Colorarea și încheierea secțiunilor - baza de histologie

Pagina 44 din 68

Pentru felie preparate prin una dintre metodele de mai sus, a fost posibil să investigheze un microscop, este necesar ca componentele structurale ale țesuturilor constituente sunt bine perceptibile în lumina transmisă, și că tăietura este protejat de posibila contaminare și deteriorare. Prin urmare, o taie în continuare prelucrarea lor implică vopsire, albire și concluzie.

Observații generale

În ciuda faptului că secțiunile de pictura are o istorie lungă, pînă atunci complet obscur esența mecanismelor de acțiune a multor coloranți. Fără îndoială că numai că baza microstructuri tisulare de colorare sunt procese fizico-chimice. Din factorii fizici trebuie mai întâi observat fenomenul de difuzie (penetrare) adsorbție (suprafața de absorbție) și îndepărtarea (impregnare profundă) colorantului și solubilitatea substanței chimice - soluții electrolitice și proprietăți de vopsire a țesăturilor înseși. La fel de importante sunt densitatea țesuturilor și colorantul Răspândirea. Prima proprietate specifică secvența de colorare a structurilor individuale, a doua - viteza procesului de colorare.
Ea se bazează pe proprietățile separării electrolitice utilizate în practica vopselelor histologice în trei grupe: de bază, acide și neutre.
Colorantul de bază este o bază colorant sau a sării sale și vopsește structurile celulare și țesuturi de natură acidă, cum ar fi cromatină nucleu care conține ADN și endosome conținând ARN. De aici și bazofilie termen (bază iubitoare) pentru a desemna componente tisulare, colorarea cu coloranți bazici (tionina, hematoxilină, metil verzi etc.).
colorant Acid - un acid colorant sau o sare a acestuia, prin care materialul și particulele de natura de bază a colorat, de exemplu, granule de eozinofile, citoplasmă anumitor celule ale hipofizei anterioare, etc. De aici oksifiliya termenul (acidofil - acide iubitoare). Elemente de țesut colorat coloranți acizi. In acest grup de substanțe includ eozină, eritrozină, fucsină acide, congo roșii și altele.
Neutral compus colorant este format prin soluții apoase de coloranți acizi și bazici (colorant compus cu bază colorant de acid). Acest grup include Sudan, eozinovokisly albastru de metilen și alții.
A nu se confunda cu un amestec colorant neutru colorant neutru, caracterizat prin prezența simultană în soluție de coloranți bazici sau acizi. Neutrofiliei Termenul Același lucru este valabil pentru rezultatele colorării cu ambele grupuri coloranți, deoarece reflectă proprietatea colorantului nu, iar echilibrul dintre proprietăți acide și bazice ale elementelor acoperite.
Trebuie amintit faptul că calitatea culorii și a rezistenței sale poate avea o metodă semnificativă de fixare efect, pre și preparate post-tratament. De aceea, trebuie să respecte cu strictețe toate liniile directoare și regulile generale de colorare.
De asemenea, trebuie subliniat faptul că majoritatea coloranților histologice nespecifice, t. E. nu dezvăluie natura chimică a componentelor tisulare. Ele pot fi folosite doar pentru a studia caracteristicile morfologice ale microstructuri.
Coloranți utilizate în scopuri histologice, împărțite în naturale și artificiale.
Există mai multe tipuri de colorare histologică: progresiv, regresiv, directe, indirecte, simple și complexe.
Colorarea progresiva - este o metodă în care feliile sunt colorantului până la până când ajung la pătarea nivelul cerut.
Regression - vopsi primele secțiuni și apoi ajustate la culoarea dorită prin spălare cu un lichid adecvat, care permite distinge mai clar elemente tesuturi individuale.
Noi ar trebui să țină mereu în minte: a) lichidul jgheabului de îndepărtare atentă (în caz contrar aceasta va continua să funcționeze și va denatura rezultatul culorii); b) aplicarea preferată a secțiunilor subțiri; c) că vopselele divortati dau rezultate mai bune decât soluțiile solide (felii groase și o concentrație ridicată a diferențierii colorantului dificile și să conducă la secțiuni de culoare inegale); g) că culoarea trebuie efectuată sub controlul microscopului.
Utilizarea tehnicilor de colorare regresive necesită o anumită abilitate care se dobândește treptat.
Colorarea directă - colorarea obiectelor direct în soluție de colorant, indirect (mordant) - felie pătat colorant dorit numai după pretratare specială coloranți mordanți.
Într-un simplu colorare cu un colorant este utilizat. O formulare complex de colorare cuprinde tratarea mai multor coloranți (două sau mai multe), simultan sau succesiv (vezi. Hematoxilină-eozină metoda Van Gieson).
Toate metodele de colorare histologice pot fi împărțite în două grupe principale: a) studiu, utilizate pentru a furniza o reprezentare totală a orientării obiectului studiat (nucleu predominant pătată și citoplasmei celulelor); b) specifice care permit tesatura petelor și tocmai acele elemente celulare care sunt cercetători interesați (organitelor celulare, structuri fibroase, și așa mai departe. d.). Metodele care constituie al doilea grup, sunt mai complexe și necesită metode speciale de fixare.
În scopul de a obține rezultate bune cu orice metodă de colorare a preparatelor histologice, este necesar să se respecte anumite reguli.

