Utilizare: biotehnologie, enterotoxină termo-labilă, LT-toxina, toxoidul, Citrobacter diversus, vaccin. REZUMAT izobeteniya: tulpini noi Citrobacter diversus 930 are înaltă capacitate producătoare de toxine. Tulpina a fost depozitată în GISCO de colectare și are un număr de serie 244. Tulpina poate fi utilizată pentru a produce toxina termolabilă și toxoidul în producerea de vaccinuri. Tabelul 1.
Invenția se referă la biotehnologie și poate fi utilizată pentru a produce căldură enterotoxina labilă (LT-toxină) și Citrobacter diversus cu producerea de vaccin toxoid.
Scopul invenției este o tulpină de Citrobacter diversus 930 având o capacitate crescută produce toxine.
Tulpina Citrobacter diversus GISCO N 244 se caracterizează prin următoarele caracteristici.
Atunci când în creștere pe medii convenționale nutritiv universal, la o temperatură a tulpinii 35-36 o C pe o suprafață de mediu nutritiv creste pentru a forma colonii mari. Când cultivate în bulion Hottinger (pH 7,2-7,4), temperatura de 35-36 ° C, timp de 20 ore cauzează turbiditate uniformă pentru a precipita.
Metode pentru determinarea activității LT enterotoxin-: administrarea siubplantară la șoareci cântărind 15-16 g, 0,05 ml centrifugatul 20-40 oră cultură bulion provoacă umflarea labelor de cel puțin 120 mg. Aksenova EV 1980; intranazal 0,05 mg 20-40 oră bulion de cultură provoacă moartea de 95% din șoarecii masculi cântărind 15-16 g timp de 20 min la fenomene convulsii tonice și asfixie Voyno-Yasenetsky NK 1967 . Injectarea intramusculara de 300 de milioane de 20 de ore de cultură de celule bulion microbiene determină necroza pielii iepure de 3,5 cm în diametru; experiență în subțire intestin balama iepure atunci când se administrează 500 Mill. bw 20 de ore de cultură în bulion dă un rezultat pozitiv (v / l = 1,2); Greta la 56 ° C timp de 45 min centrifugatul 20 de ore de cultură bulion provoacă umflarea labe șoareci la 30 mg, piele de iepure fără a provoca necroza. Greta la 100 o C cultură de 20 de ore nu produce acumularea de lichid în buclă intestinală izolată de iepure de un strat subțire (v / l = 0,3).
Condițiile de depozitare a culturii după uscare la leofilnoy crescute în% IPA 0,3 (pH 7,2-7,4), inundat cu parafină lichidă sterilă la temperatura de 4 ° C.
Mediu pentru propagarea Hottinger bulion (pH 7,2-7,4), conținând 5% eritrocite de iepure la o temperatură de 35-36 ° C timp de 20 ore.
Rezistent la penicilină, tetraciclină, lincomicină, eritromicină, cloramfenicol, ampicilină.
EXEMPLUL 1 0,1 ml de 1 mld. Cultură zilnică de suspensie agar în soluție salină semănate în bulion steril Hottinger (5 ml pH 7,2-7,4), incubate într-un termostat la 36 ° C timp de 20 ore, se centrifughează la 6000 rot / min, timp de 7 min. Supernatantul rezultat (centrifugat) într-un volum de 0,05 ml administrat subplanarno laba stânga spate a șoarecilor masculi cântărind 15-16 g După 24 h, animalele sunt sacrificate prin eter și amputate la articulația gleznei au fost cântărite balanța de torsiune, tulpina centrifugatul Citrobacyer diversus GISCO N-a dat 244 diferența între picioare stâng și drept de cel puțin 120 ml, 20 de tulpini rămase capabile să producă enterotoxina LT-65 la 90 mg. Controale native bulion Hottinger steril (pH 7,2-7,4) și se încălzește la 56 ° C centrifugatul de 20 de ore de cultură în bulion de 30-35 mg, respectiv.
Rezultatele sunt prezentate în tabel.
Exemplul 2. 0,1 ml de 1 mld. Insamantate agar zilnic în cultură în suspensie Hottinger bulion (pH 7,2-7,4), incubate într-un termostat la 36 ° C timp de 20 de ore și 500 Mill. Bw suspensie în volum de 1 ml se administrează în segmentul izolat de intestine de iepure balamale subțiri. După 16 ore, animalele au fost sacrificate și embolie aer calculat un raport de volum exudat la lungimea segmentului (v / l). In acest 20 de ore de cultură bulion din tulpina Citrobacyer diversus GISCO N 244 a fost capabil să producă o acumulare de lichid într-o cantitate mare, iar indicele v / l a fost de 1,2. Cele 20 de tulpini rămase capabile să producă JIT component enterotoxina v / l a variat de la 0.9-1.0. Atunci când se administrează bulion steril Hottinger și încălzit la 100 ° C, 20 de ore de cultură în bulion de raportul volum de lichid acumulat la lungimea segmentului a fost de 0,25 și respectiv 0,3.
Bacterial Citrobacter diversus GISCO N 244, având un complex factor de patogenitate.