Hidroliza este descompunerea unei substanțe complexe în constituenți mai simpli, legați de atașarea apei în locul ruperii obligațiunilor. În funcție de catalizatorul utilizat, se disting hidroliza acidă, alcalină și enzimatică. În hidroliza unei proteine simple, numai aminoacizii sunt produse finale. În organism, hidroliza proteinei este în mod constant în proces, atât digestia, cât și activitatea celulară sub acțiunea enzimelor proteolitice.
In hidroliza acidă a proteinelor sunt distruse, unii aminoacizi: triptofan este supus distrugerii totale și serina, treonina, cisteina, tirozina, fenilalanina - parțială. Cu toate acestea, procentul de distrugere a acestor aminoacizi este mic. Hidroliza alcalină a proteinei arată o distrugere mai puternică a aminoacizilor. Hidrolizații de proteine sunt utilizați ca agenți terapeutici.
Lucrarea de laborator nr. 9 hidroliza acidă a proteinelor simple
În hidroliza acidă, proteinele se descompun mai întâi în peptide cu masă moleculară mare, apoi în peptide cu greutate moleculară mică, dipeptide și, în final, aminoacizi.
Hidroliza completă a proteinei are loc în timpul fierberii unei ore de fierbere a soluției într-un balon cu fund rotund, cu un răcitor de aer în prezența acidului clorhidric sau sulfuric.
REACTIVI ȘI ECHIPAMENTE:
1) soluție de albus de ou; 2) HCI, conc.; 3) NaOH, 10%; 4) H2S04. 1%; 5) un balon cu fund rotund cu răcitor de aer; 6) plăci electrice cu plasă de azbest; 7) un trepied.
1. Hidroliza acidă a unei proteine simple. Pentru hidroliză contorizate 20 ml soluție de albuș de ou într-un balon cu fund rotund și 5 ml de acid clorhidric concentrat, balonul a fost închis cu un tub de sticlă lung și fixat pe trepied cu ochiuri de azbest. Conținut fiert (sub draft) 45-90 min.
2. Descoperirea produselor intermediare de defalcare a proteinei în hidrolizat prin intermediul unei reacții biuret. După terminarea tubului de fierbere se toarnă 5 picături de hidrolizat de proteină și se neutralizează cu soluție caustică 10% din turnesolul roșu (bucată de turnesol coborât în tub și apoi se agită cu o baghetă de sticlă). După neutralizarea hidrolizatului (cu litmus albastru), se efectuează o reacție biuret, adăugând 2 picături de CuS04.
Produsele de descompunere intermediare ale proteinelor - peptone - în timpul reacției biuret dau o colorare roz sau roșie, iar proteinele - albastru-violet.
Cu hidroliza completă a proteinei (2,5 ore față de aminoacizii, reacția biuret cu hidrolizatul proteic este negativă.
La sfârșitul hidrolizei, hidrolizatul este utilizat pentru lucrările de laborator nr. 10.
Lucrare de laborator №10 Formarea titrării (conform Sørensen)
În timpul hidrolizei proteinei datorată ruperii legăturilor peptidice, grupările carboxil și amină cresc simultan în cantități echivalente în ea. Pentru a determina cantitatea de grupe carboxilice, se folosește metoda Serensen.
Aminoacizii în soluții apoase formează săruri intramoleculare, prin urmare, fără blocarea preliminară a grupărilor amino cu formaldehidă, este imposibil să se titreze direct grupările carboxil ale aminoacizilor cu alcalii. În timpul reacției cu formaldehida, gruparea amino își pierde proprietățile de bază.
Compusul metilenic rezultat (metilenamino acid) poate fi ușor titrat cu alcaline.
Prin determinarea cantității de grupări carboxil prin titrare, este de asemenea posibil să se judece conținutul grupărilor aminice, deoarece cantitatea de grupări carboxilice titrate este echivalentă cu cantitatea de grupe aminice legate de formaldehidă. Metoda de titrare permite monitorizarea progresului hidrolizei proteice și studierea acțiunii enzimelor proteolitice.
Sfârșitul hidrolizei proteice coincide cu momentul în care cantitatea de amine și grupări carboxil din hidrolizat încetează să crească și se observă o reacție biuret negativă.
REACTIVI ȘI ECHIPAMENTE:
1) cărbune de animale, zdrobit bine; 2) CH3COOH, 1%; 3) formalin neutru, 20%; 4) fenolftaleină; 5) NaOH, 0,005 N; 6) HCI sau CH3COOH, 1%; 7) baloane conice de 50 ml; 8) pipete pentru 1 și 2 ml; 9) microburete; 10) Cilindru de măsurare de 25 ml.
1. Titrarea grupărilor carboxil în soluția proteică înainte de hidroliză. Se măsoară 1 ml de soluție de albus de ou într-un con, se adaugă 5 picături de soluție formală neutră de 20% și 3 picături de soluție de fenolftaleină 0,5%. Tit de microburet 0.005N. soluție de NaOH până la o culoare roz pal deschis.
2. Titrarea grupărilor carboxil după hidroliza proteică (adică hidrolizat). După 45 sau 90 de minute hidroliza este întreruptă, vasul și se toarnă (pinch) cărbune pentru soluție maronie și fiartă decolorare agitată timp de 5 minute. Hidrolizatul este apoi răcit, turnat într-un cilindru, volumul de lichid este ajustat la 25 ml cu apă distilată și filtrat.
Dozează în balon 1,25 ml hidrolizatul s-a adăugat 3 picături de soluție de fenolftaleină și se neutralizează cu o soluție 10% de NaOH makrobyuretki la colorație ușor roz. Dacă culoarea este roșu strălucitor atunci când este neutralizată, se adaugă, prin picurare, o soluție de acid acetic 1% la decolorare, excesul de care este neutralizat cu soluție 1% de NaOH până când este ușor roz. Apoi, se adaugă 5 picături de soluție neutră de formalină 20% și soluția decolorată este titrată la 0,005N. soluție de NaOH la o culoare roz roz și cu atenție nota cantitatea de alcalii uzate.
3. Calcularea azotului de grupări amino se face prin cantitatea de alcalii uzate, pe baza normalei sale.
Completați tabelul 5.