PRINCIPII ȘI METODE DE PICTURA preparate histologice GENERALE
Baza colorarea celulelor și țesuturilor sunt procese fizico-chimice (difuzie, adsorbție, absorbție, solubilitate și altele.) Producându-se în vopsea, iar microstructuri. De o mare importanță sunt densitatea țesăturii și dispersia colorantului, care determină secvența și viteza de vopsire.
Scopul colorit este identificarea clară a diferitelor componente ale celulelor și țesuturilor. Unii coloranți furnizează acest efect, dizolvarea în componente detectabile grăsimi neutre. Alți coloranți provoca o reacție chimică, cum ar fi detectarea de fier pentru a forma albastru de Prusia în condiții acide. In multe cazuri, procesul de colorare este posibilă numai în prezența unui mordant, cum ar fi tesatura pata hematoxilină în prezența sărurilor metalice.
Practica histologică folosind coloranți bazici, acizi și neutre.
Basic sau nuclear, coloranti - este o bază sau o sare a acestuia, care se colorează structuri de natură acidă (nuclei cromatinei, nucleoli și altele). Și se numesc bazofile (hematoxilină, tionina, carmin, verde metil, etc.).
Acid Dyes - l acizi sau sărurile lor, în care dezvăluie structura materiei și natura de bază (structuri citoplasmatice ale celulelor, eritrocite, etc.). Acestea sunt eozină, fucsin acid roșu Congo (kongorot), eritrozină.
coloranți neutri: sudan III, sudan IV, albastru de metilen.
procedeu de colorare histologică divizat convențional în progresiv și regresiv, directe și indirecte, simple și complexe. Când procesul de vopsire tip progresiv continuă până până când atinge o penetrare intensivă a colorantului în țesătură. tip regresiv bazat pe structurile revopsirea originale cu diferențiere ulterioară la nivelul dorit. În cazul în care soluția de colorare acționează direct pe pânză, atunci vorbim despre vopsirea directă. Colorare după tratarea prealabilă a țesutului (gravare) este numit indirect. Colorarea vopsesc - simplu. și utilizarea mai multor coloranți - complexe.
ÎNAINTE DE A ÎNCEPE colorare felie
Parafina sau parafină secțiunile celloidin-to-okra Shivani liber de parafină cu oricare dintre rase-solvent lui, - benzen, toluen, xilen, benzen. Mai ales cu atenție îndepărtat înainte de țesut test parafină sub un microscop polarizant, pentru că parafina are o proprietate birefringente. Deparafinare se realizează conform următoarei scheme
După deparafinării 100-150 medicamente reactivii trebuie să fie schimbat. Produsele deparafinate pregătite pentru colorarea imediat după spălare în apă distilată, dar pentru a evita secțiunile cojire, în special atunci când pătate de Van Gieson, este mai bine să se usuce în aer. În cazul în care nu colorare a produs imediat, apoi deparafinate și produse uscate cu grijă, astfel încât să nu se deterioreze feliile, puse într-o cutie de vopsea și după cum este necesar.
Tehnica de colorare NOTE
Când secțiunile colorate cu colorant apos transferat la vopseaua de apă distilată și colorarea cu alcool - din soluția corespunzătoare de alcool. După preparare devine o culoare intensă, se spală în apă sau alcool pentru a îndepărta excesul de colorant (diferențiere) prin monitorizarea acestui proces sub microscop.
Secțiunile de țesut și tselloidinovoy parafină după turnare, și de asemenea, a primit pe un microtom de congelare, au fost colorate într-o sticlă de cântărire sau gura largă pe o sticlă de ceas. pătată Simultan unele secțiuni, dar spălate etc. diferențiat fiecare secțiune în parte.
Formulările pot fi plasate în soluție de colorare în containere speciale destinate pentru colorarea simultană a unui număr mare de ochelari. În cazul în care preparatele biți, colorantul rațional aplicată direct în picătură felie prin pipetă. resturile de colorant poate fi drenat în flacon și reutilizarea. Jeleuri D. (1962) a propus acoperire cu secțiuni capac de sticlă și pentru a adăuga mediul umezirii sub lîna capota umezită cu apă.
iluminare CONCLUZII și felie
Una dintre condițiile principale care determină caracterul adecvat al preparatelor histologice pentru examenul microscopic, este transparența lor. În plus, medicamentele trebuie să fie protejate de uscare și a poluării. Toate acestea se realizează Coated și într-un mediu special, care pot fi împărțite în miscibil cu apa (glicerina, guma arabică, alcoolul polivinilic, gelatina) și se amestecă cu apă (xilen, toluen, amestecuri ale acestora cu fenol, uleiuri eterice).
agent de limpezire miscibile sunt ambele medii să intre în și să se pregătească pregătirile permanente.
