Utilizare: biotehnologie, industria alimentară și medicală. REZUMATUL INVENȚIEI: 0,6-1,4% soluție de amoniac este adăugată la fracțiunea de proteină lichefiată a oului. Izolarea lizozimul se realizează prin sorbție, realizată secvențial trece prin sorbent silohrom de brand SG-CX, pornind de pre-echilibrată cu solvent, care este utilizat ca soluție de 0,6-1,4% concentrație de amoniac. soluție de proteină și din nou cu solvent, plecând urmat de eluare cu un amestec de lizozim soluție 0.8-2,0% de acid acetic cu clorură de sodiu 0,1-0,3 M, și apoi soluția lizozimul este concentrată pe fibre tubulare. 70 L,
(5) 5C12N9 / 36. A 23 J 1/08
Comitetul Federația rusă privind brevetele și tovariymznakam (21) 5000076/13 (22) 01.08.91 (46) 15,02.93. Bull. N. (71) Institutul Central de Formare Profesională a Medicilor (72) VN Morozov, SA Samarin. E.G.Scherbakova, T.P.Zhuravleva, S.S.Zhukov, V.P.Chuprunov și A V.Kuchmy (73) Institutul Central de Advanced Medical (56) Brevetul francez M 256972, cl. C 12 N
9/36, publicat 1985.
M 7123438, cl. C 12 N 9/36, 1977, (54) METODA DE OBȚINERE A LYSOCIMULUI
Invenția se referă la biotehnologie, industria alimentară și industria medicală. în special la tehnologia de obținere a lizozimei din proteina ouălor de pui. Lizozimul este utilizat ca produs medicamentos ca aditiv alimentar și în industria laptelui pentru îmbogățirea produselor de protecție din nutriția copiilor și a celor terapeutice.
Scopul invenției este acela de a simplifica procesul.
„CX-CALL“, pre-echilibrată pornind de solvent care este utilizat ca 0,6-1,4 soluția de amoniac-D-lea, soluția de proteină și începe din nou solventul a urmat PLN yutsiey amestec lizozima soluție 0,8-2,07-rezistența acid acetic cu clorură de sodiu 0,1-0,3 M, după care soluția de lizozimă este concentrată pe fibre goale. urmată de ligarea lizozimului cu un amestec
0,8 - 2,0% soluție de acid acetic cu
0,1-0,3 M clorură de sodiu, după care soluția de lizozimă este supusă concentrației și diafiltrației pe fibrele goale.
Pentru prima dată pentru izolarea lizozimului ca sorbent, silicagel macroporos cu silochrom "CX-ZV"
GOST 10973 sau TU 38,101832-80, care este un schimbător de cationi slab bazat pe sticlă bursilicată. Silohrom „CX3B“ are o permeabilitate ridicată, nu compactat, nu deformate, nu sunt supuse degradării biologice, a rezolvat problema cu sterilizarea chimică, L are în prezent un producător intern producătoare de adsorbant în cantitățile cerute în tehnichesko.l decizia propusă a lucrat condiții de sorbție lizozim; iar pe sorbent am folosit 0,6-1,4%
Proteina din ouă de pui este lichefiată cu un omogenizator de flux și amestecată cu soluție de amoniac 0,6-1,4 în raport de 1: 5. Ingerarea gălbenușului în proteină este inacceptabilă, chiar și în cantități mici, deoarece aceasta duce la deteriorarea sorbentului și la scăderea activității lizozimului. Soluția proteică rezultată este filtrată prin filtre grosiere (sau tifon, pliate în mai multe straturi).
Pentru a izola lizozimul, se utilizează o coloană cromatografică a unei probe industriale; diametru 150 mm, înălțime 720 mm, capacitate 12,8 litri. Pentru a alimenta coloana folosind un soluții de pompă peristaltică NSR-15 M, de urmărire randament fracțiunea de proteină este realizată cu ajutorul unui detector de flux UV „Volcord $ ll“ LKB fabricate (Suedia), ajustat la lungimea luminii transmise de 280 nm. Coloana umplută cu silochrom sorbent "CX-3B" este echilibrată cu solventul de pornire. care este folosit ca soluție de amoniac 0,6-1,4. Apoi, soluția de proteină rezultată este pompată într-o coloană de o pompă.
După împachetarea pe sorbent, clătiți cu același solvent de pornire până când vârful proteinelor nesorbante ("breakthrough") este complet eliberat. Pentru eluarea lizozimului din sorbent prin coloană, un amestec de 0,8 ... 2,0%
55 soluție de acid acetic cu clorură de sodiu 0,1-0,3 M până la eluarea completă a lizozimei. Fracțiile de eluat care conțin lizozim sunt colectate, diafilizate și simultan concentrate pe o unitate de ultrafiltrare cu fibre goale
UPV-6, ambalate steril în flacoane și uscate prin congelare uscată. Întregul ciclu de obținere a lizozimei durează 3-4 zile, în timp ce cromatografia durează 10-14 ore.
