6.7. ORIENTĂRI METODOLOGICE PRIVIND DIAGNOSTICELE LABORATORII PATURILOR DIN ISLAND
1. Dispoziții generale
1.1. Diagnosticul de laborator al variolei include: detectarea materialului patogen în particulele virale; izolarea virusului de materialul patologic la embrionii de pui (CE); stabilirea unui eșantion biologic (în cazuri îndoielnice).
2. Selectarea și pregătirea materialului
2.1. 5. Laboratorul veterinar a trimis 5.6 păsări clinic bolnave sau căzute (găini, curcani, porumbei, canari etc.).
2.2. De la porumbei proaspeți sau de la leziunile membranelor mucoase ale păsărilor, pe diapozitive se pregătesc amprente subțiri pentru examinare microscopică. În același timp, un material patologic (epiteliom, acoperire difterică) este selectat pentru a izola virusul.
2.3. Materialul patologic selectat este triturat cu grijă într-un mortar cu sticlă spartă sterilă și se prepară o suspensie de 10% în soluție salină fiziologică sterilă la pH 7,2. 7,4, care este apoi tratat timp de 12 ore la 4 ° C cu un amestec de 500 U / ml penicilină, 250 ug / ml streptomicină și 50 U / ml nistatină. După acest tratament, suspensia este centrifugată timp de 10 minute la 1500 rpm și însămânțată pe MPB, MPA pentru a exclude contaminarea bacteriană.
3. Detectarea particulelor de virus
3.1. Pentru detectarea particulelor virale variola frotiul preparat (2.2), se usucă în aer înainte de vopsire 10. incubate timp de 15 min în apă distilată și se colorează prin placare cu argint sau prin metoda Morozov Paschen (vezi. Application).
3.2. Examinarea microscopică a frotiu (pata pe Morozov), pe un fundal de preparate de culoare brun deschis a aratat particule virale variola sub forma unor formațiuni mici, rotunde de culoare brun închis sau negru, aranjate individual, în perechi, lanturi scurte sau clustere; atunci când agenții de colorare în prezența Paschen variola particule virale în domeniul microscop de vedere văzut formarea de mici rotunjite de culoare roșu închis.
4. Izolarea virusului poxpox pe TBE
4.1. Virusul poxpox este izolat la 10. FE de 12 zile, obținut dintr-o fermă care nu prezintă boli infecțioase ale păsărilor.
4.2. Din suspensia obținută și prelucrată 10% liber de microfloră contaminare, suspensie suplimentară a fost preparată în soluție salină 10 și 10, iar apoi fiecare diluție într-un volum de 0,2 ml inoculate pe membrana corioalantoica (HAO) de 4 embrioni. După infecție, CE este incubat timp de 6 zile într-un termostat la 36,5. 37 ° C și umiditate relativă 60. 70%. Embrionii sunt înnobilați zilnic. CE, care au murit în primele 48 de ore după infectare, nu iau în considerare (moartea nespecifică). Embrionii care au murit la 3-b ore mai târziu și tot în viață rămasă în ziua 6 după infectare, se răcește într-un frigider la 4 ° C timp de 4. 5 ore, apoi deschise și starea lor de navigare HAO. În cazurile pozitive, izolate sau fuzionate pockmarks sunt găsite pe KhAO.
4.3. În cazul în care se găsește o variola pe HAO, trebuie avut în vedere că virusul varicelor provoacă formarea unor mici leziuni plate pe HAO, uneori extinse, albicios în culoare; virus de variolă variolă - mare cu focare bulbică de focuri de leziuni, uneori îngroșare semnificativă și edem ca și jeleu al întregului XAD (un fel de meduze); virusul variolei de curcani formează focare slabe ale leziunilor variolei pe XAO, adesea înconjurat de o zonă inelară; atunci când virusul infectează chanterelles variolei la KhAO, ele detectează leziunile primare difuze și cele secundare sub formă de mici puncte albicioase.
Din HAO leziuni pox face frotiurilor subțiri sau pete pe lamele și se colorează prin placare cu argint sau prin metoda Morozov Paschen pentru detectarea virusului în ei (variola) particule (cm. Aplicare).
