Metoda de cercetare bacteriologică (BLMI) - o metodă bazată pe izolarea culturilor pure de bacterii prin cultivarea în medii nutritive și identificarea speciilor bazate pe studiul morfologic seric, culturale, biochimice, genetice, chimice, biologice, caracteristicile microorganisme de mediu.
Diagnosticul bacteriologic al infecțiilor se efectuează utilizând scheme standard de diagnostic aprobate de Ministerul Sănătății.
Cultură pură - bacterii dintr-o specie, cultivate pe un mediu nutritiv, ale cărui proprietăți sunt în curs de studiu.
Tulpina este o cultură identificată pură a microorganismelor din aceeași specie, izolate dintr-o anumită sursă la un moment dat. Tulpinile de un tip pot diferi în mod nesemnificativ biochimice, genetice, serologice, biologice și alte proprietăți, precum și locul și timpul de excreție.
1. Afirmația diagnosticului etiologic: izolarea unei culturi pure de microorganisme și identificarea ei.
2. Determinarea proprietăților suplimentare, de exemplu, sensibilitatea microorganismului la antibiotice și bacteriofagi.
3. Determinarea numărului de microorganisme (important în diagnosticul infecțiilor cauzate de UPM).
4. Tastarea microorganismelor, adică identificarea diferențelor intraspecifice bazate pe studiul markerilor genetici și epidemiologici (fagi și seriali). Acest lucru este folosit în scopuri epidemiologice, deoarece ne permite să stabilim comunitatea microorganismelor izolate de la diferiți pacienți și de la diferite obiecte ale mediului extern, în diferite spitale, regiuni geografice.
BLMI include mai multe etape, diferite pentru aerobe, anaerobe facultative și anaerobe obligatorii.
I. Etapele BLMI pentru alocarea unei culturi pure de aerobe și anaerobe facultative.
A.Zabor, transport, depozitare, pre-tratare a materialului. Uneori, înainte de însămânțare, tratamentul selectiv al materialului se efectuează ținând cont de proprietățile microorganismului eliberat. De exemplu, înainte de studiul sputei sau a altui material pentru prezența de Mycobacterium tuberculosis rezistent la acid, materialul este tratat cu soluții de acizi sau alcalii.
B. Semănarea în mediul de îmbogățire (dacă este necesar) Se efectuează dacă materialul conține un număr mic de bacterii, de exemplu, atunci când se eliberează cultura de sânge. Pentru a face acest lucru, sângele luat la o înălțime de febră în volum mare (8-10 ml la adulți, 4-5 ml la copii) este însămânțat în mediu la un raport de 1:10 (pentru a depăși efectele factorilor de sânge bactericid); Cultură este incubată la o temperatură de 37 ° C timp de 18-24 ore.
B. Microscopia materialului de testare. Din materialul testat, se prepară un frotiu, se pătrunde prin gram sau altă metodă și se microscopizează. Evaluați microflora prezentă, cantitatea acesteia. În cursul cercetărilor ulterioare, microorganismele prezente în frotiu primar trebuie izolate.
G. Semănarea pe medii nutritive pentru a obține colonii izolate. Se plantează materialul cu buclă sau spatulă prin separare mecanică pe o farfurie cu un mediu de diagnostic diferențial sau selectiv pentru a obține colonii izolate. După însămânțare, paharul este rotit cu susul în jos (pentru a evita murdărirea coloniilor cu picături de lichid de condensare), semnați și puneți un termostat la 37 0 C timp de 18-24 ore.
Trebuie reamintit faptul că, atunci când se cultivă și replandu-se culturile microbiene, atenția lucrătorului trebuie să fie acordată respectării regulilor aseptice pentru a preveni contaminarea mediilor nutritive și pentru a preveni contaminarea și autoinfecția!
În cazul infecțiilor cauzate de microorganisme oportuniste, care contorizează numărul de microorganisme prezente în materialul patologic, materialul de însămânțare do cantitative, serii de diluție de 100 de ori mai mare a materialului (de obicei 3 diluții) în soluție sterilă de clorură de sodiu izotonică în eprubete prepreparată. După aceea, 50 pl din fiecare diluție se plasează pe medii nutritive în vase Petri.
A. Studiul morfotipurilor coloniilor pe mediu, microscopia lor. Uită-te la cești și notați mediul nutritiv optim, rata de creștere, modelul de creștere al microorganismelor. Pentru a studia, alegeți coloniile tetrisolate, situate de-a lungul accidentului, mai aproape de centru. Dacă mai multe tipuri de colonii cresc - fiecare este examinată separat. Evaluați simptomele coloniilor (Tabelul 7). Dacă este necesar, cupele de însămânțare sunt scanate printr-o lupă sau cu un microscop cu lentilă de mărire mică și o diafragmă conică. Aflați mai multe proprietăți tinctoriale diferite morfotipuri colonii pentru această parte a studiului coloniei prepară un frotiu, Gram colorare sau alte metode, și se determină puritatea morfologiei mikroskopiruyut kultury.Pri Compromisul necesar indicativ al RA pe sticlă cu seruri polivalenți.
