Boala autoimună este un proces patologic în care patogeneza unui autoanticorp și / sau a răspunsului autoimunar celular joacă un rol important.
Semnele, potrivit cărora această boală sau această boală pot fi clasificate ca autoimune, au fost formulate de L. Vitebsky (1961).
1. Prezența autoanticorpilor sau a limfocitelor T citotoxice îndreptate împotriva antigenului asociat cu această boală.
2. Identificarea autoantigenului împotriva căruia este îndreptat răspunsul imun.
3. Transferul unui proces autoimun cu anticorpi conținând ser sau limfocite T citotoxice.
4. Posibilitatea de a crea un model experimental al bolii prin introducerea unui autoantigen cu dezvoltarea tulburărilor morfologice corespunzătoare caracteristice bolii.
proteina C reactiva - una dintre proteinele inflamatorii de faza acută conținute de legăturile serice și polizaharid capsular (C-polizaharidă) Streptococcus pneumoniae. În cele mai multe cazuri, cu cât ESR este mai mare, cu atât este mai mare nivelul proteinei C reactive. Cu următoarele excepții: 1) nivelul de proteina C reactiva creste rapid, chiar și după un mic leziuni tisulare aseptice, viteza de sedimentare a hematiilor, cu toate acestea, rămâne, 2), eritrocitare creșteri normale rata de sedimentare, iar nivelul de proteina C reactiva nu este alterată de anumite infecții virale, intoxicație severă, unele forme artrita cronica. În aceste cazuri, nivelul proteinei C reactive este mai puțin informativ decât ESR. Uneori, nivelul proteinei C reactive este măsurat pentru a evalua activitatea reumatismului. Deoarece nivelul proteinei C reactive poate varia dramatic în timpul zilei, acesta trebuie determinat dinamic.
Factorul reumatoid este IgM autoanticorp la fragmentul Fc al IgG. În ser, factorul reumatoid este, de obicei, prezent ca un complex cu IgG.
2. Metode de detectare. Orice particule acoperite cu IgG pot fi aglutinate cu un factor reumatoid. Inițial, pentru detectarea factorului reumatoid utilizat acoperite cu anticorp de oaie celule sanguine roșii sau eritrocite umane grupa 0. Ulterior, au fost înlocuite cu particule de latex și bentonita, care a crescut sensibilitatea metodei (vezi. Fig. 15.1). Recent, multe laboratoare au utilizat o metodă mai precisă pentru determinarea factorului reumatoid, pe baza nefelometriei (vezi capitolul 20, paragraful IG). În determinarea nefelometrică a factorului reumatoid, este evaluată o creștere a turbidității serului după adăugarea de IgG la acesta. Serul destinat determinării factorului reumatoid este păstrat la o temperatură care nu depășește -20 ° C.
3. Semnificația diagnosticului. La un titru scăzut (până la 1:80), factorul reumatoid este detectat la 5% dintre persoanele sănătoase cu vârsta sub 60 de ani și la 30% - peste 80 de ani. La mai mult de 75% dintre pacienții cu poliartrită reumatoidă, titrul factorului reumatoid în reacția de aglutinare a latexului depășește 1:80. În cazul titrului ridicat, factorul reumatoid este detectat la pacienții cu poliartrită reumatoidă progresivă severă. În acest caz, se observă de obicei manifestări extraarticulare ale bolii, de exemplu, noduli reumatoizi, vasculită sistemică, sindromul Sjogren. În cazul sindromului Sjogren, factorul reumatoid este determinat în titrul cel mai ridicat. Factorul reumatoid în ser apare, de obicei, la 3-6 luni după declanșarea artritei reumatoide. La pacienții seropozitivi (pacienți la care este detectat factor reumatoid seric) în timpul remisiunii factorului reumatoid titrului redus foarte mult, deși nu este normalizat. Factorul reumatoid nu este specific pentru artrita reumatoida si alte autoimune detectate cu boli care implica boala in comun, endocardită infecțioasă, unele boli hepatice cronice și pneumonită interstițială acută (vezi. Tabelul. 15.1).