1. soluții de colorare trebuie să fie curate, astfel încât orice colorant trebuie filtrată înainte de utilizare, iar soluția apoasă preparată numai cu apă distilată.

1. Preferați: a) colorării o concentrație scăzută pentru o lungă perioadă de timp înainte de tranzitorii Coloranții concentrație mare de colorare; b) aplicarea metodelor regresive.
2. efectua cu atenție toate procedurile în curs de pregătire pentru pictura tăiat și post-procesare.

tehnica de colorare

Rezultatul acestor manipulări felie și porțiunile adiacente ale culisei tselloidinovoy acoperite de un film subțire, și prin care se realizează prin consolidarea felie și pe sticlă. După aceea, secțiunile au fost clătite cu apă distilată și se colorează.
Care transportă colorare. Când secțiunile colorate au fost transferate coloranților apoase de apă distilată și colorare cu alcool - de alcool direct la soluția adecvată de colorare concentrație (colorația directă) sau în primul decapantului lichid (colorație indirectă). Atunci când medicamentul dobândește intensitatea culorii dorită, se spală în apă (sau alcool) pentru a îndepărta excesul de colorant și apoi, dacă este necesar, se diferenția într-un lichid adecvat. Excesul de colorant este spălat atâta timp cât el nu încetează să se deplaseze de la tăietura în lichidul de spălare.
Colorarea secțiuni lipite de sticlă, se pot efectua atât prin plasarea lor într-o soluție de colorare și un colorant nakalyvaniya forfecare. In primul caz utilizat pahare din sticlă, cuvete sau rafturi speciale metalice, permițând în același timp pentru a picta un număr mare (40-50) din sticlă (Fig. 79). Pentru colorarea înțepătură în plăci plane sau tăvi sunt plasate tije de sticlă paralele, care sunt așezate pe lamele de sticlă. Pentru a nu se lipi deplasat, capetele lor sunt conectate printr-un tub de cauciuc. După aceea, forfecare prin soluția pipetă nakapyvayut
colorant. Dacă pata este lung, pentru a evita evaporarea localizarea colorantului felie este acoperit cu o sticlă de ceas mic sau o cană. Un efect similar poate fi realizat prin plasarea lamelor cu colorant picurată într-un vas Petri, în același timp, punând un număr de lână înmuiată în apă. După ce cupa este închisă, umidificarea are loc, ceea ce conduce la o soluție semnificativă scădere a colorantului evaporare. Colorat gratuite secțiuni ca în pregătirea prealabilă, sunt în Buxy sau pahare de ceas.