Criteriul pentru a judeca cu privire la persistența virusului virulent în turmă este Xia titruri de anticorpi în serul sângelui păsărilor. Studiul a fost realizat doar cu seruri obținute din Paired aceeași pasăre. Prima probă este luată înainte de vaccinare (sau la începutul bolii), a doua - cu 15-20-a zi, următoarea dată pe lună. HAI Aplicată, TTL, ELISA.
Diagnosticul diferențial. NB ar trebui să fie diferențiate de la UPS, gripa, PMA-2, ILT, micoplasmoză și colibaciloză păsări. Pentru diagnosticul de laborator al gripei aviare, IB și NB utilizând producția de instrumente de diagnosticare biofabrichnogo. Diferentierea virusurilor gripale A, există 14 subtipuri, iar paramixovirusuri, inclusiv 9 serotipuri, este posibilă numai în laborator.
Diagnosticul de laborator al pestei porcine clasice la ea ??
Clasice ?? pestă porcină s (CSF) - boală infecțioasă foarte contagioasă caracterizată prin febră, leziuni ale sistemelor formatoare de sânge din sânge și, pneumonia lobară si inflamatia lobară-pseudomem a intestinului gros. Grupa A a datelor OIE.
Pentru CSFV sensibile porci domestici Sun ?? rase ex și grupe de vârstă, în special rasă pură și mistreți.
Boala este înregistrată în principal în Asia, America Centrală și de Sud, precum și în unele părți ale Europei și Africa.
virusul pestei porcine ?? i aparține familiei Flaviviridae, genul pestivirus. natură virală CSF stabilită în 1908 ᴦ. Schweinitz și Dorsey.
variabilitate antigenică a CSFV nu a fost dovedită. Virulența distinge A-, B- și virusul C -Option. Grupa A este format din tulpini virulente epizootice care cauzează de porc ?? s ?? varstele in intregime ex boala prost scurgeri. virusurile subgrupului B virulente numai pentru porci și în timp ce circulă în turmă cauzează ciuma atipice sau cronice. PodgruppaS - piese slabovirulentny americane. 331. Este stabilită o relație unilaterală între CSFV și virusul diareei bovine: anticorpi la virusul diareei bovine neutralizeaza CSFV, dar anticorpii pentru CSFV nu neutralizează diareea virusului. porc ser ?? s convalescenta detecta BHA, PA și KSA.
Diagnosticul se bazeaza pe date epizootică, simptomele bolii, precum și modificările patologice ale rezultatelor de laborator. Epizootologicheskie și date patologice depinde de susceptibilitatea de porc ?? s, virulența tulpinii și complexul de măsuri de prevenire a LCR.
În cazul în care tulpina focar de virus virulent, numărul de porci ?? nu e imun, boala este foarte contagioasă mortalitate, ridicată, hipertermie, leziuni cutanate hemoragice, semne ale sindromului șocului și organele sistemului nervos central. Să acorde o atenție pronunțată hemoragic diateză în diferite organe, ganglionii limfatici marmorat, atacuri de cord a stat ?? ezenki, hemoragiile in rinichi pe un fundal de anemie, gastroenterita-catarală hemoragic, encefalomielita limfocitară. În acest caz, vaccinarea frecventă a porcilor împotriva porcine ?? creează un fond imunitar care influențează simptomele bolii și natura modificărilor patologice. In timpul cronic măsurabilă caracteristic niyami sunt placa diphtheritic focale (muguri), eczeme maro, pleurită fibrinoasă și pericardita, amigdale de necroză. Boala cronică apare adesea pe fundalul altor infecții. Diagnosticul corect trebuie sa fie efectuate numai prin teste de laborator.
metode rapide pentru detectarea virusului CSF. Recomandat pentru diferențierea pestivirusurilor folosind o sondă de ADN pentru CSFV. Ca o probă de hibridizare folosind ADN complementar (32 P marcat) proteină la o porțiune a genei P125 homopolar. Pentru detectarea rapidă a CSFV-D în țesuturi prin PCR din probele de țesut animal de casă izolat fenolice Preparatele de ARN a fost transcris invers și amplificat prin PCR. Utilizați „imbricate“ primeri permit amplificarea diferitelor CSFV izolate. PCR are o sensibilitate și specificitate ridicată și permite să se diferențieze diferite pestivirusuri. PCR varianta propusă pentru detectarea CSFV folosind 4 primeri pentru amplificarea fragmentelor de gene ale proteinei
E-1. Sensibilitatea metodei este de 10 TCD50.