B. Acumularea culturii pure. Pentru acumularea în cultură pură morfotipuri toate coloniile izolate au fost subcultivate în tuburi separate, cu agar teșite sau orice alt mediu de creștere și se incubează într-un incubator la 37 0 C (această temperatură este optimă pentru majoritatea microorganismelor, dar pot fi diferite, de exemplu, Campylobacterium spp - +42 ° C, Candida spp., Și Yersinia pestis - + 25 ° C).
Ca mediu de acumulare pentru enterobacterii, mediul Kligler este de obicei utilizat.
Compoziția mediului Kligler: MPA, 0,1% glucoză, 1% lactoză, reactiv acid sulfhidric (sulfat feric + tiosulfat de sodiu + sulfit de sodiu), indicator roșu fenol. Culoarea inițială a mediului este roșu roșu, mediul este "șicanat" în tuburile de testare: are o coloană (2/3) și o suprafață zimțată (1/3).
Semănarea miercuri a lui Kligler se face printr-un accident vascular cerebral la suprafață și o înjunghiere în coloană.
A. Contabilizarea creșterii în mediul de acumulare, evaluarea purității culturii în pata Gram, care marchează modelul de creștere al culturii pure izolate. Cultura vizuală pură se caracterizează prin creșterea uniformă. Atunci când examinarea microscopică a unui frotiu colorat preparat dintr-o astfel de cultură, celulele uniforme morfologic și tontonial se găsesc în diferite domenii de vizibilitate. Cu toate acestea, în cazul pleomorfismului pronunțat inerent anumitor tipuri de bacterii, în frotiuri din cultura pură, pot apărea simultan celule cu morfologie diferită.
Dacă mediul de indicare Cligler a fost utilizat ca mediu de stocare, atunci sunt evaluate schimbările de culoare din coloană și partea conică, care determină proprietățile biochimice: fermentarea glucozei, producția de lactoză și hidrogen sulfurat. Atunci când lactoza este descompusă, partea înclinată a mediului devine galbenă, în timp ce glucoza se descompune, coloana devine galbenă. Când se formează CO2 în timpul descompunerii zaharurilor, a bulelor de gaze sau a unei rupturi în forma coloanelor. În cazul producerii de hidrogen sulfurat, în timpul injecției are loc înnegrirea datorită transformării sulfatului de fier în sulfură de fier.
Caracterul Kligler modificări (Fig. 23), se explică prin inegale de culoare medie microorganisme despicarea intensitatea substanțelor azotate și formarea de produse alcaline sub aerobic (pe suprafața conică) și anaerobă (în bari) condiții.
În condiții aerobe, o alcalinizare mai intensă are loc pe suprafața înclinată decât în coloana mediului. Prin urmare, descompunerea de glucoză, prezentă într-un mediu într-o cantitate mică, acidul format pe suprafața înclinată este neutralizat rapid. În același timp, când se descompune lactoza, care este prezentă în mediu în concentrație ridicată, produsele alcaline nu sunt capabile să neutralizeze acidul.
În condiții anaerobe, în coloană, produsele alcaline se formează într-o cantitate nesemnificativă, deci aici se detectează fermentarea glucozei.
Fig. 23. Mediul indicatorului Kligler:
2 - cu creșterea de E. coli,
3 - cu creșterea S. paratyphi B,
4 cu creșterea T. typhi
E. coli descompune glucoza și lactoza cu gaze, nu produc hidrogen sulfurat. Acestea provoacă îngălbenirea coloanei și a părții teșite cu rupturi medii.
S. paratyphi descompune glucoza cu gaze, cu lactoză negativă. Ele provoacă îngălbenirea coloanei cu lacrimi, partea înclinată nu schimbă culoarea și rămâne purpurie. În acest caz S. paratyphi B produce hidrogen sulfurat (apare o culoare neagră în timpul injecției), S. paratyphi A nu produce hidrogen sulfurat.
S. typhi descompune glucoza fără gaze, lactoză negativă, produce hidrogen sulfurat. Ele provoacă îngălbenirea coloanei fără rupturi, partea înclinată nu schimbă culoarea și rămâne purpurie, apare o culoare neagră în cursul injectării.
Shigella spp. Glucoză-pozitivă, lactoză-negativă, nu produce hidrogen sulfurat. Acestea provoacă îngălbenirea coloanei (cu sau fără pauze, în funcție de serovar), partea zimțată nu schimbă culoarea și rămâne purpurie.
B. Identificarea finală a culturii pure (determinarea poziției sistematice a microorganismului izolat la nivelul speciei sau variantei) și determinarea spectrului de sensibilitate al culturii izolate la antibiotice.
Pentru a identifica cultura pură în această etapă, studiați semnele biochimice, genetice, serologice și biologice (Tabelul 8).
În practica de laborator de rutină, atunci când se identifică, nu este necesar să se studieze toate proprietățile. Folosind teste simple, accesibile, simple, suficiente pentru a determina apartenența speciei (variantă) a microorganismului izolat.