Titrul virusului - aceasta este cantitatea de virus conținută în unitatea de volumul materialului. Deoarece cantitatea de virus nu poate fi exprimată în mod obișnuit utilizat (volum, greutate și așa mai departe. N.) Unitățile resort la măsurarea în unități de unități de acțiune sau activitate. Și virusuri infecțioase au activitate hemaglutinantă. Prin urmare, unitatea de cantitatea de infecții virale și hemaglutinant.
Dimensiunea acestor unități zivisit completă și raportul dintre virionii defecte în metoda de titrare obiect suspensie utilizată și de alți factori. În practică, acesta a fost folosit trei tipuri de numărul de unități de virus: 1 - unități infecțioase de leziuni locale cauzate de virusuri și evaluate într-un singur efect; A 2 - unități infecțioase de 50% din virusurile din sensibile obiectele vii evaluate statistic; 3a - hemaglutinante unități.
Metoda cea mai versatilă de determinare a titrului virusului în unități de acțiune infectantă 50%. Conform acestei metode, per unitate de cantitate de virus este adoptat o astfel de doză care este capabilă să provoace efectul infecțios în 50% din obiectele de test inoculate. Acesta este desemnat ca doză efectivă ED50- 50%. Numărul de doze de virus per unitate de volum a materialului, și va exprima titrul viral în materialul.
Deoarece obiectele de testare în laboratoarele de obicei folosesc șoareci albi, embrioni de pui și culturi de celule în care acțiunea virusului infecțios poate manifesta moartea, simptomele clinice și modificări de efect citopatic pathoanatomical. Pentru fiecare sensibilitate virus selectat la obiectul supus încercării și acțiunii sale formă de înregistrare infecțioasă, prin care se evaluează efectul infecției. În funcție de tipul de test obiect și forme de acțiune infectantă ED50 ia una dintre următoarele tipuri prezentate în tabelul 6.
1 este o doză DL50 de virus care ucide 50% dintre animalele de laborator (șoareci tipic alb);
1 ID50-doza de virus care cauzează simptome clinice sau modificări patologice în 50% dintre animalele de laborator infectate;
ELD 1 - o doză de virus care ucide 50% dintre embrioni de pui;
1 EID50 doza de virus care determină modificări patologice în 50% din embrioni de pui infectate;
1 TSPD50- doza de virus care cauzează un efect citopatic în 50% din culturi de celule infectate (în mod tipic tuburi cu culturi de celule).
Numărul ED50 (LD50 ID ELD50 sau TSPD50 EID50) virus conținute într-o unitate de volum material conținând virus, și va fi titrul de expresie (T) a virusului în acest material. De exemplu, T = 103.48 TSPD50 / 0,1 ml înseamnă că fiecare 0,1 ml de material care conține virusul este conținut 103'48 de doze de virus (m. E. Peste 1000, dar mai mică de 10.000, și anume 103.48 = 3020 ), fiecare dintre acestea poate provoca un efect citopatic în 50% din eprubete cu cultura de celule.
Respectivele unități 50% din infecția cu virus (DL50, ID50, ELD50, EID50, TSPD50) sunt utilizate în cazurile de evaluare infecțioase a virusului cu statistic evaluate efectul are loc, atunci când păstrarea infecție a virusului se realizează prin efectul letal, simptome clinice, modificări patologice sau efect citopatic.
Titrarea virusului printr-o acțiune infecție 50% - tehnica cea mai versatil este potrivit pentru aproape orice titrare a virusului, dacă vă ridicați sensibile la acesta în direct de sistem (obiect text). Cu toate acestea, această metodă de titrare a virusului este destul de consumatoare de timp și necesită un calcule statistice lungi.
Problema determinării titrul virusului în unități de acțiune infecțioase 50% (DL50, ID50, ELD50, EID50, TSPD50) se reduce la este de a găsi o diluare a materialului care conține virusul testat în cantitate de doză infecțioasă care să conțină un ED50 și apoi calcula cât de mult unități de virus conținute în același volum de material conținând virus, care va fi un indicator al titrului virusului în acest material.
Pentru a rezolva această problemă, în primul material care conține virusul cercetat a fost preparat printr-o serie de diluții de 10 ori succesive. diluții de 10 ori de încărcare, din două motive:
În primul rând, așa cum se vede din grafic al efectului o doze infecțioase de virus (Fig. 35), curba dependenței aproape de punctul corespunzător ED50, se apropie de o linie dreaptă, la un interval considerabil.
Aceasta înseamnă că într-un anumit interval, al cărui centru se află la punctul ED50 între logaritmul dozei (diluție) a efectului virusului și infecțioase există o relație rectilinie, r. E. Cantitatea de efect infecțios este proporțională cu logaritmul dozei de virus (sau o diluție) în regiunea de mici și mai ales doze mari de această relație este rupt;
în al doilea rând, la 10 ori mai mare de diluare facilitează calculele ulterioare.
volume egale a câte diluții de 10 ori testului inoculat cu materiale grupe egale conținând virusuri susceptibile la acest virus viu obiecte de test (șoareci, embrioni de pui sau culturi de celule). În același timp, în fiecare grup trebuie să aibă cel puțin 4-6 obiecte de test, ca mai puține valoare calculată statistic a titrul virusului va fi prea mare de eroare (statistica este mai precisă decât un număr mai mare de date de intrare se bazează) infecție .După ia în considerare rezultatul acțiunii virusului (moartea, simptomele clinice, modificările patologice sau CPE) în obiectele infectate și care determină diluarea în virusul sa dovedit a fi eficace cu 50% a obiectelor sensibile. Diluția dând 50% efect este calculat prin interpolare rectilinie. Când o astfel de diluare găsit, se consideră că un volum de infectare cu virusul, diluat găsit (corespunzând unei 50% efect) de mai multe ori, conține 1 ED50. În aceeași sursă de ecran (nediluat) conținând virusuri materiale astfel de doze (ED50) conține mai multe ori de câte ori lucrurile a fost diluat, 1 a dat ED50. Apoi convertit, cum ar fi unități de 50% infectare a virusului este conținut în volum (ml) unitate material conținând virus, care va fi o expresie a titrului virusului în materialul