom, care include enzime litice. Se aseamănă cu un capac și se află deasupra vârfului capului. Mărimea cozii spermatozoizilor atinge o lungime de aproximativ 50 μm. Coada provine din cap, aproximativ în gât, există și un complex de mitocondrii și centriole.
Fertilizarea oului
Spermatozoon, înainte de a pătrunde în ovocite, ca urmare a faptului că fertilizarea oului devine, trebuie depășite un număr de obstacole:
1) cumulus. Pătrunzând mai adânc în ea, sperma crește viteza, demonstrând faza de hiperactivitate.
2) zona pellucida. Aici spermatozonul se leagă de receptor.
După aceasta se efectuează o reacție acrosomală, în care membrana citoplasmatică și membrana acrosomică sunt combinate. Conținutul acrozomei este apoi ejectat, se leagă la zona pellucida, apoi sperma penetrează învelișul de ou fără a-și pierde activitatea.
Pe locul care se află între coaja oului și zona pellucida, spermatozoidul își unește receptorii cu receptorii, care se află pe coaja oului. Aceasta contribuie la reacția corticală, care provoacă procese ireversibile pellucida, ceea ce face inaccesibile altor penetrarea spermei. După câteva ore, ambii gameți își unesc materialul genetic, după care apare un zigot. Cromozomii încep să se pregătească pentru procesul primei divizări de zdrobire.
După o zi, ovocitele sunt plasate într-un spațiu bine umplut cu mediu de cultură proaspăt, determinând dacă a avut loc fertilizarea ovulului.
Odată ce se adaugă spermă, vor exista pronuclei (acest lucru se întâmplă în 10-16 ore). În alte 6-8 ore dispar fără urmă. Este important să le observați în timp, deoarece este aspectul lor care indică faptul că a avut loc fertilizarea oului. În cazul în care se observă un pronucleu sau mai mult de două, aceasta indică evoluția procesului de fertilizare anormală a ovocitului.