METODE DE DIAGNOSTIC
INFECȚII VIRALE.
VIRUSELE FLU. SARS
Surikova E.V. - Ph.D. profesor asociat
Microbiologia, imunologia și virologia,
Direcții metodice
Detectarea virusului sau a componentelor acestuia
direct în materialul clinic,
luate de la pacient (diagnostic rapid);
Izolarea virusului din materialul clinic
și identificarea sa;
Serodiagnosticul infecțiilor virale;
Alegerea metodei de diagnosticare de laborator
depinde de:
Privind natura bolii;
Medicul patogen anticipat;
Din perioada bolii;
Cerințe privind colectarea, stocarea și livrarea
din materialul studiat
Termeni optimi pentru luarea materialului;
Alegerea unei probe depinde de patogeneza bolii;
Este necesar să se ia sânge în stadiul acut al bolii;
Alegerea probei depinde de diagnosticul clinic preliminar;
Probele sunt prelevate în conformitate cu regulile sticlelor aseptice sterile
cu capac cu șurub;
Probele sunt ținute umede și în frig (nu se îngheață); poți
utilizați un mediu de stabilizare (mediul Hanks etc.);
Livrarea se face cât mai curând posibil. Dacă timpul
livrarea depășește 30-40 de minute și nu va fi efectuată imediat
, eșantioanele sunt congelate la -80 ° C în gheață uscată sau
este plasat în azot lichid la -180 ° C;
Mostrele sunt etichetate și însoțite
documentul;
Metode de diagnosticare a infecțiilor virale
1.
2.
3.
4.
Citologie (diagnostic rapid);
virusologice
serologic
Moleculară genetică
Metode de diagnosticare rapidă
Metode exprese;
accelerat
metode;
Metode expres pentru diagnosticarea viralului
infecții
Malospetsificheskie
♦ Taurul
• Паша
• Aragon
Taurul Babes-Negri
♦ Incluziile intracelulare
• nucleare (de exemplu pentru infecția cu adenovirus)
• citoplasmatică (de exemplu, Babesha Negri)
♦ Detectarea virionului în probe
• EM (oferă un răspuns în decurs de o oră);
• EIM (oferă un răspuns în 2-3 ore);
Potrivit pentru o companie, adeno, hepadna, paramixo,
orthomixoviruses și altele.
Metode expres pentru diagnosticarea viralului
infecții
Foarte specific
Identificarea AG viral în probele: RIF,
ELISA, RNGA, RIA, reacție de precipitare în
gel (2 până la 24 ore);
Detectarea anticorpilor antivirus timpuriu IgM:
RNGA, RONGA, IFA, RIA etc;
Identificarea enzimelor virale în testul MG;
Identificarea ND: PCR;
RIF cu patologie
material
Metode accelerate
Identificarea AH viral în cultura celulară prin
24 după acumulare.
Metode retrospective
Metoda virologică;
serodiagnosis;
Metoda virologică
etape:
Cultivarea (acumularea) virusului;
Detectarea virușilor (detectare);
Tastarea (identificarea virusului);
Utilizați pentru metoda virologică
embrion de pui
5-7 zile, rareori 10-11 zile
principalele metode de infecție:
indicații:
pe membrana alanto-corionică
în cavitatea corono-alantoică
în cavitatea sacului de gălbenuș
în cavitatea amnionului
în corpul embrionului
moartea unui embrion
modificări morfologice în embrion / membrane
DGA cu lichid din cavitățile embrionului de pui
de identificare:
RN (inclusiv RTGA)
RSK
Utilizați pentru metoda virologică
culturile de celule
Cel mai adesea - monostrat transpus
indicații:
Efectul citopatic al virușilor este oricare
schimbarea celulelor monostrat, inclusiv formarea plăcilor
și o probă de culoare)
activitatea hemoadsorbent a monostratului (PGAbs)
REEF (= identificare)
de identificare:
РН (inclusiv РТГАдс)
RSK
RIF
INFLUENZA VIRUSES
Orthomixoviruses -
Gr. orthos - corect,
mixa - mucus
Orthomixoviruses: clasificare
Orthomyxoviridae
Influenzavirus
virusul gripal A
virusul gripal B
virusul gripal C
Orthomixovirus: caracteristic
familie
tipul de simetrie spirală
includeri citoplasmatice
replicarea nucleară
Orthomixoviruses: principala metodă
cultivare
embrion de pui
amnionic
alantoida
afișa
RGA
identificare
RSK
HIT
Orthomixoviruses: structura virionului
nucleu (nucleocapsid)
ARN (A și B-8, C-7)
proteine structurale
(nucleocapsid) - A, B sau C
enzime
superkapsid
proteina M
stratul bilipid
spine (glicoproteine - gp)
Hemaglutinina (H) - Inducție
virus neutralizarea Ig,
adsorbție
Neuraminidază (N) - detașare la
care înmugurește
Serotipurile virusului gripal A
(conform clasificării OMS din 1980)
formulă
perioadă
circulație
remarcă
H1N1
1918 - 1957
până în 1947 - H0N1
H2N2
1957 - 1968
asiatic
H3N2
din 1968
Hong Kong
H1N1
din 1977
rusă
Orthomixoviruses: variabilitate antigenică
și consecințele acesteia
antigenic
derivă
(De la 1 la 2 ani)
schimbare
(10-15 ani)
?