4. Alte autoanticorpi la imunoglobuline. Cu reacția de aglutinare a latexului și nefelometria, se detectează în primul rând IgM la IgG. La unii pacienți, acești anticorpi sunt o moleculă monomerică. În plus, IgG și IgA până la IgG pot fi, de asemenea, detectate în serul pacienților cu poliartrită reumatoidă (în special însoțită de vasculită sistemică). Există, de asemenea, anticorpi la fragmentul Fab al IgG, dar rolul lor în patogeneza bolii nu este stabilit. În prezent, studiul autoanticorpilor la IgG, care nu au legătură cu factorul reumatoid, este efectuat numai în scopuri științifice.
5. Rolul factorului reumatoid în patogeneza artritei reumatoide. Prezența complexelor imune, care includ factorul reumatoid în lichidul sinovial al articulațiilor afectate sugereaza ca factorul reumatoid implicat in inflamatie in poliartrita reumatoida. Cu toate acestea, nu există fapte care să confirme această ipoteză încă. În unele cazuri, factorul reumatoid este definit numai în lichidul sinovial, dar în ser este absent. Detectarea factorului reumatoid în lichidul sinovial al articulațiilor afectate folosite pentru a confirma diagnosticul artritei reumatoide seronegative.
D. Anticorpi antinucleari
a. Definiția. Celulele LE (celulele L estus E rythematosus - lupus eritematos) sunt neutrofile sau monocite care conțin incluziuni omogene bazofile omogene. Aceste incluziuni sunt nuclei fagocotizi ai celulelor perturbate acoperite cu anticorpi antinucleari. Celulele LE sunt detectate la pacienții cu SLE în pleurură, pericardică, peritoneală, lichid sinovial și CSF. Aceste celule pot fi obținute in vitro prin adăugarea de leucocite și nuclee sănătoase ale celulelor distruse la serul pacientului. Prima metodă de laborator pentru diagnosticarea SLE, dezvoltată în 1948, se bazează pe definirea celulelor LE.
b. Semnificația diagnosticului. Identificarea LE-celulelor - suficient de consumatoare de timp și metoda sensibilă pentru diagnosticul de laborator al LES, astfel încât acum în cele mai multe laboratoare pentru diagnosticul de acest lucru și alte boli autoimune, folosind un simplu, ieftin și reproductibile metode bazate pe determinarea anticorpilor antinucleari.
2. Determinarea anticorpilor antinucleari prin imunofluorescență
a. Definiția. Anticorpii antinucleari sunt anticorpi care se leagă la anumite structuri ale nucleului celular. Cel mai adesea, imunofluorescența indirectă este utilizată pentru determinarea anticorpilor antinucleari.
b. Metode de detectare. Deoarece substratul celular utilizat extemporaneu, de exemplu maimuță esofag, ficat de șobolan sau preparate din suspensia de celule cu nuclei mari, cum ar fi linia celulară umană Hep-2. Determinarea anticorpilor antinucleari se efectuează după cum urmează: 1) substratul celular este incubat cu serul de testat; 2) spălați proteinele din zer nelegate; 3) se incubează în prezența anticorpilor marcați cu fluoresceină la imunoglobulinele umane și apoi se spală din nou; 4) este examinată utilizând un microscop fluorescent. Anticorpii antinucleari conținuți în serul de testare se leagă de substratul celular și apoi - cu anticorpi marcați împotriva imunoglobulinelor. Dacă serul nu conține anticorpi antinucleari, anticorpii marcați adăugați la substratul celular sunt îndepărtați în timpul spălării (vezi Figura 15.2). Pentru determinarea titrului anticorpilor antinucleari, testul se efectuează cu diluții seriale ale serului de testat. Fiecare laborator însuși stabilește titruri normale de anticorpi antinucleari, deoarece acestea depind de tipul de substrat celular și de modul în care este fixat. In cele mai multe cazuri, pentru detectarea anticorpilor antinucleari se utilizează culturi de celule umane Hep-2 (celule laringe cancer) care conțin mai multe antigene nucleare: Ro / SS-A, proliferează antigene celulare antigen nuclear și centromere. Utilizarea anticorpilor marcati la diferite clase de imunoglobuline a aratat ca majoritatea anticorpilor antinucleari sunt IgG.
