Material pentru studiu: excremente, resturi de alimente, voma, spălături gastrice, urină, puroi, secreții ale urechii, lichid cefalorahidian, sânge, spalarea materialelor secționate cu obiecte de mediu.
Metode de diagnosticare de laborator:
1) Bacteriologic - de bază
Schema de studiu bacteriologic al materialului
- Materialul este făcut un frotiu, colorat de Gram, microscopic și da un răspuns preliminar.
- Materialul dintr-un examinator este inoculat pe 6 vase Petri cu mediu: Endo și Levina - pentru izolarea EPE; Ploskireva cu antibiotic și Ploskirev fără antibiotic - izolarea shigella; BCA - pentru a izola salmonela; SPA - pentru alocare yersiniy. Toate culturile sunt incubate la 37 ° C timp de 24 de ore, exceptând o ceașcă cu ICA, care este incubată timp de 48 de ore.
- Materialul este placat în bulion selenit → 37 ° C timp de 14-16 ore.
- Materialul este fagodiagnostic (cu ciumă, tifoid, salmonella, bacteriofag polivalent de șigeloză), adică metoda accelerată de identificare, care permite un răspuns preliminar, dar nu exclude desfășurarea cercetărilor bacteriologice.
1. Pe vasul Petri cu mediu Endo (Levin), sunt selectate 10 izolate tipice pentru coloniile EPE.
2. 1/3 din fiecare colonie este testată pentru apartenența la E. coli prin intermediul RA pe sticlă cu ser polivalent de OCA escherichian.
3. A doua treime a aceleiași colonii este transferată într-unul dintre mediile primare de identificare: Kligler sau Russell sau Olkenitsky pentru a determina afilierea generică a culturii → 37 о С 24 ore.
4. Partea rămasă (a treia) a aceleiași colonii este mutată în SPA înclinată, cu scopul de a izola și de a acumula o cultură pură și identificarea ei serologică → 37 ° C.
1. Identificarea primară a culturii (determinarea accesoriilor sale generice) se realizează în funcție de natura creșterii în mediul lui Kligler (Russell).
2. Verificați omogenitatea culturii pure izolate, i. E. face un frotiu dintr-o SPA bevelled, pete Gram, microscopie, celulele ar trebui să fie uniforme.
3. Semănați o cultură pură pe mediul Giss și SPB cu două hârtii indicatoare (pentru indol și hidrogen sulfurat) → 37 о С 24 ore.
4. Semănat pe mediu Simmons → 37 о С 24 ore.
5. Semănarea într-o coloană de agar semi-lichid → 37 о С 24 ore.
6. Proba pentru oxidaza.
R. Primele 6 teste se referă la testele seriei diferențiale minime de enterobacterii.
7. Plasați RA pe sticlă cu escherichioze polivalente OKA, OKV, OKS, OKD, OKE sera (confirmați aparținând genului și determinați numărul de seruri pentru a determina EPE serovar).
8. RA Pune pe sticla cu cultura vie și OK-imunoglobulina pentru determinarea antigenului K și RA pe sticlă cu o cultură încălzită (la 100 ° C timp de 30 minute într-o baie de apă) și OK Group și factorial-seruri pentru a determina EPE O antigen.
9. Dacă nu OK imunoglobulină și factorul și grupa O seruri serotip EPE poate fi determinată prin stabilirea RA dislocat cu culturi vii și încălzite (la 100 ° C timp de 1 oră) și grup UC seruri.
10. Testarea sensibilității tulpinii izolate la antibiotice → 37 о С 24 ore.
1. Contabilizarea rezultatelor tuturor testelor.
2. În tulpinile mobile, se determină suplimentar antigenul H în RA pe sticlă cu Escherichia H-sera.
3. Scrieți răspunsul.
Concluzie: „020 alocate E. coli:. 84 K, sensibil la cloramfenicol și kanamicină, tetraciclină intermediar rezistente la penicilină și ampicilină“
Pentru identificarea finală a culturii izolate pentru
determinarea serovarului EP a plasat RA-ul desfășurat cu culturi vii și calde și OC-sera de escherichioză de grup.
- Faceți o spălare a culturii EPE pure prin injectarea unui IHC steril în eprubeta. O porțiune din spălare este transferată într-un tub steril și încălzită într-o baie de apă la 100 ° C timp de 1 oră (cultura ucisă), a doua parte a soluției de spălare este o cultură vii.
- Cele două rânduri de tuburi serologice fac două diluții ale UC-ser steril în creștere în IPC, începând cu 1:50 la 0-titre indicate pe etichetă, neprinimaya în considerare anticorpii K-titrului. Reacția este plasată într-un volum de 1 ml. CS și SC pus prin metoda uzuală.
- Toate eprubetele de test cu 1 rând sunt injectate cu 1 picătură de suspensie bacteriană viu în ICH, iar în al doilea rând, 2 picături dintr-o cultură caldă, pre-răcită.
- Rezultatele sunt înregistrate după 18-20 de ore de incubare la 37 ° C cu ochiul neinervat (cultura vii) și aglutinoză (cultura caldă). Pentru o cultură vie, formarea unui agregat K-aglomerat mare este caracteristică pentru agregatul O-aglutinat cu granulație fină.
Rezultatul este evaluat ca fiind pozitiv în prezența simultană a O-aglutinează jumătate titrului titru sau K-anticorpi indicate pe etichetă, precum și O-aglutinează un titru O titru sau jumătăți de anticorpi, specificate pe etichetă; sau O-aglutinare în ambele rânduri de tuburi la un titru O titru sau jumătăți de anticorpi.
Când aglutininele sunt detectate în serul de pacienți, se utilizează RNGA, cu ajutorul căruia se determină anticorpi O la pacienții cu coliteită.
Pentru a caracteriza complet epidemiile diareice, virulența lor este de asemenea determinată: infectarea intranazală a șoarecilor, determinarea proprietăților hemolitice.