În cazul ambiguității rezultatelor obținute atunci când virusul este izolat în primul pasaj, se efectuează al doilea pas secvențial al virusului de testare.
5. Setarea unui eșantion biologic
5.1. Un eșantion biologic este plasat în cazurile în care se obțin rezultate îndoielnice ale studiilor de pete-scrise (punctul 2.2) și atunci când virusul este izolat pe CE.
5.2. Bioprohiba se efectuează la puii de vârstă de 3 luni, care nu sunt imuni la virusul variolei, din ferme care sunt sigure pentru bolile infecțioase ale păsărilor.
5.3. Suspendarea materialului preparat așa cum este descris în secțiunea 2.3, ușor frecarea suprafeței nivelate și creasta tibiei în foliculi imediat după smulgere pene.
5.4. În prezența în materialul variolei aviare prin 5. 6 zile după infectare pe creasta apar epiteliom tipic, dar pe tibie - foliculita tipic variola. Examinarea microscopică a frotiurilor preparate din epiteliul creasta sau șoldului și foliculi bolnave colorate prin metoda sau metoda Morozov Paschen expune argintare variola particule virale.
6. Diagnosticul de laborator al variolei este considerat stabilit în următoarele cazuri: detectarea în frotiuri-imprimate dintr-un material patologic al particulelor de fecale virale; alocarea agentului cauzator al variolei la CE; obținerea rezultatelor pozitive ale unei probe biologice.
7. Termeni de cercetare: microscopic - 1 zi; izolarea virusului pe CE - 6 zile; în timpul celui de-al doilea pasaj - 12 zile; test biologic - 8 zile.
1. Metoda de colorare a particulelor elementare
1.1. Colorarea de către Morozov. Se prepară trei reactivi:
- Reactiv 1 N (Ruge lichid): 1 ml acid acetic glacial, 2 ml de 40% formaldehidă, 100 ml apă distilată și 1 ml de acid carbolic lichid;
- reactiv nr. 2: 5 g tanin, 100 ml apă distilată și 1 ml acid carbolic lichid;
- Reactivul nr. 3: Se dizolvă 5 g azotat de argint cristalin în 100 ml apă distilată; din această soluție într-un vas separat este turnat 20 ml. La 80 ml din soluția de azotat de argint rămas, se adaugă prin picurare o soluție de amoniac 25% până când precipitatul brun gălbui rezultat și apoi precipitatul negru maroniu se dizolvă și rămâne doar opalescența ușoară. Dacă adaosul de amoniac nu se termină în timp, se ia o soluție de azotat de argint (de la 20 ml) și se adaugă prin picurare până când apare opalescența ușoară. Pentru colorarea preparatelor, reactivul gata este diluat cu apă distilată într-un raport de 1:10.
În formulările preparate (punctul 3.1) este aplicat reactivul N 1 (lichid Ruge), care după 1 min esorează, se spală cu apă distilată și reactiv decapată N2 în timpul încălzirii la o flacără până când lampa spirit fum (1. 2 min). Apoi, după spălare cu formulări de apă acoperite cu un strat de hârtie de filtru și tratat cu reactiv 3 N cu încălzire ușoară până la frotiurilor nu capătă o culoare maro închis, după care au fost din nou spălate bine cu apă distilată, și vizualizate în sistemul de imersie microscop uscat cu aer.
1.2. Vopsirea pe Paschen. Pentru preparatele colorante conform metodei Paschen soluție preparată anterior de mordant Leffler, constând din 20% soluție apoasă de tanin - 100 ml dintr-o soluție apoasă saturată de fier feros sulfat de amoniu - 50 ml dintr-o soluție alcoolică saturată de fucsină de bază - 10 ml. Înainte de vopsire, soluția a fost filtrată, se pune pe droguri, usor încălzite până la vapori și lăsat să se răcească timp de câteva minute; apoi clătiți cu apă distilată și aplicați preparatelor carbolice fuchsin Tsilya; se încălzește ușor până când vaporii lăsat să se răcească și apoi se spală cu apă distilată, și vizualizate în sistemul de imersie microscop uscat cu aer (1).
Orientări metodologice pentru diagnosticul de laborator al varicelor mici
Tip document: