Metode de cercetare în histologie. Pregătirea preparate pentru microscopie.
Metode de cercetare în histologie includ pregătirea diapozitive histologice și le studieze cu ajutorul luminii sau microscopie electronica. Preparatele histologice sunt accidente vasculare cerebrale, imprimeuri de organe, preparate de film, subțire corpuri piese secționate, vopsite sau altfel colorantului (investigate de asemenea nativ - secțiuni necolorate) plasate pe o lamelă de sticlă, închise în balsam și acoperite cu un capac de sticlă subțire.
Pentru a produce pregătire histologică după luarea materialului necesar pentru a face știftul de blocare într-unul sau altul fixativ (formol, alcool si pentru microscopie electronica - în glutaraldehidă și tetraoxid de osmiu). Acest lucru se face pentru a preveni procesele autolizei și structura corpului menținând, aproape de viață. Aceasta este urmată de etapele de desecare corp bucată în alcooli de creștere a concentrației și xilen în vederea țesut de etanșare, este necesar pentru producerea de felii subțiri. Pentru a face piesa corp are o densitate mai mare și omogenitate, asigurând tăiere ridicată, se realizează într-un mediu organic se umple - ceara, celloidin (pentru microscopie optică) și rășină organică (Epon, Araldite, durkupan) - pentru electron examen microscopic.
Există, de asemenea, metode naturale de material de fixare. cele mai comune, care este un corp rapid bucată congela prin azot zhidko.go și alte mijloace. Tăierea materialului congelat cu ajutorul unui dispozitiv special - un criostat sau congelare microtom.
Grosimea feliilor destinate microscopie cu lumină. Acesta nu trebuie să depășească 4-5 microni pentru e - 50-60 nm (astfel de secțiuni ultrasubțiri au fost realizate pe un dispozitiv special ultratome folosind cuțite diamant de sticlă sau și modul de tăiere automată).
După ce a primit secțiuni în care sunt plasate pe lame de sticlă, urmată de eliberarea etapele de secționare mediu de etanșare (microscopie cu lumină) și pentru a da felii de contrast de culoare. combinație hematoxilină, miezul de marcare este utilizat cel mai frecvent în rândul coloranților histologice (molecula de acid) și colorarea eozina selectiv moleculele de proteină (de colorant citoplasmatică).
Prin colorarea secțiunilor de capăt încheie în conservarea mediului (balsamuri canadian, pin) si sunt acoperite cu un capac de sticlă.
Metoda principală de studiu histologic celule, țesuturi și organe este o microscopie cu lumină. In lumina microscopului pentru iluminarea obiectului folosind razele spectrului vizibil. microscoapele moderne permit luminii să obțină rezoluție de aproximativ 0,2 microni (microscop puterea de rezoluție - este cea mai mică distanță la care două puncte situate în apropierea vizibile ca individual). Soiurile lumina microscopie - contrast de fază, interferență, polarizare, camp intunecat si altele.
microscopie cu contrast de faza - metoda de a studia celule sub un microscop optic echipat cu dispozitiv cu contrast de fază. Datorită trecerea de faza a undelor de lumină crește contrastul structurilor obiectului investigat la microscop un design care ne permite de a studia celulele vii.
microscopie Interferența. Microscopul interferență care se încadrează pe fasciculelor de lumină obiect bifurcat - un fascicul trece prin obiect, celelalte - rateaza. În reunificarea ulterioară a unei grinzi de imagine interferență a obiectului. Conform defazajul fasciculului în raport cu alta pot fi evaluate concentrațiile diferitelor substanțe din obiectul supus încercării.
microscopie Polarizare. Microscoapele acestui tip de grindă se împarte în două fascicule polarizate în plane reciproc perpendiculare. Trecând prin țesătura cu o orientare moleculară puternică, grinzile sunt întârziate în raport cu altele, datorită inegale lor de refracție. Defazajul rezultantă indică birefringența structurilor celulare (în acest mod au fost investigate, cum ar fi myofibrils).