Este cunoscut faptul că, în stare nativă datorită factorilor de rezistență în soluție sunt reținute proteine, care includ sarcina moleculelor de proteină și hidratat (apă) învelișul din jurul acesteia. Eliminarea acestor factori conduce la o aglutinare a moleculelor de proteină și pentru a precipita precipitarea. Precipitarea proteinelor pot fi reversibile și ireversibile în funcție de natura reactivilor.
Depunerea reversibilă - în acest proces sub influența factorilor proteinelor depunerea să precipite, dar după încetarea acestor factori, proteine transferate din nou într-o stare solubilă și să dobândească proprietățile sale native. Un tip de precipitare reversibilă-sărare din proteine este.
precipitarea ireversibila a proteinelor asociate cu afectarea profundă a structurii proteinei (secundară și terțiară) și pierderea proprietăților lor native. Astfel de modificări pot duce proteine la acțiunea soluțiilor concentrate de acizi minerali și acizi organici, săruri de metale grele de fierbere.
Sărare din proteine este utilizat pentru metale alcaline și alcalino-pământoase (cel mai des utilizate în practica de sulfat de sodiu și amoniu). Aceste săruri sunt îndepărtate prin manta de apă (cauza deshidratare) și îndepărtați încărcătura. Între cantitatea de apă plic moleculele de proteină și concentrația de sare, există o relație directă: mai mică coajă hidrat, mai puțin sarea necesară. Astfel, globuline având molecule grele și mari și mici cochilie precipitat apos din incompletă soluție de săruri de saturare și albumine ca și moleculele mici înconjurate de coajă de mare de apă, - la saturație maximă.
Denaturarea proteinelor (precipitare ireversibilă) se reduce la distrugerea structurii terțiare și parțial secundară a legăturilor de hidrogen ruptură vrezultate molecule de proteine și pierderea proprietăților lor biologice sau native. Atunci când reacțiile de precipitare ireversibilă proteine suferi modificări profunde și pot să nu fie solubil în solventul inițial. Prin proteină ireversibilă reacțiile de precipitare includ săruri ale metalelor grele, acizi anorganici și organici, reactivi de precipitare alcaloid și sub reflux.
Experiment 1. Sărare de proteine cu sulfat de amoniu.
Principiul metodei. Desalinizării - este adăugarea de proteină la o soluție de săruri neutre (Na2 SO4 (NH4) 2 SO4.). desalinizării mecanism cuprinde reacția anioni (SO4 2-) și cationi taxele proteice (+ NH4 + Na.) (grupa NH4 + și COO -). Ca urmare, taxa dispare, și, în consecință, repulsia reciprocă a moleculelor dispare. În același timp, a redus drastic coajă hidrat. Toate acestea conduc la molecule „blocare“ și depunerea.
sulfat de amoniu saturată precipită proteinele albuminelor fracție soluție semisaturată - fracție globulinelor.
REZUMAT reacție este deshidratarea moleculelor de proteină.
Ordinea de performanță.
Țeava de turnare 30 picături nediluat albușul și se adaugă o cantitate egală de soluție saturată de sulfat de amoniu. conținutul a fost agitat tubului. Astfel, proteinele precipitate. Albuminelor fracție
Se prepară o soluție saturată de jumătate de sulfat de amoniu și bine amestecate (1: 1) cu albuș de ou, fracția globulină este precipitat și albumen rămân în soluție. Aceasta se filtrează, apoi se amestecă cu o pulbere de sulfat de amoniu până la până la dizolvare fără sare ulterioară, precipitatul - albuminele.
Pentru precipitatul rezultat (albumine și globuline) au fost adăugate apă și observând dizolvarea lor. Acest lucru dovedește că sărarea - procesul este reversibil.
A face experiența: rezultatele experienței scrise în notebook-uri și să tragă o concluzie.
Experimentul 2. Sărare de clorură de sodiu și proteine sulfat de magneziu.
