Distingem următoarele metode de bază: microscopice, microbiologice, experimentale, imunologice.
1. Microscopic - studiul microbilor în starea colorată și nevopsită (nativ) cu ajutorul diferitelor tipuri de microscoape. Metoda face posibilă determinarea formei, dimensiunii, locației, elementelor structurale și a relației cu colorarea microbilor. Uneori, în funcție de caracteristicile morfologice caracteristice, este posibil să se determine tipul de microb (ciuperci, protozoare, unele bacterii).
Experimental (biologic) - infecția animalelor de laborator cu microbi. Metoda permite:
evidențiați o cultură pură de microbi care nu cresc bine pe mediile nutritive;
pentru a studia proprietățile patogene ale microbului;
primesc medicamente imunobiologice pentru prevenirea, diagnosticul și tratamentul specific.
4. Imunologică (în diagnosticul infecțiilor) - studiul răspunsului reacțiilor specifice ale macroorganismului la contactul cu microbii.
Ca răspuns la primirea particulelor microbiene (antigeni, Ar) sistemul imunitar genereaza o molecula de proteine specifice - anticorp (AT), capabil să stabilească o transmisie de date en Tigeneh o interacțiune specifică cu formarea complexului AH + AT. Metoda se bazează pe identificarea unor astfel de complexe. Există 2 soiuri ale metodei: metoda serologică și metoda alergică. Metoda serologică se bazează pe detectarea AT în sânge sau în alte fluide folosind AH microbiene cunoscute (diagnosticums). Metoda alergică se bazează pe detectarea hipersensibilității (alergiei) la ingestia repetată a alergenului microbian (AH) în organism. Prezența unui răspuns imun (ca AT sau alergii) indică ședința anterioară a acestui microb: poate omul a fost bolnav cu un corespondent în fektsiey anterior au fost vaccinate sau bolnave în acest moment.
Deseori, formarea complexului AG + AT cu AT cunoscut este determinată de forma culturii pure a unui microb necunoscut, obținută în timpul studiului printr-o metodă microbiologică (identificare prin structura antigenică).
Morfologia și fiziologia metodei microscopice de investigare a microbilor
• Microscop cu lumină cu sistem de imersiune
Pentru a studia microbii într-un microscop, este necesară o creștere de aproximativ 1000. De aceea, microscoape imersiune utilizate de sistem ( „imersiune“ - imersiune) Compoziția sistemului de imersie include o lentilă de imersiune obiectiv (x 90) și ulei de imersie, care umple golul dintre subiectul investigat și lentila frontală a lentilei de imersie. Deoarece indicatorii de refracție ai sticlei și uleiului sunt aproape, acest lucru evită pierderea de raze de lumină datorită deflecției lor și, prin urmare, creează o iluminare optimă a câmpului vizual. Nevoia de concentrare a fasciculului de lumină se datorează și diametrului extrem de mic al lentilei frontale a obiectivului de imersie. Când este microscopic, trebuie reținut faptul că lentilele "sistemului uscat" nu sunt proiectate pentru a fi scufundate în ulei, ceea ce le poate face inutilizabile. Microscopia cu sistemul de imersiune permite studierii microbilor uciși într-o stare învelită (forma, mărimea, poziția relativă, structura celulară bacteriană) și diferențiază un microb de celelalte.
Capacitatea microbilor de a fi colorată prin diverse metode se numește proprietăți tinctoriale.
În unele cazuri (studiul morfologiei fungi, protozoare, și alte relativ facilități de cereale-TION în starea nevopsit vie), folosind un microscop optic cu un camp intunecat de vedere (obiectivele x 40 sau x 8) „picătură zdrobit“ pentru microscopie, preparatele au fost sau „agățat picătură“.
Studiul caracteristicilor morfologice ale microbilor (lungime, lățime, formă) este adesea efectuat pentru a determina specia lor. Dimensiunile microorganismelor celulare variază de la cotele micrometrice (μm, 10-6 m) până la câteva zeci de micrometri. Celulele bacteriene mici au dimensiuni de 1-2, mari de la 8 la 12 microni sau mai mult. Pentru măsurători utilizați un micrometru de ocular (o riglă transparentă încorporată în ocular).
