Utilizarea pentru transportarea multe eșantion biomaterial (puroi, conținut intestinal și altele asemenea), mass-media comună nutrient este adesea o eroare gravă, deoarece acestea sunt mai puțin solicitante proliferarea microorganismelor saprofite. o soluție salină care este adesea utilizat în acest scop nu prevede menținerea unor niveluri stabile ale potențialului redox și pH-ul, iar acest lucru, la rândul său, limitează în mod semnificativ viabilitatea multor bacterii patogene.
În prezent, clinica folosește diferite compoziții cu valori nutriționale diferite ca medii de transport (conservanți). Utilizarea uneia sau a alteia dintre ele este determinată de instrucțiuni, recomandări și instrucțiuni adecvate, inclusiv cele aprobate de Ministerul Sănătății al Federației Ruse.
Acest lucru poate fi soluții tampon care conțin numai săruri minerale - ser fiziologic sau soluție salină tamponată cu fosfat și conservanți, care conțin substanțe organice - glicerol tampon salină, conservant glicerol, 0,15% apă peptonată lle, tampon un mediu de cazeină-drojdie.
Compoziția acestor compoziții este după cum urmează:
Potasiu dihidrogenat de potasiu 0,45 g
Hidrofosfat disodic 5,34 g
Apă distilată 1000 ml
Soluție glicerol-salină tamponată
Clorură de sodiu 4,2 g
Diprogen acid fosfat 3,1 g
Potasiu dihidrogen fosfat 1,0 g
Glicerină neutră 300 ml
Distilată apă 700 ml
Clorură de sodiu 0,85% soluție de 1000 ml
Glicerină neutră 500 ml
Hidrofosfat disodic 20% soluție de 150 ml
Apă distilată 100 ml
Peptonă bacteriologică 0,1 g
Clorură de sodiu 0,5 g
Azotat de potasiu 0,1 g
Bicarbonat de sodiu 0,2 g
Hidrolizat de cazeină 2,0 g
Coacerea extractului de drojdie 5,0 ml
Soluție tampon fosfat până la 1000 ml
Astfel, pentru a transporta enterobacterii ca conservanți recomandate ser fiziologic, glicerină și soluții de tampon fosfat. pentru diagnosticul de laborator al ghid campilobacterioza prevede utilizarea în aceste scopuri, cu excepția salină, 0,1% procente apă peptonată (3 până la 48 ore.) sau mediu tioglicolic pentru controlul sterilității (până la 3 zile).
Trebuie remarcat faptul că răcirea la 4 ° C, se poate prelungi semnificativ timpul transportului probelor în aceste medii: ser fiziologic - 24 ore în 0,1% apă peptonată - până la 72 de ore și mediu tioglicolic pentru controlul sterilității - la 5 - 7 zile. În studiul materialului pentru prezența glicerinei Yersinium, conservanții nu sunt adecvați. În acest caz, materialul de testat a fost depozitat la 4 - 8 ° C 7 - 15 zile în soluție tampon de fosfat sau tampon cazeină-drojdie mediu.
Mai multe medii de ordinul zecilor care pot fi utilizate ca potențial de transport. Cu toate acestea, cele mai multe dintre ele nu corespund uneia dintre cele două cerințe obligatorii care dicteaza caracterul adecvat al mediului și precis ca mediul transportnoy.Transportnaya pe de o parte, trebuie să asigure păstrarea viabilității unui microorganism, în care cel puțin 8 - 12 ore la temperatura camerei, și la același timpul necesar pentru a preveni sau limita proliferarea microorganismelor substanțial.
Acesta din urmă este deosebit de important. Este necesar să se păstreze viabilitatea acelei părți a microflorei patogene, care este gazda moare repede, mai ales în cazul în care creșterea competitivă a microorganismelor mai puțin solicitante. După cum sa menționat deja, această situație este foarte frecvente, în cazul în care a investigat descărcarea rănilor, conținutul intestinal, spută, exudate faringiene și alte substraturi biologice. bacterii anaerobe Obligately, pneumococ, bacterii Haemophilus, Neisseria și alte microorganisme multe dificil de izolat de material biologic, în cazul în care există un proces de propagare paralel intensive a bacteriilor saprofite sau patogeni mai viabile. In plus, moartea bacteriilor pretențioase este determinat prin crearea unor condiții nefavorabile pentru acestea, cum ar fi pH-ul advers, potențial redox, prezența sau absența oxigenului liber, iar efectul metaboliților antimicrobieni care, în anumite condiții, se pot forma aktinometsety, Pseudomonas, Escherichia și altele conținute în microorganisme de probă.
