Etapele IVF în desene
Pe fotografie - Catetere pentru transferul de embrioni.
Embrionii selectați pentru transfer sunt plasați sub microscopul electronic într-un cateter și transferați în partea centrală a cavității uterine.
Schema de puncție a foliculilor
Tuburi de testare cu lichid vin la embriologul care caută ovocitele sub microscopul electronic. Funcția foliculilor.
In acest stadiu embriologist examineaza fluidul folicular (conținutul foliculi) pentru prezența celulelor ou (Fig. 4), care este un complex format din celule cumulus (a) celula „coroană radiantă» (b) în mod direct și ouă (e). În acest caz, cele două straturi (a și b) funcționează funcțiile nutriționale și de protecție pentru ou. Rezultată prin înțepare locuri de ou embriologist în „mediu de fertilizare“, preparat anterior pentru cultivare în vas special (vas Petri sau placă) și plasate în incubator. Vasele pentru cultivare sunt marcate cu date individuale ale cuplului și cu numărul de ouă primite.
Durata puncției este de 15-20 de minute.
Fertilizarea și cultivarea embrionilor.
Tratamentul cu sperma înainte de FIV
Un spermatozoid matur cu un cap în formă de pară aplatizat de aproximativ 6 μm lungime și o lățime în segmentul ecuatorial de aproximativ 4 μm. Se compune dintr-un nucleu și un acrosom conținând enzime litice și este situat sub forma unui capac peste jumătatea superioară a capului. Șunca are o lungime de aproximativ 50 μm și începe de la cap în regiunea gâtului, unde se află centriolul și complexul mitocondrial.
Înainte de a intra în ovocite, spermatozoizii depășesc câteva obstacole:
-cumulus, deoarece cumulul se mișcă spre interior, comportamentul spermatozoidului se schimbă dramatic: rata crește dramatic, se produce faza de hiperactivitate;
-ajunge la zona pellucida, unde are loc legarea sa la receptor.
Apoi, există o reacție acrosomală - membrana acrozomă și membrana citoplasmatică a fuzionării ovocitelor, conținutul acrozomului fiind evacuat în loc
legat de zona pellucida și specuzoidul avansează prin membrana ovocitelor, în timp ce este încă în faza de hiperactivitate.
O dată în spațiul dintre zona pellucida ovocitului si membrana de sperma este atașat la receptorii de pe receptorii de membrana ovocitului pe porțiunea ecuatorială a capului sub Acrozom care provoacă reacția cortical conducând la procese ireversibile zona pellucida, făcându-l de netrecut pentru alte sperma. După câteva ore, materialul genetic al ambelor gameți este fuzionat. există un zigot, iar cromozomii sunt pregătite pentru primul clivaj.
A doua zi, ovocitele sunt transferate într-un puț cu un mediu proaspăt și sub microscop aruncăm o privire asupra obiectului de fertilizare.
Pronukleusy apar după 10-16 ore după adăugarea de spermatozoizi și dispar după 6-8 ore de la apariție. Dacă nu pot fi detectate, fertilizarea nu a avut loc. Dacă se observă un pronucleu sau mai mult de două, sa produs fertilizarea anormală.
Fertilizarea embrionolog a avut loc la un moment stabilit prin adăugarea de tuburi, cu un vârf special dozator cu o suspensie sterilă de spermatozoizi motile in ovocitelor „mediu de fertilizare“. Astfel, în funcție de numărul de sperma parametri pot varia 25000 la 100000 pentru un singur ou. Apoi oul (în vasele marcate) plasate în incubator până la atributele de evaluare fertilizare.
Prezența semnelor de fertilizare este efectuată de către embriolog la microscop la 16-20 de ore după procedura de fertilizare (1 zi de cultivare). În același timp, se completează un protocol special, în care sunt notate caracteristicile fertilizării fiecărui ou individual. Pentru o examinare detaliată a ouălor, ele sunt curățate de celulele corona și cumulus prin micro-instrumente speciale și transferate în cupe cu picături individuale de "mediu de zdrobire". Semnele de fertilizare normală sunt prezența în citoplasmă a unei celule ouă fertilizate a două formațiuni de formă circulară, numite pronuclei (Figura 1).
Trebuie remarcat faptul că, atunci când se puncturează, nu toate ouăle obținute pot fi mature și, prin urmare, nu pot fi fertilizate. În plus față de ouăle mature, există încă două etape ale dezvoltării lor - imature și nesănătoase. Imatură citoplasmă ovocitului are „veziculă germinală“ (Figura 2a), în timpul coacerii se dizolvă în ovocitul imatur nu este vizibil (Fig. 1b). Maturitatea oului este indicată de apariția unei entități numite "primul corp polar" (figura 2c)
În acest caz, dacă ovulele mature sunt obținute în timpul puncției, aceasta nu înseamnă că toate acestea ar trebui în mod normal să fie fertilizate. Împreună cu fertilizarea normală, absența fertilizării sau semnele că oul este fertilizat anormal poate fi detectat în ouă. este anormal. În ultimul caz, după examinare, embriologul vede una, trei sau mai multe pronuclei în citoplasmă (fig.3a, b). Ouăle fertilizate în acest mod sunt îndepărtate din procesul de cultivare în ciclul IVF pentru a împiedica transferul în cavitatea uterină a embrionilor derivați din acestea. Acești embrioni pot fi utilizați numai în scopuri de cercetare, de exemplu, pentru a îmbunătăți metodele de cultivare, precum și pentru dezvoltarea de noi sau îmbunătățirea tehnicilor de micromanipulare existente. Principalele motive pentru fertilizarea anormală sunt calitatea ouălor.
Culturing ovocitelor umane și a embrionilor se efectuează în prezența a 5% CO2 în aer la o temperatură de 37 de grade și o umiditate de 80-90%. Aceste condiții sunt îndeplinite atunci când se utilizează un incubator cu CO2 menținând nivelele dorite de temperatură, umiditate și CO2 în camera, care este menținută în camera prin furnizarea de dioxid de carbon dintr-un cilindru, unde este în stare lichidă, iar aerul din mediul înconjurător. Umiditatea este menținută prin evaporarea constantă a apei din partea inferioară a camerei sau dintr-o tavă specială. Unele camere moderne au un sistem de injectare a apei în aerul circulant, menținând automat umiditatea în cameră la 90%.
5. Evaluarea strivirii (dezvoltarea embrionilor)
La 48 de ore după Embriologul puncție evaluează ou fecundat normală prin natura dezvoltării viitoare. Datele cu privire la caracteristicile de dezvoltare (diviziunea) de embrioni stocate într-un protocol embriologică special. Cea mai frecventă clasificare a calității embrionilor în numărul de (blastomeres incorect divid) blastomeres și fragmente prezență prezentat în Fig. 4. Blastomerii embrionilor sunt marcați "b", fragmentele "f". Cea mai bună calitate a embrionilor este marcată „1“, embrionul este de o calitate mediocră „4“. Trebuie înțeles faptul că evaluarea externă nu se poate vorbi despre dezvoltarea potențială a embrionului la 100%, astfel încât, chiar dacă embrionii sunt de o calitate suficientă, pentru a face procedura de transfer de embrioni, deoarece există încă șanse de sarcină și după naștere, deși șansele sunt mai mici decât în embrionii de excelenta de calitate.
Transferul embrionilor în cavitatea uterină.