Chimie și Tehnologie Chimică
Represorul reglează activitatea a trei promotori de fagi, dintre care doi, Pm și Pp, sunt localizați unul lângă celălalt. Transcrierea de la promotorii Rk.c și Rn merge în direcții opuse. Între punctele de plecare ale acestor promotori sunt trei site-uri de represor obligatoriu Ok. Or. și Op, (Figura 88). Regiunea Op este suprapusă cu situsul de legare a polimerazei ARN cu promotorul PPM. prin urmare, legarea represorului la Oj interferează cu legarea ARN polimerazei la Rk.m și prin aceasta suprimă transcripția. [C.145]
Miezul conține, în special, multe zeci de molecule ale polimerazei ARN dependente de ADN-ul specific virusului. Această enzimă multicomponentă mare recunoaște promotorii genelor timpurii. Promotorii sunt puternic îmbogățiți în perechi de A-T și sunt îndepărtați de la punctul de pornire al transcrierii cu aproximativ 30 bp și ARN polimeraza celulară nu este recunoscută de acești promotori. Elementele de reglementare, cum ar fi amplificatoarele genomului virusului vaccinia, nu sunt descrise. [C.307]
Cea mai simplă explicație a acestor observații este următoarea. În cazul ADN-ului monocatenar, ARN polimeraza poate folosi orice porțiune a lanțului să se lege și să înceapă transcripția. Cu toate acestea, nu are practic afinitate pentru majoritatea helixului dublu ADN nativ. Câteva puncte de plecare pe dubla helix a ADN-ului, afinitatea pentru care posedă ARN-polimeraza, sunt. aparent, secțiuni speciale cu o secvență specială de baze de purină și pirimidină. care permite polimerazei să deschidă o dublă helix de ADN. Extinderea această spirală, ARN-polimerazei poate alătura una dintre cele două catene complementare și începe să-l folosească ca un șablon pentru transcriere. Acest punct particular de pornire secvență de bază trebuie să fie astfel încât secvența în circuitul greșit în acest punct va exclude complet posibilitatea de a utiliza lanț ARN-polimerazei pentru această pornire incorectă a sintezei ARN-ului. [C.403]
După începerea transcrierii la punctul de plecare. ARN polimeraza continuă să progreseze [c.139]
Rezultate similare pot fi obținute în experimente folosind exonuclează. Această enzimă acționează asupra porțiunii terminale a ADN și o degradează ulterior. Dacă o proteină este legată de ADN. atunci în eventualitatea unei coliziuni cu aceasta, acțiunea nucleasei încetează. În acest caz, este de asemenea posibil să se determine limitele promotorului, adică punctele situate pe fiecare parte a acestuia, dincolo de care exonucleaza nu poate avansa. În acest fel. Din nou, sa confirmat că secvența care se leagă la polimeraza ARN este localizată la aproximativ 44 bp. la stânga punctului de plecare al transcrierii. [C.143]
Colectiv, aceste rezultate indică faptul că ARN polimerazei se leaga si cu porțiunea asimetrici ADN de aproximativ 44-50 n. N. dacă sunt numărate din punctul de pornire în amonte de transcripție și aproximativ 20 p. n-în cursul transcrierii. Ultimele 25-30 bp în situsul de legare, localizat în amonte de transcripție, interacționează mai puțin cu enzima. Această regiune este asociată cu o enzimă sunt suficient de bine pentru a fi protejate atunci când o prelucrare moale endo- sau exonucleazele, dar nu poate rezista la condițiile de procesare mai aspre folosite pentru a obține fragmente întregi legate de enzimă porție. Aceste date sunt în concordanță cu un model în care există un singur situs de legare pentru ARN polimerază, în care (așa cum se va vedea) unele puncte de contact sunt mai importante. decât altele. [C.143]
Principalul element al promotorului. locul de legare a ARN polimerazei, pe care îl ocupă înainte de începerea sintezei ARN-ului. Compoziția promotor poate include, de asemenea, situsuri de legare a regulatoarelor de proteine. Mărimea situsului de legare RNA-palImerase corespunde lungimii sale și este de aproximativ 70 bp. Acest sit este situat relativ la punctul de plecare asimetric în cursul transcrierii, limita fiind de 20 p. N. de la punctul de plecare. și împotriva turnului - aproximativ 50 bp. (pH 85). [C.140]
Punctul de plecare al transcrierii este la diferiți promotori pentru 6-9 bp. din secvența Pribnov (Fig.85). ARN-ul nucleotidă inițial este cel mai adesea dictată de purinele matricea A sau preferință Q., cu toate acestea, nu este absolut, și există mai mulți promotori care transcrieri încep cu C sau U, în ciuda prezenței la o distanță de una sau două nucleotide de potențial purine începe. La unii promotori, punctul de plecare nu este strict fixat, inițierea are loc cu două sau trei nucleotide vecine ale șablonului. [C.141]
