Ufa, BSAU, Departamentul de Boli Infecțioase,
zoogigieny și vetsanekspertizy
LABORATOR DE LUCRU № 9
Proprietățile biochimice ale microorganismelor
Scopul instruirii. Pentru a studia diferențierea biochimice a microorganismelor. Distinge între Escherichia și Salmonella în carbohidrați și polioli media care conține (număr de culoare, mediu Endo). Pentru a efectua chimice și examinarea microscopică a culturii și să învețe principalii reprezentanți ai procesului amonificare.
Echipamente și materiale: Cultură amonificatoare microorganisme pe BCH, IPA și MNR (Bac.Mycoides, Bac.Mesentericus, Bac.Subtilis, Pfeiffer fucsin, slide-uri și ochelari de acoperire, microscoape, arzatoare, chibrituri, culturi kulturE.Colli, S.dublinna BCH și IPA și pe medii care conțin carbohidrați și alcooli polihidroxilici (lactoză, zaharoză, glucoză, manitol, dulcitol, etc.), aceste culturi de culturi pe mediu Endo în vase Petri, masele de ulei de cedru: diferențierea biochimice enterobacterii - microbi grupuri de Salmonella enterica. , amonificatoare microorganisme.
procesele vitale ale microorganismelor este strâns legată de activitatea enzimelor. Fiecare tip de bacterii caracterizate prin anumite enzime, care permite de a le diferenția în funcție de alte caracteristici și proprietăți.
Prin diferențiere biochimice, de obicei, în cazul în care au recurs la microorganisme parts multe caracteristici comune: este dificil creștere detectabilă pe medii nutritive, celulele morfológicamente similare între ele, etc. O astfel de similitudine observată între Escherichia și Salmonella ... Atunci când pe lângă capacitatea lor de diferențiere a fermentării zaharurilor în considerare lapte de rulare, pentru a forma gaze și alte proprietăți. Laptele conține lactoză, care fermentează E. coli. Aceasta are ca rezultat o coagulare cauze acide a produsului. Atunci când se plantează în laptele patogen acidului Salmonella nu este produsă.
Proprietățile biochimice - capacitatea microorganismelor sub acțiunea enzimelor scinda compusul organic.
Distinge saccarolitic, proteolitică și proprietăți hemolitice.
Proprietățile saccarolitic de microorganisme - capacitatea microorganismelor sub acțiunea enzimelor sale descompun zaharuri (glucide).
Enzimele microbii formate au capacitatea de a cliva un zahăr (carbohidrați și alcooli polihidrici) la aldehide și acizi. Produse finale de fermentare - dioxid de carbon (CO2) și hidrogen. Alte enzime răspund diferit la aceleași zaharuri. Este proprietatea lor utilizat în diferențierea biochimică a microorganismelor.
proprietăți microbiene saccarolitic studiate in mediu nutritiv lichid, solid și semi-lichide.
Proprietățile saccarolitic în medii lichide. Șuieră detectate în medii (medii cu zaharuri), care sunt un amestec de zahăr și indicator în apă peptonată. Dintre zaharuri utilizate includ lactoză, glucoză, manitol, maltoză, sucroză, arabinoză, dulcitol și altele asemenea. Ca indicatori utilizat neutru roșu de turnesol, primar magenta și t. D. Mediile pot fi lichide, în timp ce tuburile mici Ulenguta scufundate pentru captarea gazului pe fundul tubului „gazovki“ răsturnat (scopul) un capăt închis. Formată în gazul de proces de fermentație dislocă parte a mediului și se acumulează în partea superioară „gazovki“.
proprietăți saccarolitic semisolide medii nutritive cu carbohidrați și indicator BP (amestec de cyan și acid apos rozolovoy) pot fi observate agar coloană gap și acumularea de bule mici în mediul interior și pe suprafața sa, și variația culorii. Dacă indicatorul nu se schimbă neutru (incolor), în mediu acid este nevoie de o culoare albastră alcalină - roșu. Aceeași culoare este vopsit și agar. Culturile pure sunt placate pe mediu și se incubează la o temperatură specifică (pentru patogen - 37 0 C pentru saprofite - 25-30 0 C).
proprietăți saccarolitic pe medii cu nutrienți dense. diferențiere biochimică este realizată pe un mediu și Endo. Endo agar conține lactoză carbohidrați și magenta deschis decolorate, care este incolor în mediu alcalin, iar în mediul acid își recapătă culoarea (roșu).
