II. REVIZUIREA LITERATURII 7
2.1. Poziția taxonomică, distribuția și proprietățile biologice ale Staphylococcus hyicus 7
2.2. Rolul Staphylococcus hyicus în patologia animalelor de fermă și a păsărilor 23
2.3. PCR este o metodă de identificare a Staphylococcus hyicus.
III. PROIECTUL CERCETĂRII PROPRII 33
3.1. Materiale și metode de cercetare 33
3.2. Izolarea Staphylococcus hyicus din diverse surse 58
3.3. Proprietățile biologice ale culturilor izolate Staphylococcus hyicus 60
3.3.1. Proprietățile morfologice și cultura - biochimice ale Staphylococcus hyicus 60
3.3.2. Studiul factorilor patogeni ai Staphylococcus hyicus 64
3.3.3. Studiu de patogenitate al Staphylococcus hyicus pentru porci și animale de laborator 69
3.3.4. Sensibilitatea culturilor de Staphylococcus hyicus la agenții antimicrobieni 76
3.4. Rezultatele reacției în lanț a polimerazei în dezvoltare
Metoda de identificare a S. hyicus pentru detectarea genei soda species-
superoxid dismutaza superficială 78
IV. DISCUȚIA REZULTATELOR OBȚINUTE 84
VI. OFERTE PRACTICE 96
VII. LISTA REFERINȚELOR 97
Introducere la locul de muncă
Actualitatea subiectului. În prezent, creșterea eficienței producției de porcine este împiedicată de prezența unor boli infecțioase, dintre care multe sunt încă insuficient studiate.
În Europa, epiderma exudantă a porcilor din anii '60 și '70. Ultimul secol a dus la pierderi economice destul de mari în producția de porcine (E. Sieverding, 1988), deși astăzi problema este încă nerezolvată.
Boala este Staphylococcus hyicus, care a fost izolat pentru prima dată, este descris și numit D. Sompolynsky în 1953 ca Micrococcus epidermidis, iar la capătul 70-e ai secolului trecut a fost recunoscută oficial ca o specie separată din această familie de stafilococi (L. Devriese și colab., 1978).
Studiul complex al proprietăților biologice ale stafilococilor și substanțelor biologic active produse de acestea subliniază ideea patogenezei bolilor pe care le provoacă și reprezintă baza pe care se dezvoltă în continuare diagnosticarea și dezvoltarea regimurilor de prevenire și terapie.
În țara noastră, studiile privind proprietățile biologice ale Staphylococcus hyicus nu au fost realizate în mod adecvat și rolul său în etiologia bolilor infecțioase a porcilor nu a fost complet studiat.
Scopul și obiectivele cercetării. Scopul lucrării noastre a fost studierea proprietăților biologice ale Staphylococcus hyicus și a rolului său în patologia porcilor. În urma acestui lucru, au fost stabilite următoarele sarcini:
1. Să studieze ecologia, proprietățile biologice și sensibilitatea culturilor izolate de Staphylococcus hyicus la agenții antimicrobieni.
2. Să studieze proprietățile patogene ale Staphylococcus hyicus pentru purcei.
3. Să studieze factorii patogeni ai culturilor izolate de Staphylococcus hyicus.
4. Dezvoltarea unei metode de identificare a Staphylococcus hyicus prin reacția în lanț a polimerazei.
1.3. Noutatea științifică. Au fost realizate studii privind izolarea Staphylococcus hyicus din diverse surse, inclusiv cele din pielea purtătorilor de epidermă sănătoși și exudativi, precum și din alte specii de animale.
Au fost studiate proprietățile biologice și sa determinat in vitro sensibilitatea a 40 de tulpini de Staphylococcus hyicus la 17 preparate antimicrobiene.
Factorii patogeni ai acestor bacterii au fost studiați.
Pentru prima dată în Federația Rusă a studiat izolează S. hyicus reacția în lanț a polimerazei pentru prezența genelor care determina sinteza de toxine exfoliative exhA, exhB, exhC și exhD.
Am constatat ca tulpini de Staphylococcus hyicus, izolate de la porci cu semne de epidermitis exudativă ferme genei regiune Belgorod cuprind exhD, determină sinteza toxina exfoliativă D.