Principiul metodei. Pentru sărare din proteine din soluție se aplică de clorură de sodiu, sulfat de sodiu, acetat de sodiu, sulfat de magneziu, acetat de potasiu, clorură de calciu, azotat de calciu și sulfat de amoniu. Unele dintre săruri nu numai proteine sărați cu saturarea soluției; anumite proteine și sărare în săruri, la concentrații suficient de scăzute. Astfel de săruri includ sulfat de amoniu. Condițiile în care precipitarea cu sulfat de amoniu, tipică pentru proteinele individuale (cu rare excepții) că această proprietate de proteine pot fi comparate cu solubilitatea caracterizează substanța cristalină.
Proteinele sunt compuse din aminoacizi și, prin urmare, au proprietăți amfoteri. Atunci când se dizolvă în apă de ioni de proteine de hidrogen, care rezultă din disocierea grupării carboxil este atașată la o grupare amino. Prin urmare, moleculele de proteine suportă cheltuieli atât pozitive, cât și negative. Cantitatea de încărcare determinată de numărul de grupări ionice. La un anumit pH sarcina electrică totală a moleculelor de proteine este egal cu zero. O astfel de valoare a pH se numește punctul izoelectric (Pj). Punctul izoelectric al soluțiilor de proteine au o stabilitate minimă, deoarece le lipsește principalul factor de stabilizare - taxa și, prin urmare, ușor de precipitat. Se determină punctul de proteine izoelectric poate, determinarea pH-ului la care soluția de proteină este mai neclară. Cele mai multe proteine punctul izoelectric se află într-un mediu slab acid.
Precipitarea proteinelor NaCl și MgSO4 - clorură de sodiu și sulfat de magneziu, în contrast cu sulfat de amoniu precipită globulinelor din soluție saturată. Punctul izoelectric al acelorași săruri globulinele sunt precipitate la o concentrație scăzută.
Ordinea de performanță.
Cele două tuburi au fost turnate, se adaugă, sub agitare, până la saturație completă (când cristalele rămân nerastvoronnoy în ciuda agitației) într-un tub de clorură de sodiu fin măcinată, într-un alt 5 ml de soluție de proteină 1% - sulfat de magneziu. Câteva minute mai târziu, cele două tuburi există un depozit de globuline. Precipitarea a fost filtrat și la filtrat se adaugă câteva picături de acid acetic diluat (CH3COOH) - într-un mediu slab acid cade albuminele. soluție de albumină ca pH-ul se apropie de punctul izoelectric.
Soluția apoasă de particule proteice sunt încărcate și foarte hidratat, ceea ce conduce la stabilitatea soluțiilor de proteine. Cu toate acestea, la concentrație mare de săruri, ioni, care sunt, de asemenea, membrane foarte hidratate sunt distruse molecule proteice apoase și de încărcare este îndepărtat din molecula de proteină adsorbită pe acesta ioni de sare.
Ca rezultat al acestor două procese devin soluții proteice instabile, particule proteice se coaguleze una cu alta, devin mai mari și în final precipită.
A face experiența: rezultatele experienței scrise în notebook-uri și să tragă o concluzie.
Experimentul 3. Proteinele de coagulare sub încălzire.
Principiul metodei. Pierderea de proteine din precipitat prin încălzire caracteristic pentru aproape toate proteinele (cu excepția gelatină, nu coagula atunci când este încălzit). O precipitare deosebit de ușoară și mai completă a proteinei are loc într-un mediu slab acid în vecinătatea punctului izoelectric. În medii neutre și puternic acide, există o precipitare a proteinelor este mult mai rău, și într-un mediu alcalin, nu se observă.
Mediul alcalin este redus de disociere a radicalilor proteină diamino, moleculele sale dobândesc sarcină negativă, astfel încât să rămână în soluție, chiar atunci când sunt încălzite până la fierbere.