Experiența creării și utilizării mijloacelor de transmitere a substanțelor nutritive este mare și nomenclatorul lor este oficial mare. Dar, de fapt, în lume, în mod constant folosi doar două medii de transport care numite de numele creatorilor lor: Ames miercuri și miercuri Cary-Blair, și care sunt mass-media de transport cele mai universale pentru a stoca marea majoritate a speciilor de bacterii. mediu Ames este destinat unei game largi de bacterii, mediu Cary Blair pentru microorganisme enterice.
Miercuri, Keri-Blair a fost oferită dezvoltatorilor în 1954. În perioada lungă de timp, formularea sa nu sa schimbat de fapt. Nu a cauzat discrepanțe și scopul mediului - inițial a fost interpretat ca conservarea microorganismelor în timpul transportului, cu accent pe microorganismele intestinului.
Clorură de sodiu 5,0 g
Hidrofosfat disodic 1,1 g
Clorură de calciu 0,1 g
Tioglicolat de sodiu 1,5 g
Apă distilată până la 1000 ml
Microorganismele intestinului sunt diverse, ele includ reprezentanți ai microflorei rezidente și tranzitorii. Acesta din urmă, la rândul său, poate include o mare varietate de bacterii și ciuperci, inclusiv. saprofite. În același timp, practica clinice instituții prestatoare de servicii de microbiologie axat pe alocarea unui anumit interval de microorganisme kishchnika, în special reprezentanți ai familiei Enterobacteriaceae (Shigella, Salmonella), cel puțin așa-numitul bacterii gram-negative nefermentate, cocci intestinali și ciuperci asemănătoare drojdiei.
Mediul de transport Cary Blair avertizează despre moartea celulelor microbiene, păstrează viabilitatea acestora, dar în același timp previne reproducerea. Aceste proprietăți ale mediului sunt furnizate prin compoziția sa componentă. Valoarea nutritivă scăzută și, mai presus de toate, lipsa surselor de azot și carbon, ca elemente cheie în dezvoltarea populației, limitează creșterea și reproducerea microorganismelor.
Procedura de utilizare a acestui mediu este după cum urmează: Mediul topit Cary Blair este turnat în tuburi sterile de 6 până la 9 ml. Volumul mediu al eprubetelor este determinat prin tehnica inoculării. La însămânțarea unui frotiu luat cu un tampon pe suportul de tampon, este suficientă o coloană mică de 6 ml mediu. Cu o însămânțare directă a biomaterialului (fără un tampon), volumul mediului în eprubeta este mărit. În această formă, mediul poate fi păstrat mult timp la o temperatură de 2-8 ° C.
Materialul biologic este imersat în coloana mediului în așa fel încât să nu rămână pe suprafața sa. După aceasta, tubul de testare cu mediul însămânțat este plasat într-un recipient și trimis într-un laborator.
Mediul Cary-Blair păstrează viabilitatea bacteriilor solicitante timp de aproximativ o zi, după care se observă moartea treptată a celulelor. Prin urmare, după ce au fost transferate de la mediul de transport la medii îmbogățite, diferențiate sau alte substanțe nutritive, este necesar să se realizeze cât mai curând posibil. Cu toate acestea, există dovezi că salmonella în acest mediu rămâne viabilă timp de mai multe luni.
mediu Ames este folosit ca un transport pentru o gamă largă de microorganisme cele mai diverse substraturi biologice (puroi, secreții rana, spută, LCR, etc.), cu excepția fecale. Mediul Ames poate fi cu cărbune și fără el:
Clorură de sodiu 3,0 g
Fosfat de hidrogen disodic 1,05 g
Potasiu dihidrogenat de potasiu 0,2 g
Clorură de potasiu 0,2 g
Clorură de calciu 0,1 g
Clorură de magneziu 0,1 g
Tioglicolat de sodiu 1,0 g
(ca o componentă opțională) 10,0 g
Apă distilată până la 1000 ml
Se adaugă cărbune în mediul Ames pentru sorbția metaboliților microbieni care afectează negativ agenții patogeni foarte sensibili. În special, această condiție este deosebit de importantă pentru menținerea viabilității gonococilor.