O metodă de identificare a Staphylococcus hyicus a fost dezvoltată pentru a detecta o reacție în lanț a polimerazei genei sodA a superoxid dismutazei specifice speciilor.
Valoarea practică a lucrării. A fost demonstrată transportul Staphylococcus hyicus cu mai multe specii de animale de fermă (porci, bovine și, de asemenea, păsări de curte), iar rolul Staphylococcus hyicus în patologia porcilor a fost dovedit.
O metodă de identificare a Staphylococcus hyicus a fost dezvoltată pentru a detecta o reacție în lanț a polimerazei genei sodA a superoxid dismutazei specifice speciilor.
1.5. Aprobarea muncii. Materialele tezei sunt raportate la:
1.7. Volumul și structura disertației. Teza este prezentată în 116 pagini de text tipărite și include o introducere, o revizuire a literaturii, o cercetare proprie, discutarea rezultatelor, concluzii, sugestii practice și referințe. Lucrarea este ilustrată printr-un singur grafic, o dentogramă, patru figuri, 10 tabele și 8 fotografii. Lista literaturii folosite cuprinde 193 de surse, din care 175 sunt străine.
Poziția taxonomică, distribuția și proprietățile biologice ale Staphylococcus hyicus
În prezent, genul Staphylococcus, împreună cu alții mai puțin cunoscuți,
Stafilococii - este fix, catalază, cocci tranzitivitatii Gram-negativ, variind în mărime de la 0,6 până la 1,3 microni în frotiuri aranjate aleatoriu în perechi, în tetradelor sau clustere formează ciorchinilor sunt aerobi și anaerobi facultativi (R. Killper -Baelz și K . Schleifer, 1981; R. De la Fuente și colab 1985 ;. K. Schleifer, 1986).
Stafilococi ca agenți patogeni ai bolilor animalelor
Sa demonstrat că trei specii principale de coagulază pozitive de stafilococi joacă un rol principal în patologia animalelor: S. aureus, S. intermedius și S. hyicus.
S. aureus este cauza leziunilor cutanate la diferite specii de animale, provocând diferite tipuri de pioderme și flegmon. Deseori, Staphylococcus aureus cauzează în măduva acută și cronică a bovinelor mici și mari, uneori ajungând la o formă gangrenă.
Rolul Staphylococcus hyicus în patologia animalelor de fermă și a păsărilor
Patogeneza. L. Johnes (1956, 1961) și H. Behrens (1958) descriu epidermă exudative atât dermatita generalizate spontan, care apar obține porcii bolnavi cu vârsta cuprinsă între 5 și 35 de zile. Există trei forme posibile ale bolii:
o formă hiperacută la care moartea survine trei până la cinci zile după declanșarea manifestărilor clinice;
formă acută, cu manifestări clinice mai puțin intense și cu debutul morții animalului în decurs de cinci până la opt zile;
forma subacută de trei până la patru săptămâni și, de regulă, nu duce la moartea porcilor (L. Johnes, 1956).
Modificări patologice și anatomice. Modificările patologice ale epidermei exudative se concentrează în principal în straturile superioare ale pielii.
Potrivit L. Johnes (1956) și N. Underdahl et al. (1965), veziculele roz mici care apar pe piele la începutul bolii sunt adesea localizate pe maxilarul superior al purceilor, deasupra ochilor, în apropierea urechilor, în zona inghinala. Odată cu apariția bolii, ele pot apărea pe membrele posterioare și pe abdomen.
Mai târziu, apar uscate, de la crustele galben-maronii până la maro, ușor separate de corp. Examinarea histologică a afectat pielea exudativa Ecuyer epidermitis L și Jericho (1966) a găsit distrugerea conexiunilor intercelulare, precum îngroșarea epidermei în șase - șapte ori. Astfel de modificări patologice sunt similare cu schimbările în parakeratoză.
Studiile unor oameni de știință indică dezvoltarea epidermei exudative la porcii cu poliartrite.
Diagnostic diferențial. În primul rând, epiderma exudativă trebuie diferențiată de alte boli caracterizate prin leziuni ale pielii, cum ar fi varicelă, parakeratoză, leziuni cutanate fungice.
