Pentru a detecta piroplasmidele, frotiurile de sânge sunt examinate de la animale, bolnave sau suspectate de boală. In caz de deces sau de sacrificare a animalelor afectate stimulate frotiurile pot fi preparate din conținutul vaselor din creier, splină, ficat, rinichi, plămâni și ganglionii limfatici afectați.
Smearurile se prepară numai din organele unor cadavre proaspete, deoarece parazii se lizează rapid, în special la temperaturi ridicate ale mediului ambiant. Atunci când este necesar, se iau măsuri pentru eliminarea bolilor infecțioase.
Folosiți sticlă bine degresată. Sângele pentru cercetare este cel mai bine luat din vasele periferice ale urechii. Locul colectării se prepară prin tăierea părului, apoi dezinfectarea și degresarea cu alcool etilic, alcool eteric. Injecția se efectuează cu un ac sau un vârf al urechii tăiat cu foarfece.
O picătură de sânge în diametru de cel mult 2-3 mm, care se extinde pe un loc de perforare, se pune pe marginea unui diapozitiv degresat și se face o frotiu. Este foarte important să pregătiți un frotiu din prima picătură de sânge, tk. conține mult mai multe eritrocite afectate de pyroplasmide. Următorul frotiu trebuie preparat dintr-o picătură nouă de sânge după îndepărtarea cheagului de la locul injectării.
Producția de frotiuri trebuie efectuată în perioada de creștere a temperaturii corporale a animalelor și apariția primelor semne clinice, înainte de introducerea anumitor medicamente. Smeile sunt uscate în aer timp de 10-20 de minute, evitând expunerea la lumina directă a soarelui și limitând accesul la muște. Apoi semnează cu un ac sau cu un simplu creion, indicând specia și numărul animalului, data și locul luării.
Pentru fixare, utilizați alcool metilic, care este umplut cu frotiuri de sânge timp de 3-5 minute, după care sticla este îndepărtată și uscată timp de 15-20 minute.
Puteți fixa un amestec de părți egale de alcool etilic absolut și eter sau numai alcool etilic 15-20 de minute.
Un frotiu bine pregatit trebuie sa fie uniform si subtire. În frotiuri groase, celulele roșii și paraziți se găsesc cu mare dificultate.
Culoarea poate fi produsă de Romanovsky-Giemsa. Pentru prepararea soluției de colorant de lucru la 1 ml de apă distilată, se adaugă 1-3 picături de bază soluție colorantă. Soluția de lucru este cel mai bine lipită sub sticlă cu un curs. În aceste cazuri, frotiu nu lasă microparticule de vopsea insolubilă, ceea ce facilitează căutarea microscopică a formelor în formă de inel de pyroplasmide și diagnostic diferențial. Durata de colorare a frotiurilor este de 30-40 de minute. La sfârșitul acestei perioade, vopseaua este clătită, frotiul spălat cu apă distilată, uscat și examinat cu ajutorul unui microscop. Calitatea culorii depinde de pH-ul mediului (mediul optim este de 6,8-7,0). Picturile bine pictate au o culoare roz cu o nuanță violetă. Hematiile sunt colorate citoplasmă roz de limfocite - în albastru, miezul lor - violet închis, protoplasmei parazit - în albastru, bucăți de cromatinei - în roșu închis sau roșu.
Explorați frotiurile sub microscop cu sistem de imersiune.
Diagnosticul eimeriozelor și izosporelor
Pentru a identifica prezența oochisturilor și izosporelor din fecale, conținutul intestinal și alte materiale, se utilizează mai multe metode.
Metoda frotiului nativ este cea mai simplă și ușor de executat în orice condiții, nu necesită echipamente speciale și reactivi pentru detectarea oochisturilor.
Pe o sticlă curățată curată, se aplică 2-4 picături de apă pură (apă distilată, de la robinet) cu o pipetă, se adaugă o cantitate mică de fecale și se amestecă. Frotiul este acoperit cu o alunecare a capacului și examinat sub un obiectiv mic (x 8,10) și mediu (x 40). În loc de fecale, puteți studia în același mod și resturile membranelor intestinale.
Cu un grad mic de infecție, este dificil să se detecteze oochistul în acest fel, dar cu o infecție ridicată, acesta face posibilă determinarea intensității infestării relativ fiabil.