Tehnica de însămânțare în mediul Ames este aceeași ca și în mediul Cary Blair.
opinii contradictorii cu privire la caracterul adecvat mediului Ames pentru transportul substraturilor biologice cu bacterii anaerobe. obligatorii ai Desigur, prezența unui potențial redox scăzut, care este furnizat tioglicolat de sodiu și coloana păstoase agar, care este imersată biomaterial microorganisme limitati contactul cu oxigenul atmosferic și livrarea l la mediu într-o formă solubilă, care poate contribui la menținerea viabilității unui număr de tipuri de bacterii anaerobe obligately (cel mai demonstrativ în acest sens este clostridia). Cu toate acestea, mediul nu prevede conservarea pe termen lung a anaerobii, care sunt obligatorii ai foarte sensibile la oxigen (de exemplu, unele tipuri de Bacteroides).
Pe lângă cele de mai sus, există o gamă largă de mijloace de transport utilizate pentru a transporta anumite tipuri de microorganisme. Cerințele cele mai stricte sunt impuse transportului materialului supus examinării bacteriologice pentru prezența microorganismelor anaerobe care nu formează spori. Aceste bacterii mor rapid în contact cu oxigenul din aer, ceea ce face necesară folosirea vaselor umplute cu gaz inert pentru a transporta materialul. De exemplu, un bine cunoscut mediu îmbogățit lichid sub un gaz inert cu hemin și vitamină K pentru însămânțarea directă a sângelui și a biosubstratelor lichide este bine cunoscut. Servește simultan ca mediu de transport și mediu pentru cultivarea bacteriilor anaerobe, inclusiv anaerobe severe
Un număr de medii de transport țintă includ agenți antimicrobieni (componenta selectivă). Aceste substanțe suprimă creșterea microflorei concomitente, dar nu acționează asupra microbului dorit. Componentele rămase ale suportului asigură viabilitatea acestuia. Un exemplu este mediul pentru Listeria, care este, de asemenea, "foame" și conține substanțe cu acțiune selectivă (dată pe litru):
Glicerofosfat de sodiu 10,0 g
Tioglicolat de sodiu 1,0 g
Clorură de calciu 0,1 g
Acid acid nalidixic 0,04 g
Un mediu mult mai bogat este mediul pentru transportul campilobacteriilor (așa-numitul mediu Campi TCIO), al cărui compoziție include cinci antimicrobiene (date per litru):
Stocarea pancreatică a cazeinei 20,0 g
Clorură de sodiu 2,5 g
Diphalia hidrofosfat 1,5 g
Tioglicolat de sodiu 0,5 g
Sulfură de sodiu 0,2 g
Cefalotină 0,02 g
Vancomicină 0,02 g
Amfotericina B 0,002 g
Trimetoprim 0,002 g
Polymyxin B 3000 U
Inscripția citată nu este mult diferită de compoziția altor medii de cultură pentru campilobacterii (a se vedea capitolul final). Este evident că dezvoltatorii mediului au pus accent, în primul rând, pe acțiunea selectivă a antibioticelor, păstrând, în general, compoziția mediului, suficientă pentru a menține viabilitatea multor microorganisme.
Același principiu este folosit și în mediul de transport pentru chlamydia. În plus, se ia în considerare posibilitatea utilizării factorului osmotic pentru selecție (dată pe litru).
Fosfat de dipotasiu 2,1 g
Potasiu dihidrogenat de potasiu 1,1 g
Serul unui mare
de bovine 50,0 ml
Vancomicină 0,1 g
Streptomicină 0,05 g
Nystatin 25.000 de unități
Antibioticele și serul sunt injectate aseptic într-un mediu nutritiv steril înainte de a fi distribuite în fiole și tuburi de testare.
Există o serie de medii de transport care sunt destul de complicate în compoziția pentru neisseria, micoplasmele și combinațiile lor, în principal în biosubstrate obținute din tractul genito-urinar. Unele variante sunt considerate medii de transport pentru bacteriile solicitante în general, dar mai ales pentru Neisseria. O copie a unuia dintre ei, aparținând unui grup mare de așa-numiți. Mediul Transgrow, este dat mai jos (dat pe litru).
Hemoglobină 10,0 g
Stocarea pancreatică a cazeinei 7,5 g
Clorură de sodiu 5,0 g
Amidon de porumb 1,5 g
Diprogen acid fosfat 4,0 g
Potasiu dihidrogen fosfat 1,0 g
Vitamina B12 0,001 g
Pirofosfat de tiamină 0,001 g
Acid P-aminobenzoic 0,0002 g
Supliment antibiotic 10,0 ml
Suplimentul antibiotic include un număr de antibiotice proiectate pentru a da proprietățile selective ale mediului. Există o serie de propuneri, dintre care nici una nu poate, în mod natural, să ofere o suprimare garantată a creșterii microorganismelor concomitente. În diferite surse, se menționează cel mai adesea următoarea compoziție (se adaugă 10 ml dintr-o soluție de antibiotice pe litru de mediu).