Izolarea Staphylococcus hyicus din diferite surse
Examenul bacteriologic pentru selecție S. hyicus supuse la 371 de material de testare din animale diferite, ambele patologii, și fără ele, inclusiv 328 probe de la animale de fermă (porci, porci și vaci), 30 probe de la păsări (30 găini la vârsta de 360 - 420 de zile), 13 probe de la câini.
Prezența Staphylococcus hyicus investigat: pilitură de purcei pielii cu semne de epidermitis exudativă (78 probe) și purcei sănătoși (56 probe) spălări cu porci conjunctiva (43 probe), tampoane de cavitatea vaginală scroafe nici un semn de patologie (33 probe), soluțiile de spălare tetină (33 de probe) de la vaci mastitic mânjiți mucoasei cavității nazale a porcilor (24 probe), probe de la organele interne ale porcilor căzuți și sacrificate cu semne de epidermitis exudativă (11 probe) și pneumonia (6 probe), mostre de lapte (9 eșantioane) de la pacienți cu mastită de vaci și puroi Robe (9 probe) de la pacienți cu vaci endometrita.
In plus, au fost examinate spălări conjunctivei și frotiuri gura (30 probe) de pui fără patologie, puroi, înfășurate conținut de la câini (5 probe) și vaci (11 probe), pilitură de piele de câini (8 probe) și vaci (15 probe) fără patologie.
Tabelul 4 prezintă caracteristicile tulpinilor studiate de speciile de animale din care sunt izolate, sursa izolării și manifestările clinice, în cazul în care aceste date le-am avut.
După cum se poate observa din tabel, majoritatea tulpinilor studiate (36 sau 78%) au fost izolate de la porci și porci, dintre care 18 tulpini (42%) de la porci cu semne de epidermită exudativă. De la vaci cu semne de mamite clinice și endometrite subclinice alocate și 4 (8,6%), cultura S. hyicus, pasăre fără patologie - 1 (2,2%), de la câinii fără patologie - 1 tulpină (2,2%). În plus, trebuie remarcat faptul că, atunci când s-a prelevat materialul de plasture din pielea porcilor cu epidermă exudativă, excreția acestui stafilococ a fost de 100%.
Semnificația patogenetică a tulpinilor obținute de noi pentru cercetare din Germania, din păcate, nu a fost cunoscută. Dintre cele 26 de tulpini izolate în Rusia, numai patru tulpini (15,4%) au fost obținute de la animale fără manifestări clinice evidente ale unor boli.
Studiul proprietăților biologice ale culturilor izolate X hyicus a arătat că acestea posedă multe proprietăți caracteristice altor membri ai genului Staphylococcus.
În această lucrare, proprietățile biologice ale 43 de culturi
S. hyicus, 26 dintre care au fost izolate în diferitele noastre șeptel / 25 tulpini și / păsări de curte / 1 tulpină / ferme din regiunea Belgorod, iar 17 au fost obținute de la Laboratorul de Igiena Institutul de bacteriologie și boli infecțioase ale animalelor de fermă Justus Liebig University (Giessen, Germania) .
Culturile de S. hyicus izolate din diferite animale și păsări, în funcție de proprietățile lor culturale, morfologice, biochimice și patogene, corespundeu genului lor.
Practic ele cresc culturi pure, mai ales atunci când placarea primară a materialului pe nutrienți elective media (VSA, ENA), care au fost mai favorabile în comparație cu convenționale (agar cu sânge, IPA) mediu. Culturile în trecut a fost uneori însoțită de poluare și dificultatea de culturi stafilococilor mai curat otvivki uneori necesare pasaje suplimentare pe SAE sau VSA. Proprietățile morfologice ale frotiurilor colorate prin colorare Gram, S. hyicus reprezentat de coci (diametru 0.6-1.2 m) au fost amplasate clustere dezordonate, forma mai asemănătoare cu ciorchini de struguri, cel puțin în perechi sau tetradelor, sporii imobili și nu capsule formate, colorante aniline bine pictate, Gram-pozitive. Pe morfologia S. hyicus, numărul de pasaje pe media nu a fost afectat.
După izolarea culturilor pure de stafilococi, au fost determinate proprietățile lor biochimice și culturale. Rezultatele acestor studii sunt prezentate în Tabelul 5.
Culturile de S. hyicus nu au fost termofile, adică nu au crescut la o temperatură de + 45 ° C, s-au dezvoltat încet și lent la o temperatură de + 15 ° C.