Tema # 1: Diagnosticul de laborator al poliomielitei și bolilor cauzate de virusurile Coxsackie, ECHO.
Scop. bazat pe cunoașterea biologiei virusului polio, Coxsackie, ECHO, caracteristicile interacțiunii acestora cu microorganismul să fie în măsură să justifice tactica de laborator de diagnostic, prevenirea si tratamentul bolilor cauzate de acestea.
1. Clasificarea, caracteristicile morfophobiologice ale poliovirusurilor, Coxsackie, ECHO.
2. Ecologia, caracteristicile epidemiologiei, patogenezei și imunității în poliomielita și bolile cauzate de virusurile Coxsackie, ECHO.
3. Material și metode pentru diagnosticul de laborator al poliomielitei și a bolilor cauzate de virusurile Coxsackie, ECHO.
4. Prevenirea specifică a poliomielitei, profilaxia nespecifică în poliomielita și bolile cauzate de virusurile Coxsackie, ECHO.
1. Pentru a lua în considerare și a evalua rezultatele eșantionului de culoare (CP), reacția de neutralizare (RN) pentru diagnosticul poliomielitei.
2. Pentru a lua în considerare și a evalua rezultatele RGAs, RTCA în scopul diagnosticării infecțiilor cauzate de virusurile Coxsackie, ECHO.
1. Clasificarea, caracteristicile morfo-biologice și structura antigenică a poliovirusurilor, Coxsackie, ECHO.
2. Programul Global de Eradicare a Poliomielite al OMS; rezultatele implementării sale în Federația Rusă și în Teritoriul Krasnojarsk.
3. Caracteristici ale patogenezei și imunității în bolile cauzate de virusurile poliomielitei, Coxsackie, ECHO.
4. Diagnosticul de laborator al poliomielitei și bolilor cauzate de virusurile Coxsackie, ECHO: material și metode (virologice, serologice).
5. Prevenirea specifică a poliomielitei.
6. Prevenirea nespecifică a bolilor cauzate de virusurile poliomielitei, Coxsackie, ECHO.
Sarcini efectuate în timpul lecției (OIRS):
1. Efectuarea unui studiu virologic pentru diagnosticul poliomielitei:
1.1. Să ia în considerare și să evalueze rezultatele contaminării culturilor de țesut cu materialul investigat de la subiect cu diagnosticul de "poliomielită" (microscopic, CP).
1.2. Să se țină cont și să se evalueze rezultatele pH-ului în cultura de țesut prin metoda CP cu ser polivaelită polivalenită polivalentă și tipică și material care conține virusuri.
Pe baza rezultatelor obținute, faceți o concluzie, completați formularul de trimitere și formularul de răspuns de la laboratorul virologic.
2. Efectuați un studiu virologic pentru diagnosticarea infecției enterovirale:
2.1. Să se țină cont și să se evalueze rezultatele RGA cu un material care conține virusul obținut prin infectarea culturilor de țesut CSF al unui subiect cu diagnostic clinic "Meningită. Infecția cu enterovirus? ».
2.2. Pentru a lua în considerare și a evalua rezultatele RTGA cu coxsacks A și B, ECHO și cultura obținută de virus, polivalente, tipice.
Pe baza rezultatelor obținute, faceți o concluzie, completați formularul de trimitere și formularul de răspuns de la laboratorul virologic.
3. Să studieze și să descrie preparatele biologice: vaccinul cu poliomielită viu, poliomielita polivalentă și poliomielită tipică, Coxsackie, ECHO.
Instrucțiuni metodice pentru îndeplinirea sarcinii de cercetare:
I. Efectuarea unui studiu virologic pentru diagnosticul poliomielitei:
1.1. Luați în considerare și evaluați rezultatele contaminării culturilor de țesut cu materialul de testare de la subiect cu diagnosticul de "poliomielită" (microscopic, CP).
Materialul pentru diagnosticul virologic de poliomielită este: fecale în primele 10 zile de boală, descărcare nazofaringiană - în primele 3 zile de boală; din CSF - poliovirusul este rareori izolat. După prepararea probelor și verificarea lor pentru absența bacteriilor, se infectează culturi celulare (fibroblaste embrionare umane sau rinichi de maimuță, HeLa etc.).
Indicația virusului se efectuează în conformitate cu CPD, pentru poliovirus este o degenerare completă sau parțială a celulelor, care este detectată la 2-3 zile de incubare.
Rezultatele sunt înregistrate microscopic sau prin metoda CPU (vezi lecția # 25).
Controlul este cultura intactă a celulelor tisulare.