Rezultatele mai precise sunt obținute prin utilizarea diferitelor soluții care au o greutate specifică mare. În astfel de soluții, oochisturile după un timp plutesc la suprafață.
Cele mai frecvente metode de flotație sunt: metode Fyulleborna, Darling, ShCherbovicha și Kotel'nikova Hrenova etc .. (vezi Gelmintoovoskopiya.)
Studiul eimeriidelor în organele afectate. Pentru a studia prezența eimeriidelor, bucățile de intestin mic și gros sunt selectate dintre animale, iepuri, în plus, ficatul, iar gâștele au și rinichi. Materialul este plasat în lichidul de fixare - soluție de formalină 10% sau 96% alcool etilic. Cel mai bine este să utilizați formalină neutră, pentru prepararea căreia se utilizează pulbere de carbonat de calciu (cretă), 10% din acesta se adaugă la volumul de formalină și se lasă să se depună timp de 5-6 zile, apoi se depozitează cu sediment.
Fixarea materialului se face cel mai bine în sticlă. În timpul iernii, este mai bine să utilizați alcoolul etilic ca lichid de fixare. Aceasta, indiferent de perioada din an, se recomandă înlocuirea după 24 de ore. În cazul în care bucățile de organe din diferite animale sunt plasate într-un borcan, li se recomandă să împachetați pungi de tifon. În interiorul borcanelor cu material de fixare, este plasată o etichetă de hârtie pe care se indică specia animalului, numărul și data colectării cu un creion de grafit.
Secțiunile histologice preparate sunt cel mai bine colorate cu hematoxilină-eozină.
Dacă este necesar, oochisturile eymeriid conservare pentru o lungă perioadă de timp, folosind o soluție de formalină 5%, 0,1% soluție de bicromat de potasiu, Barbagallo lichid (o soluție de formalină 3% pentru o soluție izotonică de clorură de sodiu).
Pentru a izola toxoplasmul, se utilizează organe ale animalelor căzute: creier, ganglioni limfatici, ficat, splină, plămâni, placentă și organe ale unui făt avorat. La început sunt preparate pete de pe organele afectate, care sunt fixate cu alcool metilic (etil) și colorate de Romanovsky-Giemsa. Selectarea organelor și pregătirea frotiurilor se face nu mai târziu de 2-3 ore de la sacrificare sau decesul animalelor.
În acest fel, nu este întotdeauna posibilă izolarea toxoplasmei.
O modalitate mai eficientă este de a plasa o biotestă pe șoareci albi.
Pentru a face acest lucru, materialul selectat din organele interne este triturat cu o cantitate mică de soluție izotonică de clorură de sodiu și suspensia rezultată este administrată la 3-5 șoareci albi intraperitoneal cu 0,5 ml. În cazuri pozitive, în ziua a 5-7-a se dezvoltă o boală în care se acumulează un exudat în cavitatea abdominală care conține un număr mare de toxoplasme. Când biotestare negativ și pentru acumularea Toxoplasma 3-5 poate fi realizată „pasaje oarbe“ prin introducerea unei suspensii de creier de la șoareci infectați anterior soareci alb nou lot de șoareci.
Instrucțiunile metodice pentru testele de laborator pentru toxoplasmoza animalelor, aprobate la 21.01.84, recomandă metoda digestiei artificiale în sucul gastric pentru a îmbogăți materialul cu chisturi. Patmaterial (ganglionii limfatici, medulla fetus avortat) măcinat carne tocată 50g este plasat într-un balon de 1 litru și se toarnă în 10 volume de suc gastric artificial. Balonul a fost plasat într-un termostat la 37 ° C timp de 1,5 ore. Amestecul rezultat a fost filtrat prin tifon și filtratul centrifugat la două mii. Vol. / Min. timp de 15 minute. După îndepărtarea supernatantului, precipitatul a fost resuspendat în volum dublu de soluție izotonică suplimentat cu antibiotice (penicilină, streptomicină și suspensie 1 th. ED 1 litru). O suspensie într-o doză de 0,3 ml este administrată intraperitoneal la 3-5 șoareci albi.
Pentru detectarea Toxoplasma prepara frotiuri din conținutul cavității abdominale sau frotiuri dintr-un creier, fixă, și apoi colorate în conformitate cu Romanovsky-Gimza.