Virusul ix ?? izolate. Pentru eliberarea de virus ?? Eniya ia probe de sânge, bucăți șezut ?? ezenki, amigdale, ganglionii limfatici, oase piept, rinichi și plămâni de la 2-3 animale în primele 2 ore după moartea sau sacrificarea a pacienților în stare de atonalitate. Materialul este preluat în fiole sterile, închise cu dopuri de cauciuc, flacoane tratate la exterior cu 5% cloramina p-rom sau limpezit cu 20% înălbitor p-rom, învelite cu tifon îmbibat cu dezinfectant p-set, și plasat într-o pungă de plastic. Luat patmaterial plasat într-un termos cu gheață, sigilate și trimise prin curier la laborator cu documentul de însoțire. In laborator fiecare probă a fost preparată dintr-o suspensie 20% în 0,85% soluție de p-pe NaCl, care de trei ori congelate și decongelate, centrifugate 3-4 mii. 20-30 min-1 min. Supernatantul a fost tratat cu antibiotice 1 oră la 37 ° C și utilizat pentru a izolat ?? Eniya virus.
?? ix izolat virusul în culturi celulare. Utilizați o cultură continuă a PK-15 celule crescute pe plăci de sticlă. Pentru fiecare material eșantion luând cel puțin 8 tuburi în care pipeteaza 0,4 ml de material de testat. Virusul este adsorbit timp de 2 ore 137 ° C, apoi a fost îndepărtat, celulele au fost spălate și mediul se toarnă 2 ml de mediu proaspăt cu 2% corpuri de ser ?? ENKA. Celula de control al calității culturii este lăsat neîncărcat 10 tuburi. Incubeaza 24-96 ore. Cultura CSFV in celulele RK-15 nu produce, în legătură cu această indicație este efectuată de IF directă. După 24-96 h după inoculare, plăcile cu un monostrat de celule eliminate din tuburi, uscate în aer și fixe 10 min în rece acetonă (4 ° C), se usucă în aer și le-a pus pe o picătură de celule cu FITC-lg CSFV aplicată diluția de lucru pe lamele de sticlă. Formulările păstrate într-o cameră umedă timp de 30 min la 37 ° C, apoi se spală într-un recipient cu FSB 0,01 M la pH 7.2-7.5 timp de 30-40 minute la întuneric, se clătește cu apă distilată, se usucă în aer și încorporat în glicerol tamponat (9 părți glicerină și 1 parte 0,01M FSB, pH 7,5). În acest scop, glet glisant aplicat minuțioase celule de droguri glicerol tamponat lu sunt plasate în jos și se toarnă în topitură margine lennym parafina Privitori LUMINO ?? estsentnym sub microscop.
La preparatele infectate tratate cu Ig-FITC, virusul AG este detectat printr-un ?? galben strălucitor enomu difuz strălucire a citoplasmei celulelor afectate, aranjate în grupuri, care sunt numite mikroblyashkami fluorescente. După 24-48 ore, în celulele de cult D-RC-15 a fost observat aparitia mikroblyashek. În absența acestora, în primul pasaj este realizat 2 și trecerea a 3-a materialului de test urmat IF 24-96 ore.
Afișaj și cercetare virusa.Gistologicheskie de identificare. Este efectuat pentru a detecta țesuturi specifice-Neny neuronale măsurabile. De la porc mort sau sacrificat ?? s ia bucăți de emisfere cerebrale, cerebel, Amon, coarnele ale măduvei spinării, în diferite zone. Preparatele histologice au fost colorate cu hematoxilină-eozină. In majoritatea cazurilor (70-93%) în SNC a fost observat și encefalomielita nesupurative ob limfocitare, caracterizată prin infiltrare limfocitară perivascular, proliferarea focală a celulelor microgliale (noduli gliale) și celule distrofie gangliozngh. felii B preparate din lim-fouzlov, mușchiului cardiac și hepatic, poate detecta prezenta organismelor acidofile vnut-riyadernyh ?? incluziuni ec, oarecum mai mici decât nucleoli. În nodul limfatic acestea sunt pentru 6-12 zile de la infectare.
CSFV are un gematotropizmom pronunțat cu privire la măduva osoasă care conține numărul de conductoare mai mare de celule blastice decât ganglionii limfatici și se așeză ?? ezenka. Din acest motiv, măduva osoasă este afectat în primul rând; Celulele myelopoietic și eritropoietice inhibat proliferează și celule mari, cu citoplasmă bazofile. În același timp, găsi o imagine a corpurilor lymphopoietic adanci si distrofie citoliza.
Dacă suspectați o plagă pentru diagnostic mai grav animalele bolnave sunt sacrificate și examinate frotiuri din măduva osoasă a pieptului.
Biotestare. De gestionarea cu succes a bolilor infecțioase sunt luați purcei cu vârsta de 2-3 luni, cu o greutate de 20-30 kᴦ. Deoarece materialul este de 10% suspensie preparată din organe (sat ?? ezenki, noduli limfatici, măduva osoasă) sau sânge de la animale moarte. Suspensia a fost tratată cu antibiotice, se menține timp de cel puțin 4 ore la temperatura de 4 ° C, centrifugat și lichidul nuzhnosadochnuyu utilizat pentru a infecta animalele. Trei rosyatam se administrează subcutanat 1 ml de sânge sau 2 ml de organe de suspensie. Două animale au fost inoculate cu materialul de testat nu le conține separat pentru control. Două porc acolo imun la CSFV, se administrează materialul de testat la aceleași doze cu diagnosticul diferențial obiectiv-Hoc împotriva pestei porcine africane. Pentru animalele Sun ?? EMI au fost observate timp de 21 de zile și ariciul zi măsoară temperatura corpului.
