Metoda PAS-reacție pentru glicogen - evaluarea rezultatelor
Metodele citochimice urmăresc identificarea agenților chimici și enzimatice a celulelor utilizând reacția de culoare. Preparatele citochimice păstrează structura celulară, care permite identificarea celulelor și localizarea intracelulară issleduvmogo compozit. De aceea, în hematologie preferat să nu biochimice, consumatoare de timp, distrugerea structurii celulare de apartenență la o populație de celule foarte diverse, și metode citochimice.
Citochimie a demonstrat că există diferențe enzimatice între celulele morfológicamente identice chimice semnificative și.
Glicogen (reacția PAS) (PAS) - metoda Gochkiss - Mack Less
Principiul PAS-reacție. Polizaharidele sunt identificate prin reacție, oxidarea grupe alcoolice care sunt convertite în grupări aldehidă, și prin identificarea reactivului Schiff reacție ultima culoare.
Reactivi pentru reacția Schick. 1. amestec fixator alcool-formol: 9 părți alcool absolut etil 1 parte 40% formalină; stoca la + 4 °.
2. acid periodic, soluție apoasă 1%. Soluția a fost incoloră. Depozitați într-un flacon din sticlă brună la întuneric, la temperatura de laborator. soluție aplicabilă îngălbenit.
3. Reactiv Schiff. Se dizolvă 1 g de fucsină bază în 200 ml apă distilată la temperatura de reflux. Palavrageala 5 minute, răcit până la 50 °, se filtrează și se adaugă 20 ml de acid clorhidric normal. Se răcește la 25 °, se adaugă 2 g de metabisulfit de sodiu sau potasiu, care furnizează dizolvat complet. Soluția trebuie să stea timp de o zi într-un întuneric și rece (+ 4 °). Apoi se adaugă 2 g cărbune activ, chat timp de 1 minut. și se filtrează.
Filtratul rezultat a fost limpede și incoloră. Poate fi tentă ușor gălbuie; în cazul în care soluția devine roz, devenind inutilizabil. A se păstra la + 4 ° într-o sticlă de culoare brună închis.
4. Soluție apoasă Bright verde -1%.
5. diastasis: nerazzhizhennaya saliva umană sau 0,1% soluție diastatice enzimă amilolitică în ser fiziologic.
Tehnica de PAS Interactuinea
1) amestec frotiurilor de fixare formol alcool timp de 10 minute; spălarea cu apă distilată;
2) oxidarea unei soluții 1% de acid periodic, 10 min.; spălarea cu apă distilată;
3) reactiv de colorare Schiff acoperit cu container, în condițiile întunecate și reci, timp de 2 ore; spălare cu jet de apă;
4) 1% colorant contrastant verde deschis timp de 1 minut; spălare cu apă curentă.
Referință frotiu fixă de incubare diastazei supuse, 60 min. la temperatura camerei pentru a îndepărta selectiv glicogen. După spălare cu apă distilată, este tratată printr-o metodă convențională.
Evaluarea rezultatelor PAS-reacție
Glicogenul. RED-o nuanță de culoare roșu aprins, apare sub formă de boabe sau împrăștiate. granulocite mature frotiu este folosit pentru a controla reacția. În afară de glicogen Schick dau o reacție pozitivă și alte substanțe de natură carbohidrat, cum ar fi mucin, mucoproteins, cerebrozide, fibrina. Diferențierea de glicogen din acești constituenți se realizează prin pretratarea diastaza, după care glicogenul nu este colorat.
Granulocitelor glicogenul formă dispersată în etapa de promielocite și începe să crească ca maturare. În condiții normale, limfocite sau negativ în 20% dintre ele poate fi o granule fine câteva glicogen. Monocitele sunt negative sau au o granulație fină.
Intensitatea culorii este determinată semicantitativ. Reacția limfocitelor Schick se reflectă în forma indicelui glicogen, sau reacția medie (Astaldi). indicele de glicogen normal variază de 0.10 - 0.30. De obicei, numai în limfocite anormale observate la nivel de încărcare de mai mult de 3.
Prin urmare, metoda de reacție Schick.
a) La formularea diagnosticului diferențial al tipurilor citologice individuale de leucemie acută:
- mieloblasti și promielouity Schick-negativ sau devin slabe de culoare difuză. corp Auer dă un răspuns pozitiv, ceea ce diminuează după digestie cu salivă.
- Limfoblaste în leucemia acută și Limfosarcoma da reacție ascuțită PAS pozitiva sub forma de granule sau de glicogen blocuri mari.
- eritroblaști la eritremii și erythroleukemia acută da difuză brusc pozitiv sau reacție granular, opus eritroblaștii normale care Schick-negative;
- monocitoid b aripioare nepermanent slab pozitiv, cu o granulație fină.
b) În scopul diagnosticării și tratamentului monitorizarea eficacității la pacienții cu leucemie limfatică cronică: o rată supraevaluată de glicogen indică o formă severă a bolii și mormântul prognosticului.
Creșterea limfocitelor anormale în glicogen nu este caracteristic fenomenului leucemie se datorează unei creșteri a activității metabolice în orice formă de proliferare limfoidă.
c) Pentru a se diferenția de alte celule Gaucher cu acumularea de macrofage.