Invenția este destinată să producă căldură enterotoxinice labilă (LT-enterotoxină) și Enterobacter agglomerans când producția de vaccin toxoid. Tulpina de Enterobacter agglomerans N 5356 izolat din fecale ale pacientului cu picioarele fungoides, depozitată în colecția Institutului de Cercetare de Stat de Standardizare și Controlul Preparate Medicale Biologice. L.A.Tarasevicha și are un număr de înregistrare 257. Tulpina de Enterobacter agglomerans GISCO N 257 se caracterizează prin următoarele caracteristici. Când cultivate pe medii nutritive obișnuite la tulpina 37 ° C pe suprafața mediului de cultură crește odată cu formarea de colonii caracteristice izolate cu o tentă gălbuie. Când cultivate în Hottinger bulion (pH 7,2) la 37 ° C timp de 24 ore cauzează turbiditate uniformă pentru a precipita. Administrarea siubplantară la șoareci cântărind 15-16 g, 0,05 ml centrifugatul de 20 de ore de cultură bulion provoacă umflarea piciorului peste 95 mg. Administrarea intranazală de 0,05 mg de 20 de ore de cultură bulion provoacă moartea a 95% dintre șoarecii masculi cântărind 15-16 g timp de 4 ore la fenomene convulsii tonice și asfixie. Administrarea intradermică de 300 Mill. Celulele microbieni de 20 de ore de cultură în bulion de piele de iepure determină necroza diametru de 30 cm. In experimentul bucla subțire intestin iepure atunci când se administrează 500 Mill. Bw 20 cultură oră bulion dă un rezultat pozitiv (V / L = 1,2). Greta la 56 ° C timp de 45 min centrifugatul 20 de ore de cultură bulion provoacă umflarea labe șoareci la 30 mg, piele de iepure fără a provoca necroza. Greta la 100 ° C cultură de 20 de ore nu produce acumularea de lichid în buclă intestinal iepure izolat de subțire (V / L = 0,3). mediu de propagare - Hottinger bulion (pH 7,2) conținând 5% eritrocite de iepure la 37 ° C timp de 24 h Caracteristici genetice: umai +, Ent +, MS +, MR + .. Rezistent la penicilină, tetraciclină, eritromicină, cloramfenicol, carbenicilina, rifampicina, oleandomicină. tulpina agglomerans Enterobacter N 257 GISCO are capacitatea ridicată produce toxine. Tabelul 1.
Invenția se referă la biotehnologie și poate fi utilizată pentru a produce căldură enterotoxina labilă (LT-enterotoxină) și toxoid agglomerans Enterobacter, in productia de vaccin.
Rezultatul tehnic este o tulpină de Enterobacter agglomerans N 5356, având o capacitate crescută produce toxine.
Tulpina de Enterobacter agglomerans GISCO N 257 se caracterizează prin următoarele caracteristici: Semnele culturale.
Când cultivate pe medii nutritive obișnuite la tulpina 37 o C pe suprafața mediului de cultură crește odată cu formarea de colonii caracteristice izolate cu o tentă gălbuie. Când cultivate în Hottinger bulion (pH 7,2) la 37 ° C, timp de 24 de ore cauzează turbiditate uniformă pentru a precipita.
Metode pentru determinarea activității LT enterotoxin-: administrarea siubplantară la șoareci cântărind 15-16 g, 0,05 ml centrifugatul de 20 de ore de cultură bulion provoacă umflarea piciorului peste 95 mg (Aksenov EV 1980 YG).
Administrarea intranazală de 0,05 mg de 20 de ore de cultură bulion provoacă moartea a 95% dintre șoarecii masculi cântărind 15-16 g timp de 4 ore la fenomene convulsii tonice și asfixia (YG Voyno Yasenetsky NK-1967).
Administrarea intradermică de celule de cultură bulion 300 Mill. Microbial 20 ore determină necroza pielii iepure 3 cm în diametru.
În experimentul bucla subțire intestin iepure atunci când se administrează 500 Mill. Bw 20 de ore de cultură în bulion dă un rezultat pozitiv (V / L = 1,2).
Greta la 56 ° C timp de 45 min, centrifugatul de 20 de ore de cultură bulion provoacă umflarea labe șoareci la 30 mg, piele de iepure fără a provoca necroza. Greta la 100 o C cultură de 20 de ore nu produce acumularea de lichid în buclă intestinal iepure izolat de subțire (V / L = 0,3).
Condițiile de depozitare a culturii după uscare la leofilnoy crescute în% IPA 0,3 (pH 7,2), inundat cu parafină lichidă sterilă la temperatura de 4 ° C.
mediu de propagare - Hottinger bulion (pH 7,2) conținând 5% eritrocite de iepure, la 37 ° C timp de 24 ore.
Caracteristici genetice: Hly +, Ent +, MS +, MR +.
Rezistent la penicilină, tetraciclină, eritromicină, cloramfenicol, carbenicilina, rifampicina, oleandomicină.
EXEMPLUL 1 0,1 ml de 1 mld. Cultură zilnică de suspensie agar în soluție salină semănat în bulion steril Hottinger (5 ml, pH 7,2) este incubat în termostat la 30 ° C timp de 20 de ore, se centrifughează la 6000 rot / min pentru 7 min. Supernatantul rezultat (centrifugat) într-un volum de 0,05ml injectat subplantar în laba posterioară stângă a șoarecilor masculi cântărind 15-16 g După 24 h, animalele sunt sacrificate prin picior glezna comun eter și amputat este cântărit pe o balanță de torsiune, tulpina de Enterobacter agglomerans centrifugatul GISCO N 257 a dat diferența dintre labele din stânga și dreapta de 95 mg, 20 de tulpini rămase capabile să producă enterotoxina LT-65-79 mg. Controale - bulion nativ Hottinger sterile (pH 7,2) și caldă la 56 ° C centrifugatul de 20 de ore de cultură în bulion de 30-35 mg, respectiv.
Rezultatele sunt prezentate în tabel.
0,1 mg 1 mld. Zilnic cultură suspensie agar într-un bulion Hottinger semănată (pH 7,2) este incubat în termostat la 30 ° C timp de 20 de ore și 500 Mill. M. R. Suspensie într-un volum de 1 ml se administrează în segmentul izolat buclele de intestin subțire de iepure. După 16 ore, animalele au fost sacrificate și embolie aer raportul volumului de fluid la lungimea segmentului (V / L) calculat. In acest 20 de ore de cultură în bulion de Enterobacter agglomerans tulpina GISCO 257 N a fost capabilă să dea o acumulare de fluid într-o cantitate și rata V / mare L a fost de 1,2. Cele 20 de tulpini rămase capabile să producă enterotoxine LT-, indicator V / L a variat de la 0.9-1.0. Atunci când se administrează bulion steril Hottinger și încălzit la 100 ° C, 20 de ore de cultură în bulion de raportul volum de lichid acumulat la lungimea segmentului a fost de 0,3 și 0,25, respectiv.
Tulpina bacteriilor Enterobacter aglomereaza GISCO N257, având un complex factor de patogenitate.