Biblioteci genomice. Crearea de biblioteci genomice. Tipuri de biblioteci genomice.
Restricția ADN-ului genomic în fragmente și clonarea fragmentelor cu ajutorul vectorilor diferiți au creat baza pentru formarea bibliotecilor genomice.
În acest scop, ADN-ul genomic este tăiat sau, să zicem, o anumită enzimă de restricție digerat și fragmentele rezultate donate prin diferiți vectori care sunt utilizați pentru tehnicile de ADN recombinant. bibliotecă genomică ar trebui să conțină nu numai genele, dar toate ADN non-codare situat între gene.
Deoarece digestia enzimei de restricție produc incompletă, astfel încât anumite site-uri specifice pentru o enzimă de restricție, sunt tăiate, și nu altele, fragmentele de ADN sunt formate cu secvențe care se suprapun parțial de nucleotide. Acest lucru facilitează model ulterioare aranjament de recuperare a fragmentelor în ADN-ul nativ. În plus față de biblioteci genomice. Există o bibliotecă de ADNc.
Bibliotecile ADNc conțin numai exonii genei, deoarece sunt obținuți pe baza ARNm matur cu o enzimă numită transcriptază inversă. Transcriptaza inversă pe șablonul mRNA creează o catenă complementară de ADN care este apoi transformată într-un ADN dublu catenar convențional folosind o ADN polimerază.
Apoi, astfel de molecule ADNc sunt clonate în celulele bacteriene în același mod ca și ADN-ul genomic. Un alt tip de biblioteci ADN este bibliotecile cromozomiale.
Pentru a le crea, cromozomii sunt separați prin citometrie în flux, ceea ce permite izolarea cromozomilor separați. ADN-ul obținut după o astfel de sortare va reprezenta în principal un cromozom particular.
Apoi, fragmentele de ADN ale unui anumit cromozom sunt obținute prin digestie cu o anumită enzimă de restricție și clonate în mod obișnuit. Diverse biblioteci de ADN sunt utilizate pe scară largă în implementarea programului Genomului uman, precum și în alte scopuri, de exemplu, în căutarea markerilor ADN polimorfici.