În prima etapă de obținere a unei culturi primare are loc îndepărtarea sterilă a fragmentului de țesut animal și perturbarea mecanică sau enzimatică. Țesătura poate fi ușor zdrobit în bucăți mici, care se atașează pe suprafața plăcii de propriul său adezivitate, prezența unor croșete cupei sau de către plasmoid. În aceste cazuri, creșterea celulară se va produce și fragmente de celule care migrează din explante pot fi utilizate pentru Trecerile. Astfel, de exemplu, se pot obține celule dermice cultură - fibroblaști.
Cultura primară poate fi de asemenea obținut prin dezintegrarea țesutului cu enzime, cum ar fi tripsina sau colagenaza. Celulele formate în această suspensie sunt depozitate, atașate și împrăștiată pe suprafața din sticlă sau plastic. Deci, sunt celulele epiteliale, unele celule ale embrionului.
Subcultura cultura primară.
După monostraturile de cultură primară ajunge la o stare, ea poate fi mutat într-un al doilea vas de cultură după tripsina disocierea celulelor și diluții monostrat, adică pasate sau subcultivate.
Pentru culturile în suspensie în cazul subcultura numai diluție suficient.
cultura de celule monostrat Disocierea se realizează prin spălarea monostratului cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) sau PBS cu 1 mM etilendiaminotetraacetat (EDTA), urmată de incubarea cu soluție de tripsină (soluție 0,25% de soluție brută de 0,01 sau 0,025% din compusul purificat) pentru 15 min.
După aceea, tripsina este îndepărtat, celulele sunt suspendate într-un mediu, determină numărul acestora și însămânțate în flacoane noi.
Înlocuirea mediului.
Cum de a stabili că este timpul cultura de celule însămânțate?
Celulele formează un monostrat dens;
colorant indicator își schimbă culoarea (de exemplu, indicatorul de colorant roșu fenol (roșu fenol) își schimbă culoarea de la roșu aprins la un mediu proaspăt la galben-portocaliu într-un mediu cu cultivata pentru unele celule de timp)
46) Ce este o linie celulară stabilă
Stabil linie celulară (stabilă) (linii celulare stabilite) [lat. stabilis - rezistent; Lat. linea - locul de ceva într-un singur rând] - cultura de celule capabile de nelimitat rostuin in vitro. Sunt obținute din culturile de celule inoculate, celulele care dobândește un avantaj selectiv și are o rată crescută de creștere
In vitro (în latină "în sticlă".) - vypolneniyaeksperimentov această tehnologie, atunci când experimentele sunt efectuate "vprobirke" - este zhivogoorganizma. Într-un sens general, acest termen este pusă în contrast terminuin vivo - un experiment in vivo (la om sau un model animal). Multe experimente legate de kmolekulyarnoy biologie, biochimie, farmacologie, medicină, genetică etc sunt efectuate în afara corpului, pe zhivyhkletokili de cultură într-un model de celule libere.
Experimentele in vitro. în acele cazuri în care sunt alternative studiile efectuate pe animale sau umane, sunt considerate mai puțin fiabile, chemin vivo [1] și sunt adesea o etapă preliminară necesară pentru estimarea posibilității și necesității ulterioare issledovaniyin vivo [2]. Cu toate acestea, ele reduc de multe ori prețul fazei preliminare a investigației și vă permit să salvați viața animalelor experimentale.