1.2. Luați în considerare și evaluați rezultatele pH-ului în cultura de țesut prin metoda CP cu ser polivalente polivalente polivalente și tipice și materiale care conțin virusuri.
Identificarea culturii obținute a virusului citopatogenic se efectuează în PH cu polivalent și apoi cu serurile I, II, III specifice.
Virusul folosit ca o cultură de lichid de cultură de țesut primar al culturii infectate, care au fost amestecate cu un volum egal de ser diagnostic diluat 1: 5 sau 1:10 și lăsate timp de 1-1,5 h la temperatura camerei t ° și apoi infecta cultura de tesut. Pentru a face acest lucru, 0,2 ml din amestec și 0,8 ml din mediul nutritiv 199 sunt introduse în tubul de cultură tisulară.
Un criteriu pentru fiabilitatea rezultatelor LV este controlul:
- controlul culturilor de țesut (cultura de țesut neinfectată cu adaos de 1 ml de mediu 199) pentru a detecta o posibilă degenerare celulară nespecifică;
- controlul toxicității serice (cea mai mică diluție serică utilizată în test într-un volum de 0,1 ml este introdusă într-un tub cu cultură de țesut și se adaugă 0,9 ml de mediu 199);
- controlul virusului (0,1 ml din cultura virusului este introdus într-un tub cu cultură de țesut și se adaugă 0,9 ml de mediu 199).
Rezultatele LV sunt luate în considerare în ziua a 5-7-a. Trebuie avut în vedere că în fiole cu o cultură de țesuturi de virus moare și culoarea mediului 199 nu se schimbă (rămâne roșu). În același loc unde virusul este neutralizat, mediul 199 devine galben. Un rezultat pozitiv și fiabil al PH indică faptul că virusul aparține speciei și tipului corespunzător.
Pe baza rezultatelor obținute, faceți o concluzie, completați formularul de trimitere și formularul de răspuns de la laboratorul virologic.
II. Desfășurați un studiu virologic pentru a diagnostica infecția enterovirusă:
2.1. Luați în considerare și evaluați rezultatele RGA cu un material care conține virusul obținut prin infectarea culturilor țesuturilor CSF ale unui subiect cu diagnostic clinic de "meningită. Infecția cu enterovirus? ».
Virusul Coxsackie A tip 1-11, 14, 16-18, 22, 24; Coxsackie B și tipurile echovirus 1-7, 1-6, 9, 11-23, 25, 27, 30, 31 sunt agenții cauzatori de meningita seroase, una dintre comune boli cu etiologie enterovirotică. Diagnosticul se bazează pe utilizarea metodei virologice. Materialul este CSF. Pentru virusurile de expunere având capacitatea de a aglutina eritrocitele umane I (0) de sânge (Coxsackie A 20, 21, Coxsackie B 1-5, ECHO 3, 6, 7, 11-13, 15, 16, 19, 20, 25, 29 ), folosiți RGA (vezi Sesiunea # 31).
2.2. Luați în considerare și evaluați rezultatele RTGA cu serurile de diagnosticare ale Coxsackie A și B, ECHO și cultura virusului.
Pentru serodentificarea culturii de virus hemaglutinant, se utilizează RTGA cu seruri de diagnostic diluate 1:10 și cultură de virus la o doză de 4 AE.
Pentru a verifica fiabilitatea rezultatelor RTAC puneți comenzile:
- controlul eritrocitelor pentru absența aglutinării spontane;
- Controlul serului pentru absența factorilor de aglutinare nespecifici;
- au controlat proprietățile de hemaglutinare ale culturii obținute a virusului.
Având în vedere că enterovirusurile sunt reprezentate de un număr mare de serovari, amestecurile de seruri de diagnostic sunt utilizate pentru tastarea lor. Schema lui Lim și Benshu-Melnik implică utilizarea a 8 amestecuri de ser pentru introducerea a 42 serotipuri de enterovirusuri (vezi tabelul 1). Dacă tulpina nu este neutralizată de aceste amestecuri, serurile sunt utilizate pentru alte enterovirusuri. De exemplu. virusul izolat este neutralizat amestecurile B și D și F. general neutralizat amestec pentru amestecurile B și D sunt seruri numai împotriva Coxsackie B2 și echovirus 26. Considerând că un amestec de F, conținând numai virus ser echovirus 26 nu exercită un efect de neutralizare trebuie , că virusul izolat este virusul Coxsacki B2.
Pe baza rezultatelor obținute, faceți o concluzie, completați formularul de trimitere și formularul de răspuns de la laboratorul virologic.
Compoziția amestecurilor de seruri de diagnosticare pentru enterovirusurile de tiparire