Scopul acestei lucrări a fost de a elabora o metodologie pentru cuantificarea unui spectru larg de genotipuri HPV cu risc ridicat oncogen (12 tipuri) pe baza tehnologiei PCR în timp real și evaluarea caracteristicilor sale clinice în condiții de screening.
Materiale și metode
Ca o metodă pentru detectarea și cuantificarea ADN HPV folosit reacția de polimerizare în lanț în timp real. In dezvoltat pentru aceste scopuri „AmpliSens HPV WRC Screen Titer FRT» sistem de testare utilizând principiul amplificării cu sonda excizia 5'-terminal tag-ul specific (TaqMan Assay) și principiul oligonucleotidică typespecific capabili să amplifice fragmente de ADN de mai mulți membri ai grupului filogenetice. Determinarea cantitativă se bazează pe utilizarea de probe standard cu concentrații cunoscute de ADN HPV și ADN-ul uman. Rezultatul este calculat virusul logaritmi echivalente genomice (GE) normalizat la 100 milioane (105) genomul uman. Normalizarea numărul de genomuri permite variatii efect gard materialului clinic nivelare. Prag cantitate relevantă de virus Geng luat egal cu 103 105 genomul uman, care corespunde aproximativ (atunci când se utilizează metoda noastră de prelevare a mostrelor (sonda citologic cervical este plasat în 500 l de mediu cu transportul mucolitice (mediu de transport „AmpliSens“ Producerea -damă FSIS CRIE) și persistenței înainte de livrare la laborator) și metoda de extracție ADN (sorbție a particulelor de siliciu, ADN-Sorb-AM și ADN-Sorb-E, FSIS CRIE)) pragul de 1 pg / ml ADN HPV descris Snijders Lorincz și suma corespunzătoare pragului ve os de balenă. Calificarea cuantifica caracteristicile efectuate pe 99 de probe, caracterizate prin citologie lichid si histologice ca H-SIL și cancerul de col uterin si 305 mostre caracterizate ca modificări normale sau reactive. Toate probele au fost obținute de la pacienții care au suferit de examinare la centrul patologiei cervicale, Departamentul de Obstetrica si Ginecologie MSMSU.
rezultate
Intr-un studiu folosind metodologia dezvoltată a probelor H-SIL și ADN HPV cervicale detectate în 99,0% din cazuri (98 din 99), atunci când sunt administrate la un prag cantitativ 103 GEVPCH (3LG) in 105 genomurile - in 98,0% (97 din 99 ). Într-o singură probă, încărcătura virală a fost de 2,9 lg, care a fost sub pragul de 0,1. La încercarea de a crește pragul la 104 GEVPCH (4LG) numarul 105 genomuri de cazuri identificate H-SIL a fost de 84,8% (84 din 99). Astfel, în cazul displazie severa si incarcatura virala de cancer este, practic, nu scade sub pragul de 103 GEVPCH (3LG) în 105 genomuri, încercarea de a crește pragul duce la o pierdere de sensibilitate.
In investigarea probelor sau standarde modificari reactive ADN HPV detectat în 36,8% din probe (112 din 305) (specificitate de diagnostic pentru detectarea CMM displazie - 63,2%). INTRODUCERE Pragul de semnificație clinică la 103 ET HPV (3LG) in 105 genomurile permise cut HPV 51% probe pozitive rată sau diagnosticați cu jet (57 din 112), ca și cantitatea de virus care conține nesemnificativ. Astfel, atunci când se utilizează o semnificație clinică prag a ADN-ului HPV în eșantioanele sau standardele schimbări reactive detectate în 18,1% (55 din 305), specificitatea diagnostică a crescut cu 18,7% la 81,9%.
concluzie
Am dezvoltat o metodă pentru determinarea cantitativă a 12 genotipuri de HPV asupra ADN-ului pe bază de PCR în timp real și arată că administrarea unei cantități prag clinic semnificative a virusului la 103 ET 105 genomul uman poate imbunatati studiile de specificitate de la 63,2% până la 81,9% pentru menținând sensibilitatea la un nivel ridicat - 98%. Astfel, introducerea unui prag pentru încărcătura virală poate fi recomandată pentru o examinare mai specifică.
Despre Berkegeym Michael
Acest site este experiența mea personală în tratarea oamenilor. Aici puteți găsi un număr imens de articole despre medicină. Vă voi ajuta să vă rezolvați problemele, să începeți o familie, să planificați un copil. Am tratat infertilitatea de mai mulți ani, puteți alege sexul copilului dvs. și data nașterii sale. Vă voi ajuta să stabiliți relații în familie. Tratamentul infertilității la Moscova nu este ușor, dar aproape toți clienții mei câștigă în cele din urmă bucuria de maternitate.
Fotografii cu filmare r
Căutați pe site
Interesele mele
Intrarea la recepție: +7 (926) 221 14 39