Polimixina B 0,0075 g
Vancomicina 0,0035 g
Trimethoprim 0,0035 g
Nystatin 12500 U
CAPITOLUL 8. MEDIILE NUTRIȚIONALE PENTRU IDENTIFICAREA ȘI IDENTIFICAREA INVITAȚIEI
Printre agenții patogeni ai bolilor umane, enterobacteriile se numără printre microorganismele relativ neobișnuite. Ei sunt capabili să producă creșterea pe diferite medii nutritive de bază utilizate în studiile microbiologice. Cu toate acestea, familia Enterobacteriaceae este destul de extinsă; combină diferite bacterii în proprietățile sale. În plus, acele zone ale corpului uman, în care mulți membri ai familiei fac obiectul unui habitat natural sau parazitism, sunt populați din abundență de o microflore rezidentă. De aceea, mediile nutritive utilizate în tratarea enterobacteriilor rezolvă în primul rând problema izolării lor selective și a diagnosticării bacteriologice. Acest lucru este tipic atât pentru practica internă, cât și pentru cea externă.
Potrivit multor orientări și instrucțiuni interne, inclusiv Ministerul Sănătății a aprobat în conformitate cu cerințele enterobacterii bakdiagnostike a propus să utilizeze mediu de îmbogățire, mediul pentru izolarea selectivă și diferențierea. Lista lor este prezentată în tabel. Numit acele medii care sunt stăpânite de către producătorii interni, precum și cele a căror punere în aplicare în practică a perspectivei microbiologice recunoscute.
Recomandările interne nu diferă, în principiu, de practica zilnică de utilizare a mediilor nutritive în străinătate. Mediile nutritive pentru enterobacterii sunt proiectate astfel încât să utilizeze caracteristicile de creștere ale genurilor și speciilor individuale și capacitatea lor de a transforma unul sau alt substrat. Următorul tabel 7 prezintă în mod selectiv acele proprietăți ale enterobacteriilor care sunt luate în considerare și implementate cu succes în mediile nutritive pentru diferențierea microorganismelor din această familie.
medii de transport - Ames sau Keri-Blair sau Stewart;
mediu bazic - agar cu sânge, soia agar digera (agar triptic de soia);
mediu de diagnostic selectiv și diferențial - acetat de agar, apă peptonată cu un reactiv Andred, Kligler MacConkey mediu agar, mediu lichid și pentru a determina indol ureazei, mediu cu deoxicolat și citrat, SS-agar (ca mediu alternativ cu deoxicolat), citrat Simțul de agar. Pentru acest grup de medii nutritive pot fi clasificate numit lista BROLACIN agar, mai bine cunoscut în Rusia ca CLED-agar, disponibil NPO „mediu nutritiv“ Mahacikala (mediu conținând cistină, lactoză și indicator și dozarea compoziției electrolit) . Deși, strict vorbind, acest mediu este destinat izolării nu numai a enterobacteriilor.
O altă experiență străină merită menționată.
În practica microbiologilor din SUA în alocarea enterobacteriilor din conținutul intestinal, se sugerează următoarele grupuri de medii nutritive.
Ca mijloc de transport - Cary Blair.
Diagnosticul diferențial. Agar MacConkey și agar EMB (cu eozină și albastru de metilen).
Moderat selectiv. hectoen-entero agar, SS-agar (agar shigella-salmonella), agar XLD (cu xiloză, lizină și deoxicolat).
Medii foarte selective: agar cu agar strălucitor verde și sulfit de bismut-sulfit.
În mod natural, toate cele de mai sus nu exclud utilizarea mediilor nutritive de bază, în primul rând agar nutritiv, cu adăugarea de eritrocite de miel.
Scopul mediului de transport este evident. Al doilea grup de medii permite diferențierea culturilor care fermentează lactoza de la lactoză-negative. Următorul (mediu selectiv moderat) asigură creșterea salmonelei și a shigella, în timp ce creșterea altor enterobacterii este suprimată parțial sau complet. Ultimul grup este conceput pentru a izola salmonela, dar nu este garantată creșterea shigella.