Adăugarea la soluția de proteină de sare neutră (NaCl) facilitează și accelerează coagularea proteinelor la fierbere, care vin particule proteice datorate deshidratante.
Ordinea de performanță.
In 5 tuburi se toarnă la 2 ml. proteină: primul tub este încălzit, și apare precipitatul înainte de a fierbe lichidul. Pentru al doilea tub s-a adăugat 1 picătură de soluție 1% de acid acetic (CH3COOH) și încălzit. proteina floconos precipită rapid și mai complet decât în tubul primul test, datorită faptului că acidifierea pH-ul soluției în apropierea punctului izoelectric al proteinei (proteină e = 0). Într-un al treilea flacon s-a adăugat 0,5 ml. 10% acid acetic (CH3COOH) și încălzit. Precipitatul nu se formează chiar după fierbere. În al patrulea tub s-a adăugat 0,5 ml. 10% acid acetic (CH3COOH) și câteva picături de soluție de clorură de sodiu saturată și se încălzește. Peletul este. Al cincilea tub s-a adăugat 0,5 ml. soluție caustică 10% și se încălzește. Precipitatul nu este format chiar și atunci când fierte. Efectuarea de lucru.
Rezultatele testelor și concluziile sunt înregistrate în tabel.
Experiment 4. Precipitarea proteinelor prin săruri de metale grele.
Principiul metodei. Precipitarea proteinelor cu săruri ale metalelor grele, în contrast cu desalinizării are loc la concentrații scăzute de săruri. Proteinele care interacționează cu săruri de metale grele (plumb, cupru, argint, mercur, etc.). Le adsoarbe și compuși complecși de formare a sărurilor solubile într-un exces de săruri (cu excepția AgNO3 săruri, HgCl2), dar insolubil în apă. Se dizolvă precipitatul în exces de săruri de adsorbție numite peptization. Acest fenomen se produce ca urmare a apariției același nume sarcinii pozitive asupra particulelor proteice. Dacă precipitatul nu se dizolvă după diluare, apoi, reacția este practic ireversibilă. Ionii metalici capabili să formeze compuși insolubili cu proteinele sunt toxice pentru noi.
Astfel, sărurile de metale grele: Hg, Ag, Cu, Pb, etc. provoacă depunerea ireversibilă a proteinelor, formând cu ele compus insolubil în apă.
Cu toate acestea, un exces de anumite săruri se observă dizolvarea inițială precipitatul format. Acest lucru se datorează acumulării ionilor metalici pe suprafața proteinei denaturate și apariția o sarcină pozitivă pe molecula de proteină.
proteine pentru a lega ferm ionii de metale grele, pentru a forma precipitate insolubile în apă este utilizată ca antidot la săruri otrăvire cu mercur, cupru, plumb, și altele. Imediat după intoxicație lapte utilizat în mod obișnuit sau proteine din ou, dar aceste săruri în stomac și nu timp pentru a fi absorbite. Ca urmare a proteinelor pacient dacha provocați vomitarea pentru a elimina otrava din organism.
ionii de metale grele (cationi cu sarcină pozitivă) formează legături puternice cu anioni încărcate negativ carboxil proteină grupări R și adesea cauzează discontinuități legături ionice. Ele reduc, de asemenea, proteina de polarizare electrică pentru a reduce solubilitatea. Prin urmare, proteina din soluție precipită.
Ordinea de performanță.
Tubul 2 se toarnă la 1 ml. soluție de proteină a fost încet adăugat în picătură, sub agitare într-un 2-3 picături de soluție de sulfat de cupru, celălalt acetat de plumb. Ambele precipitat floconos tuburi scade datorită formării compusului greu solubil sare cum ar fi albastru (e SuSO4) și alb (cu Pb (CH3 COOH) 2) culori.
A face experiența: rezultatele experienței scrise în notebook-uri și să tragă o concluzie.