Cu majoritatea infecțiilor virale, reacțiile imune care sunt folosite pentru diagnostic se dezvoltă. Reacțiile celulare sunt de obicei evaluate în testele citotoxicității limfocitelor pentru agenții infecțioși sau celulele țintă infectate sau determină capacitatea limfocitelor de a răspunde diferitelor AH și mitogene.
În lucrările laboratoarelor practice, severitatea reacțiilor celulare este rar determinată. Au fost găsite mai multe metode de identificare a AT antivirală.
PH se bazează pe suprimarea efectului citopatogen după amestecarea virusului cu AT specific. Un virus necunoscut este amestecat cu antiseruri comerciale cunoscute și, după o incubare adecvată, este introdus într-un monostrat de celule. Absența decesului celular indică o nepotrivire între agentul infecțios și AT cunoscut.
Inhibarea hemaglutinării RTGA este utilizată pentru a identifica viruși capabili să aglutineze diferite celule roșii din sânge. Pentru a face acest lucru, mediul de cultură care conține agentul patogen este amestecat cu un antiser comercial cunoscut și introdus în cultura celulară. După incubare, capacitatea culturii la hemaglutinare, iar în absența acestuia face concluzia neconformității antiserului virusului. Inhibarea efectului citopatic al interferenței inhibării reacției virusului CPE datorită interferenței virusului utilizat pentru identificarea agentului cauzal, interferând cu celebrul virus CPE în cultura celulelor sensibile. În acest scop, mediul de cultură care conține virusul în studiu, ceea ce face ser comercial (de exemplu virusul rubeolei bănuit), incubat și infecta o a doua cultură; După 1-2 zile, este introdus un virus cunoscut citopatogenic (de exemplu, orice virus ECHO). Dacă există un efect citopatogen, concluzia este că prima cultură a fost infectată cu un virus care corespunde cu AT aplicat.
Printre celelalte teste, cea mai populară a fost reacția imunofluorescenței directe (cea mai rapidă, cea mai sensibilă și reproductibilă). De exemplu, identificarea CMV CPE necesită cel puțin 2-3 săptămâni, iar utilizarea monoclonal marcat AT identificarea este posibilă în decurs de 24 de ore. Cu un astfel de set de reactivi, acestea pot fi aplicate în cultura infectată cu virusul, se incubează, se spală reactivul liber și explora utilizând microscopia fluorescentă (permite detectarea prezenței fluorescenței celulelor infectate).
microscopie immunoelectron (analog metoda anterioară) vă permite să identifice diferitele tipuri de virusuri detectate prin microscopie electronică (de exemplu, diferite tipuri de virusuri herpes), care nu se poate face pe baza caracteristicilor morfologice. În loc de antiser pentru identificare folosit marcat de diferite metode de AT, dar complexitatea și costul de metodă limitează utilizarea sa.
Detectarea anticorpilor antivirus (AT) în ser. HAI. RSK. RIF.
Metode de imunosupresare pentru detectarea anticorpilor antivirus.
O abordare mai simplă și mai accesibilă este detectarea anticorpilor antivirus (AT) în ser. Probele de sânge trebuie luate de două ori: imediat după apariția semnelor clinice și după 2
3 săptămâni. Este extrem de important să se investigheze exact două probe de ser. Rezultatele unui studiu unic nu pot fi considerate finale din cauza incapacității de a raporta aspectul AT la cazul prezent. Este posibil ca aceste AT să circule după o infecție anterioară. Într-o astfel de situație, rolul studiului seric obținut în perioada de convalescență nu poate fi supraestimat. Prezența bolii în timpul selecției primei probe indică o creștere de cel puțin patru ori a titrului AT detectat în studiul celui de-al doilea eșantion.
Metodele enumerate mai jos nu permit diferențierea anticorpilor (AT) formate în timpul bolii și care circulă după recuperare (durata acestei perioade este variabilă pentru diferite infecții). Deoarece pentru o diagnosticare adecvată este necesar să se confirme o creștere semnificativă a titrurilor AT în două probe, prima probă este examinată în faza acută și cea de-a doua în timpul perioadei de recuperare (în 2-3 săptămâni). Rezultatele obținute sunt retrospective și sunt mai potrivite pentru efectuarea de studii epidemiologice. RTGA dezvăluie AT, sintetizat împotriva hemaglutininelor de virusuri (de exemplu, virusul gripal).
Metoda facilitează detectarea unor astfel de anticorpi (AT) în serul pacientului. RSK este principala metodă de serodiagnosticare a infecțiilor virale (printre cele disponibile). Reacția relevă IgM și IgG legat de complement, dar nu le diferențiază; pentru a optimiza rezultatele obținute, reacția necesită anumite abilități ale personalului.
RIF. Dacă este posibilă obținerea unei biopsii a țesuturilor infectate și a disponibilității seturilor comerciale AT marcate cu fluoresceină, un răspuns imunofluorescent direct poate confirma diagnosticul.
Reacția reacției implică incubarea țesutului de testare cu AT, eliminarea ulterioară și microscopia luminescente a probei. Metode Immunosorbtsionnye pentru identificarea anticorpilor antivirali metode Immunosorbtsionnye (de exemplu, ELISA și RIA) sunt mai informativ IgM și IgG detectate individual, ceea ce permite realizarea unor concluzii despre dinamica procesului infecțios sau starea de convalescență. Pentru a identifica AT cunoscut AH adsorbită pe un substrat solid (de exemplu, pe pereții tuburilor de testare, microplăci plastic, vase Petri) și făcând diferite diluții ale serului pacientului. După o incubare corespunzătoare, deslegate îndepărtat, introdus Ig antiser uman marcat cu o enzimă, și procedura de incubare a fost repetată și spălare de nelegată AT face un substrat cromogen (sensibil la acțiunea enzimei). Deoarece schimbarea culorii este proporțională cu conținutul AT specific, este destul de posibil să se determine titrul lor într-un mod spectrofotometric. În diagnosticul infecției cu HIV, metoda de imunoblot a fost cea mai utilizată.
Detectarea antigenelor virale (AH). ELISA. În prezent, au apărut deja truse comerciale pentru detectarea AH a anumitor agenți patogeni, permițându-le să fie identificați în 5-10 minute. Pentru a detecta AH pe faza solidă, AT-urile cunoscute sunt sorbate și serul care conține AG este adăugat; După incubare, AG nelegat este decantat, sistemul este spălat și se adaugă AT-urile marcate specifice AT sorbate. Repetați procedura de incubare și spălare, realizați un substrat cromogen, un rezultat pozitiv este stabilit atunci când culoarea sistemului se schimbă. Hibridizarea ADN este o metodă foarte specifică care permite identificarea genomului unui virus după hibridizarea acestuia prin molecule ADN complementare. Enzimele și izotopii sunt utilizați ca markeri.
Metoda determină capacitatea ADN-ului viral de a hibridiza cu ADN-ul complementar marcat; Specificitatea metodei este direct proporțională cu lungimea lanțului complementar. Metoda de hibridizare a acizilor nucleici in situ este promițătoare. Pentru a formula reacția, ADN-ul marcat este aplicat biopsiilor tisulare (incluzând formalina fixată sau închisă în blocuri de parafină) și se înregistrează interacțiunea cu ADN complementar. Metoda este utilizată pentru a detecta virușii de herpes simplex, papilomul uman, Epstein-Barr et al.