• Microscopul Darkfield (ultramicroscop)
O caracteristică a acestui microscop este prezența unui condensator de câmp întunecat (paraboloid-condensator), care concentrează fasciculul luminos și îl direcționează spre obiectul studiat din lateral. Datorită faptului că razele directe sunt tăiate condensator centrală diafragmă, iar razele piezișe ies la periferia diafragmei, nu se încadrează în obiectivul ultramicroscope un câmp întunecat de vedere. Atunci când este iluminat cu raze oblice de particule vii și non-vii, incl. microbi, o parte din razele reflectate intră în lentilă; În acest caz, se observă o strălucire strălucitoare a particulelor pe un fundal închis. Microscopia întunecată este utilizată pentru a studia mobilitatea microbilor, observarea obiectelor foarte subțiri (spirochete) în pregătirea unei "picături zdrobite".
Acest tip de microscop de lumină ne permite să studiem structura microbilor nevăzători vii (obiecte transparente). Atunci când lumina trece prin celule microbiene nevopsite, spre deosebire de celulele colorate, amplitudinea undelor luminoase nu se schimbă, ci numai schimbarea lor de fază, care nu este detectată de ochiul unei persoane. Schimbarea de fază apare atunci când părțile cu o densitate optică mai mare (ribozomi, nucleoizi) trec prin. Dispozitive speciale: condensatorul de fază și lentilele cu inele de fază vă permit să transformați modificările fazei invizibile în amplitudine vizibilă.
Principiul de funcționare al acestui microscop se bazează pe fenomenul luminiscenței. Pentru a obține imaginea obiectelor, aceștia sunt tratați cu fluorochromi care, atunci când sunt excitați de partea de undă scurtă a spectrului, strălucesc cu culori cu o lungime de undă mai lungă (verde, portocaliu, etc.). Într-un microscop luminos, sunt studiați atât microbii vii, cât și cei uciși (cu un sistem "uscat" sau de imersie). Luminozitatea microscopică permite obținerea unei imagini color contrastante, detectarea unui mic număr de microbi, studierea structurii și compoziției lor chimice, utilizarea metodei de imunofluorescență.
Acest dispozitiv diferă de microscoapele luminoase printr-o putere de rezoluție mult mai mare (aproximativ 0,001 μm) datorită utilizării fasciculului de electroni în locul luminii și în locul celor optice din sticlă - lentile electromagnetice. Într-un microscop electronic se studiază viruși, ultrastructura macroorganismelor uciși.
Pregătirea preparatului pentru examenul microscopic
Culoare pe gram.
Etapa 1 - pregătirea frotiului.
Obiectul de sticlă este ars în flacăra unui arzător de gaz. Creionul de cerneală marchează limitele frotiului viitor sub forma unui cerc de 1-2 cm în diametru și pune paharul pe masă. O picătură mică de soluție sterilă de clorură de sodiu izotonică (ICS) este aplicată la mijlocul cupei printr-o buclă calcificată. Apoi, o cantitate mică de cultură bacteriană este introdusă în această picătură, emulsificată și distribuită într-un strat subțire din cerc. Smeile din culturile de bulion sunt preparate fără aplicarea preliminară a ICH.
Etapa 2 - uscare.
Sticla este lăsată în aer până când umezeala dispare.
Etapa 3 - fixare.
Fixarea este efectuată pentru a ucide microbii, a le atașa la sticlă, pentru a crește susceptibilitatea lor la coloranți. Pentru fixare, diapozitivul (trei curse) este plasat de trei ori pe flacăra arzătorului timp de 2-3 secunde la intervale de 4-6 secunde. Smeile din puroi, sânge, spută, lichid edemat sunt fixate prin imersie în lichide de fixare (acetonă, amestec de Nikiforov). O astfel de fixare evită deformările brute ale obiectului investigației.
Etapa 4 - pictura.
Există moduri simple și complexe (de diferențiere) de colorare. Metodele simple vă permit să evaluați amploarea, forma, locația și aranjamentul reciproc al celulelor. Metodele complexe permit stabilirea structurii microbilor și, deseori, relația lor inegală cu coloranții. Un exemplu de un mod simplu poate servi colorarea fucsin (1-2 minute), albastru de metilen sau cristal violet (3-5 minute), și complex - colorație Gram, Romanowsky-Giemsa, Ziehl-Neelsen.
Metoda de diferențiere a Hrachului
După colorarea acestei metode, unele bacterii sunt colorate într-o culoare violet închis (gram-pozitiv, Gy +). altele - în burgundă-roșu (Gram-negativ, Gr-). Esența acestei metode de colorare este aceea că bacteriile Gy + fixează ferm complexul de gentianviolet și iod fără decolorare cu etanol. Gr-bacterii după decolorare colorate cu fuchsină.
Gy + bacterii cocci
Gy - bacterii cocci