Diagnosticul este considerat pozitiv dacă 2 din 3 purcei bolnavi neimuni, pro-manifestând simptome ale bolii, și mor, în timp ce 2 au ramas sanatosi sau imun minor prezintă și pe termen scurt (1-4 zile), semne de intensitate slabă a bolii (febra nu peste 41 ° C). Trebuie amintit că, în absența reacției la animale-la imputarea sensibile sau în cazul severitate insuficientă nu poate fi exclusă cu certitudine prezența virusului în materialul de testat. Negativ-ing rezultatul infecției trebuie să fie rezultatul unei cantități prea mici de un virus sau o virulenta slabă a acestuia din urmă. Din acest motiv, pasul următor se repetă, după 3-6 săptămâni după inocularea materialului de testat, infecție (reinfectare) cobaiul ?? s la data aceasta cu un virus cunoscut cunoscut virulență. Absența-Corolar animalele de reacție la această contaminare indică achiziționarea Immuno-theta, ca urmare a primei inoculare (perebolevaniya asimptomatice) și indirect indică prezența virusului în materialul de testat. Concomitent cu al doilea eșantion inoculat cu doi porci susceptibili suplimentare (de control) viruși care utilizează-băi pentru reinfectare.
Uneori, proba biologică nu este justificată sau să dea rezultate vagi atunci când ?? del enii tulpini de virus care cauzeaza boli usoare. Aceste tulpini au inoculat porci provoca boli cronice. Problema este complicată de faptul că tulpinile virulente cu slabe nu pot avea proprietăți de imunizare, dar nu dorește să creeze diagnostic precis prin OAPC utilizând o tulpină Viru-valenta provocare suplimentară (reinfectare). In diagnosticul bolilor cauzate de aceste tulpini pot ponuzhnobitsya animale tinere, și pasajele suplimentare pentru a spori virulenta.
Evaluarea scara propusă de virulență a tulpinilor de câmp a CSFV:
- slabovirulentnye (numai patogen pentru purcei sugari) nu tulpinile de imunizare. Purceii sugari bolnav în primele zile de viață și moartea lor mare purcei înțărcați (12-15 kg) reacþioneazã numai determinat ?? zile ennye crește temperatura corpului, nu dobândi imunitate;
- slabovirulentnye (patogen pentru animalele tinere) tulpini imunizante. Animalele cântărind 15-20 kg dezvoltă o boală cronică, scrofite cântărind 35 kg creștere pară ruyut temperaturii corpului, care a durat timp de câteva zile. La deschiderea detectăm viață hemoragiile mici petesiale. Animalele dobândesc imunitate;
- extrem de tulpini virulente determina animale cu o greutate de 30 kg, boală acută rata de mortalitate de 40% sau mai mult. La modificări hemoragice caracteristice de autopsie.
modulare de testare a activității fagocitare a macrofagelor. Funcția Deficienta fagocitară conduce la perturbarea reacțiilor imune locale cu dezvoltarea proceselor inflamatorii-TION pe membranele mucoase. Când CSF are loc localizarea funcțiilor leucocitelor fagocitare în reproducerea unităților de vaccin. LK-VNIVViM redus procentul și indicele fagocitară de neutrofile și macrofage, și în reproducerea PC virus virulent. Chi-Myn creșteri procentuale și a indicelui fagocitozei neutrofilelor și reduse care macrofagelor. Când CSF in vivo și in activitatea fagocitară vitro a leucocitelor din sânge scurt timp (până la 4 zile) scade în timpul infecției și tulpina de vaccin creste in macrofage prin infecție cu o tulpină virulentă de CSFV. Montat în infitsi celule Rowan-tinta efectul citopatic exprimat în activitatea de modulare a fagocitelor CSF de macrofage tare Cu porcin utilizate în diagnostic.
a se vedea, de asemenea,
RN. Diagnosticul infecției în trecut, a pus, de obicei, la un pH cuprins în cultura de adeziv curent determinarea titrurilor VNA în seruri de convalescenți. În acest scop, într-o doză de virus în picioare (100-1000 TCD 50) și două diluții ale serului de testare care au fost anterior. [Citește mai mult].
Diagnosticul retrospectiv pentru a determina tipul și versiunea cântarele, provocând ultima boală a animalelor, bazată pe identificarea AT în RPSK, PDR și RRID, rata de seroprotecție reacție FIND la șoarecii și pH-ul în cultura celulară. Pentru detectarea fiabilă a AT și de a determina tipurile lor. [Citește mai mult].
În prezent, există trei metode de detectare-zheniya specifice AT pentru CSFV în LCR diagnosticul de laborator: neutralizarea reacției fluorescente mikroblya-nis (RNFB) reacție indirectă IF și varianta ELISA indirectă. Cele mai eficiente metode. [Citește mai mult].