EXEMPLUL 1 1000 de ouă de ouă de pui (30 litri) sunt lichefiate cu un omogenizator de flux și amestecate cu o soluție de amoniac 0,6% într-un raport de 1: 5. Soluția proteică rezultată este filtrată prin filtre grosiere (sau tifon pliate în mai multe straturi). Pentru izolarea lizozimului se folosește o coloană cromatografică dintr-o probă industrială: diametru
150 mm, înălțime 720 mm, capacitate de 12,8 litri. Pentru a alimenta soluțiile în coloană, o pompă peristaltică NSR-15
M1 Fracția proteică este monitorizată de detectorul de flux de ultraviolet "Volcord S11" de la LKB (Suedia). reglată la o lungime a luminii de transmisie de 280 nm. Coloana este umplută cu silochrom sorbent "CX-ZV" și echilibrată cu un solvent inițial, care utilizează o soluție de amoniac de 0,6. Soluția proteică rezultată este pompată în coloană de o pompă. După liiocyme pe sorbent, clătiți cu solventul de pornire până la ieșirea completă din coloana proteinelor neabsorbabile ("breakthrough"). Pentru eluarea lizozimului, o soluție de acid 0,8-acetic este pompată prin coloană cu clorură de sodiu 0,1 M până când lizozima este complet eluată.
Fracțiunile eluatului conținând lizozim, au fost reunite, diafiltrați și concentrate în același timp tubular unitatea de fibră ultrafiltrare OLA-6, ambalate în mod steril liofilizat și vlakony. Omogenitatea produsului obținut este confirmată prin electroforeză într-un gel de poliacrilamidă gradient. Activitatea lizozimului 9601060 EDlmg, care corespunde specificațiilor
Tehred M. Morgenthal Correctorul S. Lisina
ONG "Search Rospatent
113035, Moscova, Zh-35, Raushskaya Nab. 4/5
Producția și editura „Patent, Uzhgorod, Gagarina 101 creează proteina filtrată pornind de solvent care este utilizat ca 1,4 soluție de amoniac, coloana sorbent silohrom“ CX-poluanți „care rezultă soluția de proteină este injectată. Apoi, spălarea este efectuată începând cu același solvent, până când randamentul total de proteine in coloana nesorbirovavshihsya ( „descoperire“). Zlyutsiyu lieotsima cu adsorbantul este realizată cu un amestec de 2 (soluție Nogo de acid acetic cu 0,3 M NaCI, lizozima eluați colectat a fost concentrat și fostdesalinifiată pe podele ultrafiltrare olokonnoy. dozat și uscat prin congelare. Randamentul a fost 65,3 g de produs lisozimei a fost omogen la determinarea gelului de poliacrilamidă elektroforeeom.
Activitate lieotsima Edlmg 1000, ceea ce corespunde Tu 64-3-208-85 loroSposob diluție producătoare lizozima lizozima a fracțiunii de proteină care cuprinde ouăle, tratarea cu o soluție alcalină și recuperarea soluția rezultată a lizozimului IE. de afide și h și shiysya w în care, în scopul simplificării procesului tehnologic, deoarece soluția alcalină folosită 0,6-1,4 soluție de amoniac ny și selecția se realizează prin sorbție efectuate. șoc. Ciclul de achiziție a durat 4 zile, cu cromatografie - 14 ore.
Astfel, metoda propusă are următoarele avantaje:
5 1. Permite simplificarea procesului tehnologic: scurtarea timpului de alocare a produsului țintă de la 12 la 3-4 zile, pentru a exclude etapa multiplă, 10 pentru a stabili necesitatea utilizării containerelor mari pentru a permite izolarea lizozimului fără răcire.
2 »Utilizați sorbent intern ieftin pentru a aloca produsul țintă, 3. Reduceți zonele de lucru.
4. Vă permite să coaseți compoziția de sare în apele uzate.
20 trecere serială prin silohrom SG-CX, preechilibrată rastvroritelem de pornire, care este folosit ca o soluție de amoniac 0,6-1,4, iar soluția de proteină este din nou startovgo solvent urmată de eluare cu un amestec de 0,8-2,0 lizozima-Nogo soluţie de acid acetic la clorură de sodiu 0,1-0,3 M, după care soluția este supusă lieotsima concentrare și diafiltrare fibre tubulare.