Când fermentarea acidului microbi lactoza format, recuperarea fucsin culorilor în colonii roșii. E. coli (Escherichia) scindează lactoza și mediul este oxidat. Într-un mediu acid este restaurat și colonii magenta de E. coli pe mediu Endo pătată culoare cărămizie cu o tentă metalică. Culoarea coloniilor de bacterii Salmonella nu se schimba, deoarece acestea nu fermenta lactoza.
proprietăți microbiene proteolitice - capacitatea microorganismelor sub acțiunea enzimelor lor despica proteine (proteine). Proteinele scindate de microorganisme pentru a forma un gaz produs: amoniac, hidrogen sulfurat și indol.
Determinarea conținutului de amoniac. Amoniacul (descompunerea proteinelor produs putrezită) detectarea hârtiei de turnesol schimbare de culoare roz, care în prezența acestei substanțe este albastru. Tubul de semănat, între peretele tubului și dopul este fixat pe hârtie de turnesol cultură roz, care, în prezența amoniacului reacționează cu vaporii și hârtie de turnesol alcalină formată devine albastră. Potrivit albastru în hârtie cu fața de turnesol judecat pe prezența amoniacului.
Determinarea hidrogenului sulfurat. hidrogen sulfurat (produs final al conținând sulf aminoacizi - cistină, cisteină, metionină) poate fi detectată prin utilizarea de benzi de hârtie de filtru de măsurare 1 cm x 15 cm, tratat cu soluție apoasă 5% de acetat de plumb și suspendate deasupra culturii studiate microbi. Atunci când conținutul de hidrogen sulfurat blackens hârtie care se transforma cu acetat de plumb în acid sulfuric. Hidrogenul sulfurat pe formele ammonifiers media de proteine și alte organisme. Potrivit înnegrirea hârtiei de filtru judecat pe prezența hidrogenului sulfurat.
Determinarea conținutului de indol. Indol (produs de reacție triptofan de aminoacizi) detectarea în mediu fără carbohidrați, în special glucoza, care previne formarea acestuia. Indoloobrazovanie - una dintre caracteristicile în determinarea tipului de microbi, de aceea este folosit în diferențierea lor. Există mai multe metode de determinare a indolului (Ehrlich, Salkovskogo, Strogova și colab.), Dar cel mai simplu și accesibil de la ei - Morelli metodă: Determinarea este realizată folosind benzi de hârtie de filtru îmbibată cu soluție fierbinte saturată 12% apoasă de acid oxalic și se usucă într-un cuptor . Hârtie suspendată în același mod ca și determinarea produselor Amonificare. Cultura a fost crescută timp de trei zile într-un cuptor și apoi determinarea interacțiunii produselor metabolice microbiene și acid oxalic. partea de jos a hârtiei roz test indică prezența indolului.
Determinarea catalazei. Enzima catalaza descompune peroxid de hidrogen la oxigen și apă. Pentru definiția sa la o picătură de sticlă este aplicat 2-3% soluție de peroxid de hidrogen și aceeași cantitate de cultura microbiană. În prezența acestui tip de microbiene catalaze stativ bule de gaz (oxigen).
Proprietățile hemolitica microbi - capacitatea microorganismelor sub acțiunea enzimelor sale descompun hemoglobina.
Unele specii de bacterii în procesul vital al produc substanțe speciale cu liză (dizolvare) efectul asupra eritrocitelor. Aceste substanțe sunt numite hemotoxin natura proteinelor. Pentru determinarea capacității hemolitice inoculați pe un mediu nutritiv care conține 5% din sânge defibrinat (sânge din ce folosind IPA). Când cultivate pe un mediu de microorganisme din sânge având proprietăți hemolitice în jurul coloniilor formate zone transparente (incolore sau colorate) prin liza eritrocitelor. Hemoliza medii lichide, atunci când mediul devine transparent (sange rosu-lac).
1 familiarizat cu testele care caracterizează proprietățile enzimatice ale bacteriilor (fermentare carbohidrat în medii Hiss, formarea de indol, hidrogen sulfurat, teste catalaza).
2 Utilizând un card cu o descriere a proprietăților culturii bacteriene, folosind determinantul speciilor microbiene priprinadlezhnost instala.
Întrebări pentru auto-cunoaștere
1 Metode pentru determinarea proprietăților saccarolitic organismelor.
2 Metode pentru determinarea proprietăților microorganismelor proteolitice.
3 Metode de determinare a indol, hidrogen sulfurat, amoniac.
4 Determinarea proprietăților hemolitice ale microorganismelor.