A
(și H și N)
În
(H)
mutații punctuale în gena
C
(Nr)
acumulare
derivă
recombinarea a două
înlocuirea genei complete
acumulare
schimbarea gp
subtip modificarea gp
Sensibilitate la factori
mediul extern al virusului gripal A
56 ° C
Raze UV
dezinfectanți
detergenti
Trăsături distinctive ale virusului
gripa C
1.
2.
3.
4.
ARN are 7 fragmente
nici o neuraminidază (un tip de spini)
Spițele sunt situate pe suprafață
virion nu este aleator, ci cu stricte
orientare hexagonală
Pentru adsorbție pe o celulă, altul
tip receptor
Gripa: epidemiologie și caracter
morbiditate
clinică
oameni
asimptomatice
aerosoli
pandemie
A
epidemie
În
local
bliț
C
sporadic
morbiditate
Gripa: patogeneza
căile respiratorii epiteliul
sângele
alergie
intoxicație
nodulus
endoteliu
capilare
hemoragie internă
organisme
limfocite
imunodeficientei
complicații bacteriene
Gripa: Imunitate
Puternică și de lungă durată, dar
strict specifice
umoral
celular
IFN
NK
ig
macrofage
Igaș
T
- local
anti-H neutralizare
anti-N-
răspândire
k
Influenza: imuno- și chimioprofilaxia
imunizare
vaccin
trăi
mort
chimic
imunoglobulinei
IFN
chemoprofilaxie
rimantadina
gripa A
etapa inițială
Diagnosticul virologic al gripei
1.
2.
3.
Diagnosticarea rapidă
RIF: Ag în epiteliu
Metoda virologică (primele zile)
nazofaringiene
embrion de pui
WGA - indicație
RAC - tip
RTGA - subtip
Metodă serologică
anticorpi în serurile pereche (ch / s 8-14 zile) - RSK, RTGA
VIRUSELE TRANSMISE DE AEROPORT CU RUTIERE (ARVI)
SARS
a. Paraxnyxoviridae
п / с Paramyxovirinae
p. Respiratorii (HPVC-1, -3)
p. Rubulavirus (HPVC-2, -4a, -4b)
p / s Pneumovirinae
p. Pneumovirus (virus RS);
a. Coronaviridele
p. Coronavirus (mai mult de 10 specii)
a. Reoviridae
p. Orthoreovirus (3 stenograme)
a. Picornaviridae
p. Rinovirus (2 specii, 100 serovari)
p. Enterovirus (virusuri Coxsackie și ECHO);
a. Adenoviridae
p. Mastadenovirus (80 specii)
a. Paraxnyxoviridae
п / с Paramyxovirinae
p. Rubulavirus (virus
oreion);
p. Morbillivirus (virus rujeolic);
a. Togaviridae
p. Rubivirus (virusul rubeolei)
Manifestări ale ARVI
SARS
Secțiunea superioară
tractul respirator
Rinita (rinocerul și coronavirusul),
faringita (corona, paramixo,
adenovirusuri)
Divizia inferioară
tractul respirator
Bronșită și bronșiolită
(RS -virusy)
pneumonie (gripă,
parainfluenza)
morfologie
• Coajă mare
viruși (150-300 nm)
• Tip de spirală
simetrie
• Nucleocapsid
răsucite într-o spirală
• Unicat
unsegmented
minus ARN
Paramyxovirus: caracteristic
glicoproteine (spinare supercapsid):
- HN - neuraminidază și
activitatea de hemaglutinare
- F - fuziunea membranelor (simplast,
syncțiu), hemoliză
replicarea este efectuată în întregime în
citoplasma
poate forma
includeri citoplasmatice
Proteine și glicoproteine
• hemaglutinine și
neuraminidaza (în HPVC și HPV)
virusul oreionului, în SM -
sunt absente)
• Glicoproteina F (Fusion -
fuziune)
• proteină M
• Proteinele de polimerază
complex (L, P)
Parainfluenza virus: proprietăți
5 serotipuri (dominant
VPGCH-3)
hemaglutinare
activitate
CPP
depinde de serotip
Paragripp: patogeneza
epiteliul nazofaringian
sângele
pneumonie
(copii sub un an)
ARI
Paragripp: imunitate
tip specific
scurt
(disponibil
reinfectarea este aceeași
serotip)
parainfluenza:
diagnosticul virologic
1. Diagnosticarea rapidă
Ag în celulele pasajele nazale (RIF, ELISA)
2. Metoda virologică
nazofaringiene
▼
cultura de celule
▼
RGAs, CPA
▼
RSK, RTGA, RN
3. Metoda serologică
anticorpi în "seruri pereche" (RTGA, RSK, PH)
Pneumovirus: Proprietăți
se caracterizează prin formarea de sincițiu
absenta absoluta:
-
-
glicoproteine de suprafață:
-
-
hemaglutinarea și hemadsorbția
activitate
activitatea neuraminidazei
G - adsorbția
F - fuziunea membranelor (penetrare) și
formarea synctiului
2 serotip (PH)
Virusul sincițial respirator:
epidemiologie
• Cauzează patologia părților inferioare
tractului respirator la copiii sub 3 ani.