Concluzie în mediu, miscibil cu apa
Dintre acestea, mediu glicerină-gelatină utilizate din ce în ce. De asemenea, utilizarea glicerina pură, cu toate acestea, această metodă nu permite să se pregătească pregătirile permanente.
R. Lilly recomanda pentru aceste scopuri sirop gumă Apáti:
50 g gumă arabică pură
zahăr rafinat 50 g
Distilat 50ml apa
Amestecul a fost dizolvat într-o baie de apă sub agitare constantă, apoi 500 mg de timol. Folosit ca polivinil alcool.
miscibil mediu cu apă (cu excepția glicerol), preîncălzit într-o baie de apă, o baghetă de sticlă încălzită este abandonată sau pipetează pe tăiat îndreptat, ușor uscate și acoperite cu lamelă curată și uscată. baghetă de sticlă curată sau răsfoiesc degetul apăsat ușor pe geamul capacului. În acest mediu excesul stoarsă și cu grijă îndepărtat cu o cârpă curată.
agenți și confinare înălbire în mediu,
nemiscibil
Secțiunile au fost lipite pe sticlă sau preparatele complet deshidratate în alcool (70%, 96% și 100%) și apoi plasate în oricare din materiale antireflexie. Se constată că pentru diferite studii o anumită substanță antireflex preferată. Astfel, atunci când se colorează pentru metoda Nissl și Gram - Weigert mai bine antireflex și agent de diferențiere simultan este uleiul de anilină, dar pentru înălbitori când se colorează cu Van Gieson utilizarea sa inacceptabilă. Cele mai frecvente și indiferenți în ceea ce privește compușii de coloranți sunt toluen și xilen. precum și amestecuri ale acestora cu fenol (fenol cristalin au fost topite într-un cuptor la 56 ° C și amestecat cu xilen într-un raport de 1: 4 sau 1: 6).
Bună deshidratate în alcooli și luminat în carbol-xilen și apoi în produse xilen pure sunt gata să semneze într-o rășină specială. Pentru această rășină utilizarea finală de origine vegetală - balsamuri (canadian, brad si pin siberian). Toate acestea sunt ușor solubile în toluen și xilen.
Metoda de dizolvare: în balon cu toluen uscat se toarnă rășină care se dizolvă treptat rășină superioară. Procesul poate fi accelerat dacă sticla plasată într-un cuptor la 37 ° C - 40 „C. Soluția groasă rezultată a fost turnată în cealaltă bancă și sa adăugat o nouă porție de toluen, în timp ce agitarea soluției și ajustarea lichidului la o consistență de miere. Prea mortar ca evaporarea toluenului se ingroasa din nou. balsam Pregatite depozitate într-un recipient închis ermetic.
In Pathomorphology practic utilizat pe scară largă de material plastic sintetic - polistiren. Metoda de aplicare a acestui material plastic este furnizat DS Sarkisov și detaliate în manualul G.A.Merkulova „Tehnologia patologogistologicheskoy Curs“ (1969). Polistirenul este foarte solubil în xilen și toluen, transparent și se întărește rapid sub o lamelă de sticlă pentru a forma un film subțire. Metoda de dizolvare este aceeași ca și cea pentru rășinile de plante. Cu toate acestea, în timp polistiren devine friabil, fisuri în film. ceea ce face dificilă examinarea microscopică și total inacceptabil pentru microfilmare. Pentru a preveni aceste neajunsuri, se adaugă o soluție de 30% polistiren în xilen un plastifiant care conferă flexibilitate și elasticitate al filmului, eliminând toate neajunsurile din polistiren. In prezent folosit ca ftalat plastifiant dibutil, frecvent utilizate in microscopie electronica. Există mai multe opțiuni de pregătire polistiren pentru încheierea pregătirilor:
1) 94 ml dintr-o soluție 30% polistiren în xilen a fost amestecat cu 6 ml de ftalat de dibutil;
2) un amestec format din 100 g de polistiren de 100 ml xilen și 12 ml de dibutilftalat a fost dizolvat la 22 ° C sau într-un cuptor la 37 ° C, amestecând periodic.
Rășina sintetică finită depozitată într-un recipient închis ermetic. Concluzia secțiunilor tehnologice este aceeași ca și în aplicarea mediilor solubile în apă.
NUCLEAR DYES ȘI PREPARAREA ACESTORA
Colorarea nuclee de celule se datorează două mecanisme de interacțiune chimică: 1) coloranți bazici cum ar fi anilină, formează săruri, în prezența ADN și ARN; 2) complexe formate cu ioni metalici în aplicarea petelor. În practică, utilizate adesea coloranți mordanți. Acestea includ hematoxilină, carmin, safranina, gallocyanin, alizarină. Bune nucleelor patate astfel de coloranți precum Janus verde, Basic Brown, coloranți oxazină (erezii violet, albastru de Nil), teanina, Giemsa, albastru de metilen, fucsină bazic, verde metil, și altele. Trebuie menționat rezultate bune colorare suc de afine nuclee, care este oferit MD Lavdovsky înapoi în 1887
Hematoxilină și modalități de gătit
Hematoxylin este de origine vegetală: se obține din extractul eteric al logwood. Hematoxylin este ușor solubil în alcool și apă rău. Proprietățile de colorare a hematoxilină produs de oxidare - hematein totuși colorant devine utilizabil numai după maturare - oxidare, care este necesară pentru 10 zile la 2 - 3 săptămâni. Coacerea poate fi accelerată prin utilizarea de săruri de aluminiu, crom, fier și altele.
2g cristalin Hematoxylin
100ml apă distilată
Sau potasiu alaun 3g alyumoammoniynye
10 ml acid acetic glacial
Hematoxylin a fost dizolvat în alcool și alaun - în apă distilată, cele două soluții sunt amestecate și apoi adăugate la restul componentelor. Soluția este agitată periodic. După 10-14 zile, aceasta devine de culoare cires inchis, ceea ce indică dorința colorantului. Durata hematoxilină Ehrlich perioada 4 - 6 min. Urmată de spălare în apă distilată și apoi în apă de la robinet, Diferențierea în recuperare alcool clorhidric 1% în apă de amoniac și clătire finală în apă distilată.
Pentru a prepara alcoolul clorhidrat în 100 ml de alcool 70% s-a adăugat 1 ml de acid clorhidric concentrat; pentru prepararea apei de amoniac la 50 ml apă distilată se adaugă 2 picături de amoniac puternic.
Rezultat: nucleul celulelor (teaca, cromatină) matrice nucleară albastru inchis albastru pal sau limpede.
Se amestecă soluțiile I și II, se adaugă apoi 60 ml de glicerol și 2,5 g de oxid de mercur (galben sau roșu). Soluția a fost încălzită la 100 ° C, se răcește, se filtrează. Înainte de a utiliza 100 ml soluție se adaugă 2 ml de acid acetic glacial. Harris avantaj hematoxilina este viteza de preparare și colorarea claritate nuclei.
Durata pătare 3 - 4 minute. Urmată de spălare și diferențiere, recuperare în apă de amoniac și clătire finală în apă distilată.
Rezultatul: luminos miez albastru.
Hematoxylin Mallory (apos).
Hematoxylin cristalin 2,5 g
Alyumoammoniynye alaun 50g
1000ml apă distilată
Soluția a fost incubat timp de 10 zile la 25 ° C, s-a adăugat 440 mg de permanganat de potasiu și 2,5 g de timol. Stârnite de mai multe ori, înainte de filtrul de aplicare.
Durata pătare 3 - 4 minute. Apoi urmează aceleași proceduri ca și pentru colorare cu hematoxilină și alte modificări.
Rezultat: miez albastru.
afine curate proaspete într-un malaxor de mortar de porțelan, amestecat cu un volum egal de alcool 96%, insista 1 - 2 zile și se filtrează. Înainte de colorarea soluției este diluată cu o cantitate egală de soluție apoasă 2% de alaun de potasiu, și 2 - 3, cristalul de timol.
Durata colorării este de 5 - 7 minute. Urmată de spălare în apă distilată, și diferențierea în etanol clorhidric, clătire în apă distilată, deshidratare, albire și concluzie.
Rezultat: nucleu violet închis.
Colorarea citoplasmă celulelor are loc prin baze de proteine și coloranți acizi de legare. In grupa difuze (acizi) includ coloranți carboxilici și acizii sulfonici, nitro, azo și altele. Practica histologică folosit întotdeauna eozină, acidul picric, portocaliu G, Acid fucsin, Congo roșu (kongorot), azocarmine, eritrozină. Din ce în ce utilizează soluții apoase 1% din acești coloranți, dar pot fi aplicate și soluție 1% alcool. Durata de vopsire variază de la 5 secunde la 3-5 minute, în funcție de varietatea și culoarea seriei. În cazul în care medicamentul este revopsit, cerneala excedentar se îndepărtează cu ușurință prin clătire în apă distilată și apoi deshidratat Vania-medicament sau tăiate în alcooli.