Celulele primare. Celulele primare - sunt celule derivate din animale și menținute în cultură înaintea primei subcultura (subcultură).
Rezultate Monostraturile de celule sunt subcultivate într-un raport de 1/2 sau 1/4. Celulele se pot menține în continuare ceva timp (aproximativ un an), multe caracteristici ale explantufui originale. Această cultură se numește secundar.
Obținerea culturi de țesuturi primare.
În prima etapă de obținere a unei culturi primare are loc îndepărtarea sterilă a fragmentului de țesut animal și perturbarea mecanică sau enzimatică. Țesătura poate fi ușor zdrobit în bucăți mici, care se atașează pe suprafața plăcii de propriul său adezivitate, prezența unor croșete cupei sau de către plasmoid. În aceste cazuri, creșterea celulară se va produce și fragmente de celule care migrează din explante pot fi utilizate pentru Trecerile. Astfel, de exemplu, se pot obține celule dermice cultură - fibroblaști.
Cultura primară poate fi de asemenea obținut prin dezintegrarea țesutului cu enzime, cum ar fi tripsina sau colagenaza. Celulele formate în această suspensie sunt depozitate, atașate și împrăștiată pe suprafața din sticlă sau plastic. Deci, sunt celulele epiteliale, unele celule ale embrionului.
Subcultura cultura primară.
După monostraturile de cultură primară ajunge la o stare, ea poate fi mutat într-un al doilea vas de cultură după tripsina disocierea celulelor și diluții monostrat, adică pasate sau subcultivate.
Pentru culturile în suspensie în cazul subcultura numai diluție suficient.
cultura de celule monostrat Disocierea se realizează prin spălarea monostratului cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) sau PBS cu 1 mM etilendiaminotetraacetat (EDTA), urmată de incubarea cu soluție de tripsină (soluție 0,25% de soluție brută de 0,01 sau 0,025% din compusul purificat) pentru 15 min.
După aceea, tripsina este îndepărtat, celulele sunt suspendate într-un mediu, determină numărul acestora și însămânțate în flacoane noi.Înlocuirea nutrienților sredy.Kak determină că este timpul cultura de celule însămânțate?
- Celulele formează un monostrat dens;
- colorant indicator își schimbă culoarea (de exemplu, indicatorul de colorant roșu fenol (roșu fenol) își schimbă culoarea de la roșu aprins la un mediu proaspăt la galben-portocaliu într-un mediu cu cultivata pentru unele celule de timp)