Prezența agentului patogen la animal poate fi confirmată prin utilizarea RSK (RDSK), care a pus în conformitate cu „Instrucțiunea privind Aplicarea provizorie a antigenului toxoplasmă Kaz.NIVI și Zoologie Institutul de Kaz.SSR în fixarea complementului RAC (RDSK) pentru diagnosticul serologic al toxoplasmozei și transportul toxoplasmic la animale ".
Pentru detectare, sarcocistul este examinat la oile din partea gâtului a esofagului, mușchii scheletici. Găsiți macrocysts de dimensiunea unui mei și mai mult.
La porci, ele pot fi găsite în mușchii diafragmei, intercostal și altele. Sarcocyst eliberat de țesutul înconjurător pe o lamă de microscop distruge 2-3 picături de soluție izotonică de clorură de sodiu, și apoi o picătură de mikroskopiruyut suspensie la un microscop cu condensator de mărire medie cu coborâtă. În cazuri pozitive, se găsesc merozoiți în formă de banană (în formă de seceră).
Detectarea microcystelor se efectuează prin examinarea unor felii mari de cereale din mușchii esofagului, diafragmei, inimii, scheletului. Secțiunile sunt examinate sub formă de tăiere prin comprimare sub o mărire mică a microscopului. Ele pot fi pictate în conformitate cu Romanovsky-Giemsa, gentsianviolet, albastru de metilen, etc.
Sarcocitele pot fi, de asemenea, detectate în examinarea histologică a țesuturilor afectate. Piesele selectate de țesut sunt fixate într-o soluție de formalină neutră de 10%. Cuturile Histos sunt preparate prin metode convenționale și colorate cu hematoxilină-eozină.
Trichomonas Izolarea produse prin microscopie și cultură studiilor materiale patologice (de expirare și spălările de la organele genitale, lichid amniotic, placenta din pilitură, abomasal continutul avortat fat, gonade paranazale secrete, sperma).
Pentru detectarea Trichomonas este aplicată materialului patologic diapozitiv mobil sub forma unui frotiu gros sau strivite picătură și să facă mikroskopiruyut inițial la o, apoi o creștere medie mică a câmpului vizual la microscop de microscop umbrită. Pătarea poate fi colorat cu Romanovsky-Giemsa cu pre-fixare în metanol.
Culturile materialului investigat sunt produse pe medii nutritive speciale (mediu Petrovsky) într-o cantitate de 0,3-0,5 ml din sedimentul de probă. Materialul este plasat într-un termostat la 37 ° C și examinat în zilele 3, 5, 7 și 10. După 24-46 de ore, poate exista o creștere a trichomonazelor.
Metodele de mai sus sunt utilizate pentru a izola trichomonadele în leziunile organelor genitale la bovine.
La porci, păsările Trichomonas trăiesc în intestine și în alte organe. Pentru a izola paraziți, se utilizează zgârieturi din organele afectate și examinate cu un frotiu nativ.
Există dovezi că aceste Trichomonas cresc, de asemenea, bine pe mediile de nutriție artificială.
Separarea balantidiului se efectuează prin examinarea fecalelor proaspăt izolate sau prin rectul animalului. Materialul trebuie examinat în cel mult 2-3 ore de la luare. Corpurile de porc pentru prezența balantidiului sunt examinate în 5-6 ore de la moartea animalului. Ulterior, balantidiul nu poate fi detectat datorită lizării acestuia. Conform unor date (AI Fedorov, 1980), cadavrele ar trebui să fie examinate pentru detectarea balantidiilor în 1,5-2 ore de la sacrificarea sau decesul purceilor.
Examinarea microscopică a materiilor fecale este cel mai bine cheltuite în mod direct la fermă, folosind metoda frotiului nativ. Pentru a face acest lucru, să ia o cantitate mică de fecale a fost plasată pe o lamă de sticlă și se amestecă uniform cu o cantitate egală de soluție caldă izotonă sau apă de clorură de sodiu (temperatură care nu depășește 37,0 ° C), distilat, acoperit cu o lamelă de acoperire, și vizualizarea sub frotiu microscop mărire mică. În cazurile pozitive detectate forme și chisturi vegetativă Balantidium. Sub microscop, mare, în mișcare rapidă în mod clar vizibile cu ajutorul paraziților cilia.
Dacă este necesar, examinarea histologică, selectați bucăți de pereți ai intestinului gros și subțire, stomacului, ganglionilor limfatici, organelor parenchimale și fixați într-o soluție de formalină de 10%. Cuturi Histos colorate cu hematoxilină-eozină.