în. Semnificația diagnosticului. Obiectivul principal al studiului a anticorpilor antinucleari - exclude LES, deoarece în această boală Anticorpii antinucleari apar în seruri de 95% dintre pacienții cu 3 luni de la debut. Anticorpii antinucleari sunt detectați nu numai în SLE, ele pot fi detectate la vârstnici, apar cu utilizarea anumitor medicamente, precum și cu unele artrite (vezi Tabelul 15.2). Dacă titrul de anticorpi antinucleari ridicat, este necesar să se determine care antigenul acestea sunt dirijate (vezi. Tabelul. 15.3), deoarece diferitele boli autoimune sunt detectate anticorpi antinucleari cu specificitate diferită (a se vedea. Ch. 15, p. II.D). Titrul anticorpilor antinucleari nu permite evaluarea activității bolii și eficiența tratamentului.
1) Tipul de colorare (caracterul de distribuție a etichetei fluorescente în celule) pentru diferite afecțiuni nu este același și determină direcția de cercetare ulterioară a anticorpilor antinucleari. Serul de test poate conține anticorpi antinucleari cu specificitate diferită, cu toate acestea, tipul de colorare este determinat de acei anticorpi care sunt prezenți în cel mai mare titru.
a) colorație difuză (chiar și distribuția de tag-uri) sunt cel mai puțin specifice și apare cel mai frecvent în LES, sindromul de droguri lupus si alte boli autoimune, precum și la vârstnici (vezi. Tabelul. 15.2). Cu colorarea difuză a celulelor, reacția se repetă cu o diluție mare a serului de testat. Dacă tipul de colorare rămâne același, este foarte probabil că antigenul împotriva căruia sunt îndreptate anticorpii antinucleari este deoxiribonucleoproteina.
b) Se observă colorarea periferică atunci când prevalează anticorpi la ADN în serul de test (vezi capitolul 15, paragraful II.D.1). Acest tip de colorare este obișnuit în lupusul nefrit.
c) Colorarea Spotted cauzate de anticorpi la antigenele nucleare extractibile (vezi. Ch. 15, p. II.D.2) și cele observate în mod tipic în sclerodermia sistemică, boala mixtă de țesut conjunctiv, sindromul Sjogren, sindromul lupus de droguri.
g) de colorare nucleolar (distribuție eticheta în domeniul nucleoli) cauzate de anticorpi la ribonucleoproteine (vezi. Ch. 15, p. II.D.2). Acest tip de colorare este caracteristic sclerodermiei sistemice și apare ocazional în alte boli autoimune.
E. Studiul specificității autoanticorpilor antinucleari și ai altor autoprotectoare
1. Anticorpi la ADN
b. Semnificația diagnosticului. Anticorpii la dsDNA sunt caracteristice nefrita lupus și alte manifestări severe ale LES. O determinare în serie a anticorpilor la ADN este utilizată pentru a evalua eficacitatea tratamentului acestei boli. Deși definiția anticorpilor la ADN este mai puțin sensibilă decât determinarea anticorpilor antinucleari prin imunofluorescență, are următoarele avantaje: 1) un anticorp la dsDNA sunt mai specifice pentru LES decât alți anticorpi antinucleari; 2) nivelul acestor anticorpi pot evalua riscul si severitatea nefrita lupus (cu creșterea titrului de anticorpi pentru a ADN-ului creste riscul si severitatea nefrita lupus). Vă rugăm să fiți conștienți de faptul că preparatele de ADN comerciale conțin nu numai dublu, dar, de asemenea, molecule mono-catenare și anticorpi la ADN-ul monocatenar este detectat în scleroza sistemică, artrita reumatoidă, dermatomiozita, hepatita cronică activă, sindromul de droguri lupus, cauzate de procainamidă. hidralazină. izoniazida. trimetadionă. metildopa și fenotiazinele. Un amestec de ADN monocatenar poate fi îndepărtat prin cromatografie. Dacă există îndoieli cu privire la rezultatele studiului, este necesar să se verifice puritatea preparatului ADN.
în. Rolul în patogeneza bolilor autoimune. Anticorpii la ADN se găsesc în rinichi (sub formă de complexe imune) și în serul pacienților cu SLE. Deoarece aceste anticorpi leagă și activează complementul, ele ajută la distrugerea celulelor și la activarea neutrofilelor și macrofagelor.