Operatorul de operon de lactoză este situat imediat în spatele punctului de plecare al transcrierii. Pentru o lungă perioadă de timp sa crezut că adăugarea unui represor de lactoză la prodrog interferează steric cu atașarea ARN polimerazei. Cu toate acestea, s-au obținut recent dovezi că polimeraza represor și ARN poate fi localizată pe partea promotorului lateral. Prin urmare, trebuie să ne gândim la mecanisme de reprimare mai sofisticate. inclusiv contacte specifice ale represorului cu ARN polimerază. În operonul de lactoză, există doi pseudo-operatori similari în secvența de nucleotide cu operatorul, dar care posedă [c.150]
Punctele de plecare ale transcrierii promotorilor Pc și Pv0 sunt la o distanță de 147 bp. Prin reprimarea Pc, proteina AgA este legată de operatorul araOi, suprapusă cu situsul de legare a polimerazei ARN. Fiind în starea activatorului. Proteina AgA este legată de situl ara. direct adiacent la locul de legare a ARN-polimerazei cu promotorul. Se poate considera că activarea apare datorită contactului cu ARN polimeraza. [C.152]
Sinteza transcrierilor primari. Inițierea ambelor clase de sinteză transcrieri primare are loc în porțiuni adiacente ale genomului - într-o zonă care este saturată cu elementele de reglementare transcriere și include, de asemenea op situs de replicare ADN-ului (figura 158.). Ambele clase de transcrieri sunt nu numai strict punct fix de pornire 5 molecule de ARNm, astfel terminali din cadrul fiecărei clase difera oarecum în lungime (de exemplu microheterogenitate deosebit de puternic exprimate la sfarsitul transcrieri). Cu toate acestea, se poate spune că promotorul ARNm timpuriu are [c.300]
Toate aceste elemente regulatoare permit ARN gazdă polimerazei II pentru punerea în aplicare eficientă a transcripției genelor timpurii la scurt timp dupa ADN-ul virusului intră în nucleul celulei. Ca rezultat al prelucrării anterioare a transcrieri (a se vedea. P. 302) sunt formate din ARNm pentru proteinele timpurii, atunci aceste proteine înșiși. Unul dintre ele - antigenul T - joacă un rol central în reorganizarea ulterioară a transcripției genomului viral. Aceasta provoacă o serie de efecte. În primul rând, interacționează cu regiuni ale ADN-ului viral de legare a antigenului T (cu cea mai slabă și mai puternică porțiune cu pământ] 11 cm. Fig. 158). Ca rezultat, transcripția genelor timpurii este inhibată. inclusiv gena care codifică antigenul T, astfel. Anticorpul T prezintă aici proprietățile represorului. a cărei sinteză este supusă unei reglementări autogene transcripționale. Cu toate acestea, transcrierea genelor timpurii într-o etapă târzie nu se oprește complet. Continuă, deși cu mult. eficiență mai mică, dar punctul de start al transcripției este deplasat în mod considerabil, astfel încât elementul TATA este acum în secvența de transcris (Fig. 158). Mecanismul care asigură transcrierea târzie a regiunii timpurii de la un nou punct de pornire nu este descifrat. [C.301]
Elementele de promotor ale provirusului sunt situate în regiunea u3 în acest fel. posibilitate de transcriere provirus apare după apariția zonelor din față a ADN-ului viral genomului, t. e. după apariția LTR. Aproximativ 25 p. Și. la punctul de start al transcripției (pana la L) are un element caracteristic din revendicarea 75. TATA I.- CAAT bușonului și 100-300 n. Navier-Stokes enhancer. Diferitele amplirovirusuri au puncte forte diferite. și la retrovirusuri oncogene intensificator rezistență poate fi corelată cu capacitatea virusului de a provoca maligne trans (yurmatsiyu celulelor țintă. Pentru a activa amplificatorul trebuie să fie interacțiunea cu proteinele celulare -regulators, în unele cazuri, de exemplu, in virus mouse-ul de cancer de san. eficacitatea enhancer reglată de hormoni (prin proteine - receptori hormonali) [c.314]
Terminatoarele bacteriene reglabile sunt numite atenuatoare (atenuatoare). Atenuatorul operonului de triptofan, E. coli, a fost descoperit și studiat mai întâi. Acest operon constă din cinci gene care codifică enzimele de biosinteză a triptofanului. Reglarea este efectuată de două sisteme care simt nevoia celulei în triptofan. Primul sistem afectează eficiența inițierii la promotorul operonului. Represor de Operon triptofan în asociere cu triptofan este conectat la un operator situat în fața punctului de pornire a transcrierii aproape de -10. și previne steric polimeraza ARN de atașare la promotor. În acest fel. cu un exces de triptofan, operonul este reprimat. In absenta represor triptofanului isi pierde capacitatea sa de a se lega la operator, rezultând în operonul este indusă. Acest sistem este completat de o reglementare într-un atenuator, distribuită la o distanță de 180 bp. de la punctul de plecare al transcrierii în pagina de vizionare unde termenul "transcriere" reprezintă punctul de plecare. [C.149] [c.152] [c.158] [c.301] [c.149] [c.152] [c.301] [c.308] [c.404] [c.491] [C.21] [c.140] [c.140] [c.141] [c.143] Genele (1987) - [c.139. c.140]