• Cel mai mare număr de boli grave au loc în
vârstă 6 săptămâni - 6 luni (bronșiolită, pneumonie)
• În caz de infecții repetate, aceasta își pierde
agresivitate
• Calea principală este contactul, aerogen
Patogeneza infecției cu RSV (sincițial respirator
virus)
cale aerosol
ARI (adulți)
epiteliu al mucoasei superioare
tractul respirator
pneumonie (copii)
imunosupresia
complexe imune
complicații bacteriene
Imunopatologie
CORONA VIRUSES: clasificare
Coronaviridele
om
animale și păsări
SARS
(SARS)
enterală
respirator
(extrem de contagioasă)
etimologie
SARS - severă severă
sindromul respirator
(SARS - Respirator acut sever
Sindromul)
Coronavirusuri: Proprietăți
• Organizat complex
Dimensiuni de 100-150 nm
• Tip de simetrie spirală
• glicoproteinele E2 - un peptomer și
E1 - transmembrană
• Unicat
non-segmente plus ARN
• 4 serogrupuri (PH) - nr
imunitate încrucișată
• Practic nu este cultivat
coronavirusuri:
rol în patologia umană
respirator
b / simptomatic
ARI
bronșită
pneumonie (copii sub 2 ani)
ani)
SARS (SARS)
enterală
gastroenterită (copii)
Diagnosticul ARVI cauzat de
coronavirusuri
• Diagnostice rapide: (RIF pentru detectarea AH în
celule ale epiteliului VAD)
• Serologic (DSC, RTGA, RN în scopul
serodiagnosis)
• Molecular-genetice (PCR) pentru determinarea
prezența ARN viral
Adenovirusuri: compoziție familială
Adenoviridae
• Aviadenovirus - virusuri aviare
• Mastadenovirus - virusuri de mamifere
• serotipuri (RTGA)
adenovirusuri:
caracteristică generală
• Simple DNA-new virions
• 252 capsomeri
• din 12 noduri de icosaedron - fibre
(Subiect)
• antigeni:
• grup specific
(nucleocapsid) - RCC
• tip specific
(filamente = hemaglutinine) -
RTGA, RN
Infecții adenovirale: patogeneză
reproducerea primară
epitelilocite ale mucoasei
• tractul respirator
• intestine
conjunctivă
țesutul limfoid
• amigdalele
• ganglioni limfatici mezenterici
▼
sângele
▼
vascular endothelium
▼
inflamația exudativă a membranelor mucoase
▼
fibrele fibroase, necroza
Infecții adenovirale: forme clinice
• ARI
• febră faringoconjunctivală
• pneumonie (copii, vârstnici)
• conjunctivită (kerato-)
• gastroenterită
• leziuni rare adenovirale
• meningoencefalita
• cistita hemoragică
Infecții adenovirale: consecințe
transplacentare
boala intrauterină
anomalii fetale
pneumonie mortală la nou-născuți
Infecții cu adenovirus: virologice
diagnosticare
1.
2.
3.
Detectarea Ag în epiteliul respirator (RIF).
Izolarea virusului
nasul detașabil, gâtul, conjunctiva, fecalele
▼
cultura de celule
▼
RSK
▼
RN, RTGA
Detectarea creșterii titrului de anticorpi (DSC, RTGA, PH)
Mulțumesc pentru
atenție la
